一种改进的非变性方法,用于纯化螺旋藻蛋白,螺旋藻蛋白是病原细菌螺旋体螺旋藻的主要膜脂蛋白,Journal of Chromatography B
螺旋藻是几种对节肢动物和植物致病的螺旋体,螺旋形运动菌中含量最高的蛋白质。该两亲蛋白通过脂酰化的N端半胱氨酸锚定在质膜的外表面。尽管在哺乳动物中螺旋体的致病性尚存争议,但显示螺旋蛋白具有高度的免疫原性,并具有免疫调节活性。在本文中,我们描述了一种在非变性条件下纯化螺旋体螺旋藻螺旋蛋白的高效方法。从3-十二烷基-N-肌氨酸钠(Sarkosyl)预处理过的膜中,用3-[(3-胆酰胺基丙基)二甲基铵基] -1-丙基磺酸盐(CHAPS)选择性地提取蛋白质,并通过阳离子交换HPLC纯化至均质。总产率约为60%。洗涤剂枯竭,通过透射电子显微镜观察,通过透析去污剂的去除获得了螺旋蛋白的水溶性胶束,其平均直径为170Å(通过透射电镜观察)。纯化的螺旋蛋白的圆二色光谱和交叉免疫沉淀测定法强烈表明,该纯化方法可以保留天然螺旋蛋白的结构特征。纯化螺旋蛋白的策略(先用温和的去污剂连续两次选择性提取膜蛋白,再进行离子交换层析)应被证明可用于纯化其他Mollicutes细菌的膜脂蛋白,包括对人类,动植物的不同病原体。纯化的螺旋蛋白的圆二色光谱和交叉免疫沉淀测定法强烈表明,该纯化方法可以保留天然螺旋蛋白的结构特征。纯化螺旋蛋白的策略(先用温和的去污剂连续两次选择性提取膜蛋白,再进行离子交换层析)应被证明可用于纯化其他Mollicutes细菌的膜脂蛋白,包括对人类,动植物的不同病原体。纯化的螺旋蛋白的圆二色光谱和交叉免疫沉淀测定法强烈表明,该纯化方法可以保留天然螺旋蛋白的结构特征。纯化螺旋蛋白的策略(先用温和的去污剂连续两次选择性提取膜蛋白,再进行离子交换层析)应被证明可用于纯化其他Mollicutes细菌的膜脂蛋白,包括对人类,动植物的不同病原体。
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