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免疫组化 IHC 操作、统计、作图，一篇讲透

来源：花匠小妙招时间：2025-09-01 11:42

免疫组织化学（immunohistochemistry, IHC）是利用抗原抗体反应已显示某蛋白的表达及定位的实验。

直观的显示了蛋白在组织及细胞或细胞亚结构的定位，又保留了组织样品的结构特征。本文带大家梳理 IHC 的样本准备、操作步骤、拍片、制图、统计，一站式教你搞定 IHC。

操作方法

统计制图

经验分享

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「制图&统计」

如何快速搞定

目前免疫组化尚无统一的标准计量方法，但已有几种科研界已被认可的 IHC 计量方法：

01、积分制

根据细胞染色强度评分为 4 级，无阳性着色（阴性）计 0 分，淡黄色（弱阳性）计 1 分，棕黄色（阳性）计 2 分，棕褐色（强阳性）计 3 分；根据阳性细胞百分比评为 4 级，≤25% 计 1 分，26%-50% 计 2 分，51%-75% 计 3 分，＞75% 计 4 分，将两项评分相乘得出最终评分结果 [1-2]。

02、阳性细胞数

计数阳性细胞数适用于评估某物质是否在组织中存在以及数量，是对该物质数量而不是表达强弱的判别。

对于这类免疫组化，我们直接计数 20 倍镜下随机 5 个视野下的阳性细胞数，再求一个平均数即为这张片子的阳性细胞数。也有计算单位面积下阳性细胞数的方法。通过统计 20 倍镜下的细胞数，在除以镜下面积，得出细胞密度，单位为 cells/mm2。

03、软件测量平均光密度值

Image Pro Plus 软件的计量原理是根据目的蛋白的着色深浅及分布面积来确定目的蛋白的表达量。大家在网上搜索 Image Pro Plus 的操作方法即可，简单上手。

通过测量出每张图片的累积光密度值（integrated option density, IOD）值以及区域面积 area 值，再计算出平均光密度值（mean density）即 mean density=IOD/area，此值反映了目标蛋白的单位面积浓度。最后取每个样本的 5 个随机区域 mean density 的平均值即为此样本的值。

以上为 3 种免疫组织化学常用的计量方法，希望对大家免疫组化实验数据处理有所帮助，少走弯路。

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配图｜丁香实验设计团队