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改善植物健康的材料和方法与流程

来源:花匠小妙招 时间:2024-10-02 17:25

改善植物健康的材料和方法与流程
改善植物健康的材料和方法
1.本发明涉及改善植物健康和/或增加植物产量的领域。具体地说,本发明涉及防止、限制或减少植物病原性真菌疾病。
2.考虑到这些目标,本发明提供使用这类材料实现或促进前述任一目标的材料和方法。本发明也提供用于产生这类植物健康组合物的材料和方法。
3.发明背景
4.在控制植物病原真菌领域,已知使用生物农药。生物农药通常胜过传统合成性杀真菌剂,原因在于通常认为它们毒性更小,对目标疫病更有特异性,在自然环境下可更快降解并且可以减少常规农药使用,尤其在一体化疫病管理计划中如此。在本发明的上下文中,两类生物农药有特殊意义:作为天然存在物质的生物化学农药及其中微生物为活性成分的微生物农药。本发明尤其意在促进这类生物农药的产生及改善其功效。
5.相比常规农药,生物农药通常生产更昂贵并且因此经济上劣势,尽管它们有生态优势。对控制植物病原真菌,一般已经培养孢子形成性细菌。例如,ryu等人(applied biochemistry and biotechnology 2019)描述了培养用来产生杀镰孢菌素(fusaricidin)的类芽孢杆菌菌株的培养基和方法。同样地,wo2018183383描述了用于类芽孢杆菌菌株以产生杀镰孢菌素的培养基和培养方法。在这两份公开中,培养培养基或适应于各个细菌菌株并且因此不能通用化于其他杆菌,或它们依赖于昂贵的培养基组分,尤其酵母提取物,这导致相应产生的生物控制剂的价格如此升高,从而它们可能难以同传统合成性杀真菌剂竞争。
6.本发明想要减少或克服现有技术的前述缺点,与此同时提供基于微生物或衍生自微生物的植物健康促进组合物。具体地说,本发明想要提供培养基,所述培养基(1)可用于多种生物控制性微生物和(2)减少对非鼓励性氨基酸源(例如酵母提取物)的需求,和/或(3)尤其增加所述微生物产生抗真菌剂。在这个方面,本发明还想要提供基于本发明发酵培养基的培养方法。
7.发明概述
8.本发明相应地提供用于产生植物健康促进性微生物,优选地抗真菌性微生物的发酵培养基,其包含
[0009]-烟酸和生物素,
[0010]
其中发酵培养基中烟酸的浓度是至少0.1mg/l、优选地至少2mg/l、更优选地至少5mg/l、更优选地5-100mg/l和更优选地10-100mg/l,并且
[0011]
其中发酵培养基中生物素的浓度是至少0.01mg/l、优选地至少0.05mg/l、更优选地0.05-1000mg/l、更优选地至少0.12mg/l、更优选地0.12-1000mg/l,
[0012]

[0013]-甲硫氨酸,
[0014]
其中发酵培养基中甲硫氨酸的浓度是至少0.01g/l、优选地至少0.1g/l、更优选地至少0.2g/l、更优选地0.2-3g/l。
[0015]
本发明进一步提供发酵方法,所述方法包括培养微生物培养物的步骤,所述微生
物培养物包含一种或多种植物健康促进性微生物或由其组成,
[0016]
其中本发明发酵培养基的内容物在至多72小时的时间范围内提供给培养物。
[0017]
本发明也提供通过本发明发酵方法可获得或获得的植物健康促进组合物。
[0018]
另外,本发明提供在其表面上包含本发明组合物的植物材料、优选地植物繁殖材料。
[0019]
本发明也提供本发明植物健康促进组合物的用途,用于防止、限制或减少植物病原性真菌疾病和/或改善植物健康和/或增加植物产量。
[0020]
并且本发明提供一种用于防止、限制或减少植物病原性真菌疾病和/或增加植物健康的方法,所述方法包括向植物、其部分或繁殖材料或向植物应在其中生长的土壤施加有效量的本发明组合物。
附图说明
[0021]
图1显示光密度(od)对培养基组成的依赖性。烟酸单独增长占据大部分的微生物生物量增长,如od所佐证。
[0022]
图2显示实施例2培养中最终od的形成依赖于烟酸浓度。随着烟酸浓度升高,实现最大细菌生长。
[0023]
图3显示实施例2里所获得的发酵液中总杀镰孢菌素a、b和d的浓度。杀镰孢菌素浓度在较高的烟酸初始浓度升高。在大约10mg/l烟酸时,杀镰孢菌素浓度的升高开始趋稳。
[0024]
图4显示最终od依赖于生物素浓度。在缺少生物素的情况下,抵达最大细菌生长速度的时间明显延迟并且最终生物量浓度降低。
[0025]
图5显示48小时发酵后发酵液中杀镰孢菌素的浓度。杀镰孢菌素浓度在初始酵母提取物含量最低且dl-甲硫氨酸初始浓度高的培养基中最高并且在升高的酵母浓度时不进一步升高。
[0026]
图6显示光密度的形成依赖于培养基组成。如通过od增加所示的细菌生长速度在相比完全酵母提取物培养基,包含降低含量的酵母提取物及升高浓度的dl-甲硫氨酸和烟酸的那些培养基中维持。
[0027]
图7显示相对于含有酵母提取物的培养基的最大杀镰孢菌素浓度,杀镰孢菌素浓度的形成依赖于培养基组成。杀镰孢菌素浓度在包含降低含量的酵母提取物及升高浓度的dl-甲硫氨酸和烟酸的那些培养基中较高。
[0028]
图8显示od的形成依赖于盐存在。在盐存在下,如依照光密度所示的最大细菌生长延长。
[0029]
图9显示杀镰孢菌素浓度的形成依赖于盐存在。与不添加盐的相应培养基相比,在盐存在时杀镰孢菌素浓度升高更快并且抵达更高最大值。
[0030]
图10显示氧转移率(otr)的形成依赖于培养基组成。对糖源浓度归一化时,与现有培养基相比,本发明培养基的如依照otr所示的最大细菌代谢活性最高。
[0031]
图11显示杀镰孢菌素浓度(杀镰孢菌素a、b和d总和)的形成依赖于培养基组成。对糖源浓度归一化时,与现有培养基相比,本发明的培养基的杀镰孢菌素浓度最高。
[0032]
图12显示在不同培养基中培养各种植物健康促进性微生物后无细胞培养物滤液对抗禾谷镰刀菌(fusarium graminearum)的功效。每种方案中使用相同浓度的碳源。总体
上,对于本发明培养基中培养那些生物后获得的滤液的功效改善。
[0033]
图13显示在培养类芽胞杆菌(paenibacilus)后无细胞培养物滤液对抗灰葡萄孢(botrytis cinerea)的功效。总体上,对于本发明培养基中培养后获得的滤液的功效改善。
[0034]
图14显示与不同培养基中的野生型祖细胞相比,对18种多粘类芽孢杆菌(paenibacillus polymyxa)化学ntg突变体所获得的杀镰孢菌素a、b和d总和的归一化浓度。在ntg化学诱变后,与复合培养基相比,本发明的极限培养基中杀镰孢菌素产量在18种受测突变体的15者中显著增加。另外,对于7种突变体,与复合培养基中野生型菌株的杀镰孢菌素产量相比,杀镰孢菌素产量在极限培养基中明确地更高。仅4种突变体明确地显示复合培养基中杀镰孢菌素产量改善。
[0035]
图15显示如图14中所述的相同株和培养基的总杀镰孢菌素a、b和d产量。通过总杀镰孢菌素a、b和d浓度除以od600近似估算产量。对于全部突变体,与野生型相比,杀镰孢菌素产量在本发明的极限培养基中均增加。在复合培养基中培养时与野生型相比,仅一个突变体显示改善的杀镰孢菌素产量。
[0036]
发明详述
[0037]
本发明提供发酵培养基。根据本发明,发酵培养基为维持或生长微生物的固体、半固体或优选地液体培养基。本发明的发酵培养基优选地适于在生物反应器罐中培养微生物。根据本发明,术语“生长”、“培养”和“发酵”微生物可互换地使用并且指一个过程,其中一种或多种微生物与发酵培养基接触,优选地浸没于其中,所述发酵培养基如此维持这些微生物的代谢,从而从发酵培养基获得的养分允许微生物繁殖并且任选地还允许其形成孢子。
[0038]
本发明发酵培养基适合并且设计用于产生植物健康促进性微生物。植物健康促进性微生物可以充当微生物性生物农药。用于本发明发酵培养基中培养的微生物优选地是原核微生物。下文描述合适的和特别优选的微生物。微生物通过抑制植物病原体生长促进植物健康,例如通过以这类病原体为食或防止它们成熟或后代生成、尤其抑制真菌孢子生成而促进植物健康。另外或备选,微生物还可以产生抑制一种或多种植物病原体的代谢物。例如,几种类芽孢杆菌属(paenibacillus)微生物产生在孢子中富含或与之附着的杀镰孢菌素。当孢子施加至植物组织时,产物或发酵液中存在的杀镰孢菌素直接抑制或杀伤真菌性植物病原体并且已萌发和正在生长的细菌细胞进一步确保长期供应这类抗真菌性化合物。
[0039]
本发明的发酵培养基优选地适于或适应于培养如本文所述的抗真菌性微生物。本发明的术语真菌应广义理解并且指在植物上造成形成霜霉病、腐病、萎蔫病、枯病或斑病的任何微生物。尤其,根据本发明,术语真菌指造成本文所述的真菌疾病中任一者的微生物。本文还描述了对本发明有特殊意义的真菌。相应地,术语抗真菌性微生物或抗真菌性化合物指能够防止、限制或减少如本文所述的一种或多种真菌所致植物病害的微生物或组分或物质。
[0040]
本发明的发酵培养基包含烟酸、生物素和甲硫氨酸。已经令人惊讶地发现,与微生物标准培养基相比,这些组分不仅促进植物健康促进性微生物生长,尤其类芽孢杆菌属微生物生长,还增加本发明培养基中发酵的微生物的抗真菌活性。另外,本发明发酵培养基的组分令人惊讶地允许减少非鼓励性培养基组分、尤其酵母提取物的含量,而不减少在本发明发酵培养基中培养的微生物的抗真菌活性。
[0041]
除非本文中另行说明,否则本发明发酵培养基的组分的浓度基于相应物质本身计算。例如,当本发明的发酵培养基含有其盐或酯形式的甲硫氨酸时,该浓度必须因此升高以补足额外的盐或酯组分。
[0042]
另外,除非明确地反向宣称,否则每单位体积发酵培养基的发酵培养基组分的浓度指所添加组分的量并且因此不必然地指每单位体积所述组分的总量。在本发明的发酵培养基包含复合培养基组分、尤其非鼓励性组分及尤其酵母提取物或酵母自溶产物情况下,忽略因复合培养基组分中这类物质存在所产生的浓度。例如,当本发明的发酵培养基包含10g/l酵母提取物时,则本发明发酵培养基的组分还按每单位体积的相应量添加,例如优选地添加5-100mg/l烟酸、0.05-1000mg/l生物素和0.2-3g/l甲硫氨酸。
[0043]
如本文所述,添加烟酸不仅促进植物健康促进性微生物生长,例如类芽孢杆菌属微生物生长,还有利地导致杀镰孢菌素产量增加。鉴于ryu等人2019年已经描述据称优化用于产生杀镰孢菌素的发酵培养基的前述公开,这非常令人惊讶。
[0044]
已经进一步令人惊讶地发现,添加生物素对促进植物健康促进性微生物生长,例如类芽孢杆菌属微生物生长并非必需,但有利地促进这类微生物生长。在联用时,添加烟酸和生物素允许植物健康促进性微生物生物量和(如适用)相应孢子快速生成。实质上,因此有利地缩短用来产生本发明植物健康促进组合物所必备的时段。这转而增加用来产生本发明植物健康促进组合物的发酵厂每年的输出量,因而改善本发明植物健康促进组合物的成本效应。
[0045]
还已经令人惊讶地发现,对于降低非鼓励性培养基组分(尤其酵母提取物或酵母自溶产物)的含量,而不损害本发明发酵培养基中发酵的植物健康促进性微生物产生的抗真菌性化合物产量,甲硫氨酸是必需组分。特别令人惊讶的是,甚至降低酵母提取物含量达85%后,发酵结束时杀镰孢菌素的浓度甚至已经升高,而发酵并未耗时更长。在这个方面,添加甲硫氨酸如同添加烟酸和生物素那样有利地允许减少发酵出设定量的抗真菌性化合物(尤其设定量的杀镰孢菌素)所需的时间和/或当发酵时间未减少时增加这类组分的输出量。
[0046]
本发明发酵培养基中烟酸的浓度是至少0.1mg/l、优选地至少2mg/l、更优选地至少5mg/l和更优选地5-100mg/l。如上文所述,这就是说,向一升发酵培养基添加至少0.1mg、优选地至少2mg、更优选地至少5mg、更优选地5-100mg和更优选地10-100mg。
[0047]
本发明发酵培养基中生物素的浓度是至少0.01mg/l、优选地至少0.05mg/l、更优选地0.05-1000mg/l、更优选地至少0.12mg/l、更优选地0.12-1000mg/l。还如上文所述,这就是说,向一升发酵培养基添加至少0.01mg、优选地至少0.05mg、更优选地0.05-1000mg、更优选地至少0.12mg、更优选地0.12-1000mg。
[0048]
本发明发酵培养基中甲硫氨酸的浓度是至少0.01g/l、优选地至少0.1g/l、更优选地至少0.2g/l、更优选地0.2-3g/l。如上文所述,这就是说,向一升发酵培养基添加至少0.01g、优选地至少0.1g、更优选地至少0.2g、更优选地0.2-3g。
[0049]
本发明的发酵培养基优选地还包含缓释氨基酸源。已经令人惊讶地发现,通过提供缓释氨基酸源替代按相当浓度供应各种氨基酸可以增加抗真菌物质合成的速度。尤其是,缓释氨基酸源如大豆粕替换为等量的游离氨基酸可能二倍或三倍延迟类芽孢杆菌所产生杀镰孢菌素达到终浓度。
[0050]
缓释氨基酸源选自一种或多种蛋白质源、一种或多种蛋白质混合源及较不优选的,一种或多种非鼓励源。那些缓释氨基酸源还可以包含一种或多种蛋白质源和一种或多种蛋白质的混合物、水解物源、一种或多种蛋白质源和一种或多种非鼓励源、一种或多种蛋白质水解物源和一种或多种非鼓励源,以及一种或多种蛋白质源、一种或多种蛋白质水解物源和一种或多种非鼓励源的组合。
[0051]
本发明缓释氨基酸源的蛋白质源选自玉米浸液、乳蛋白、脱脂乳蛋白、乳清蛋白、酪蛋白、豌豆蛋白、棉籽蛋白、小麦面筋蛋白、猪肉蛋白、牛肉蛋白、明胶、卵蛋白、鱼肉蛋白、微生物蛋白、大豆蛋白和大豆粕。优选的蛋白质源是玉米浸液、豌豆蛋白、棉籽蛋白、微生物蛋白和大豆粕,更优选的蛋白质源是玉米浸液、大豆蛋白和大豆粕,最优选地蛋白质源是大豆粕。出于本发明目的,蛋白质源可以处于任何形式,例如,低脂或脱脂大豆粕或低脂大豆粉和烤制或非烤制的大豆粕。
[0052]
本发明那些缓释氨基酸源的蛋白质水解物源选自以下者:一种或多种前述蛋白质源的水解物、胰蛋白(来自蛋白质混合物-胰蛋白酶消化物的蛋白胨)、蛋白-蛋白胨、来自动物蛋白的蛋白胨、酪蛋白水解物、来自酪蛋白的蛋白胨、胰蛋白胨(来自酪蛋白的蛋白胨)、来自明胶的蛋白胨、乳白蛋白水解物、肝脏水解物、来自肉的蛋白胨、来自猪心的蛋白胨、来自植物蛋白的蛋白胨、来自蚕豆的蛋白胨、来自玉米的谷蛋白水解物、来自豌豆的蛋白胨、来自马铃薯的蛋白胨、来自大豆的蛋白胨、来自大豆粕的蛋白胨、来自小麦的蛋白胨、来自真菌蛋白的蛋白胨和马铃薯浸出粉。优选的蛋白质水解物源是来自大豆的蛋白胨、来自大豆粕的蛋白胨、来自小麦的蛋白胨和来自豌豆的蛋白胨。
[0053]
在用于本发明发酵培养基的缓释氨基酸源中,以下来源为非鼓励性:脑提取物,尤其来自猪脑;心脑浸液;心脏提取物尤其来自牛心脏;心脏浸出粉,尤其来自牛心脏;肉类提取物;酵母自溶产物和酵母提取物。这些来源为非鼓励性,因为它们非常复杂并且因此在非鼓励源的不同费用方面,其组成不定,尤其在酵母自溶产物和酵母提取物的情况下如此。这些来源通常比前述蛋白质或蛋白质水解物源更昂贵。因此,甚至可以必要的是,用于特定发酵目的的本发明发酵培养基包含一种或多种非鼓励源,然而,本发明提供诸方式降低这类非鼓励源的含量,而不损害产物质量,例如,植物健康促进性微生物发酵速度或杀镰孢菌素产量。
[0054]
当存在时,本发明发酵培养基中前述缓释氨基酸源的总浓度是0-100g/l、优选地0.1-100g/l。根据本文展示的实施例,本领域普通技术人员能够选择适于其具体发酵需求的浓度。
[0055]
本发明尤其提供一种发酵培养基,其中包含缓释氨基酸源的发酵培养基中酵母提取物和酵母自溶产物的总浓度是0-8g/l、优选地0-3g/l,并且其中特别优选,总发酵培养基中非鼓励源的浓度是0-8g/l、优选地0-3g/l。如本文实施例中所显示,本发明的发酵培养基允许降低非鼓励性缓释氨基酸源的浓度及尤其降低酵母提取物的浓度,而不损害植物健康促进性微生物的生长速度,尤其类芽孢杆菌属微生物的生长速度,并且与此同时,令人惊讶地,还允许杀镰孢菌素产量超过两倍,甚至与用于产生杀镰孢菌素的据称优化培养基相比亦如此。
[0056]
本发明的发酵培养基优选地还包含糖源。糖源充当植物健康促进性微生物发酵中的碳源,并且还充当能量源。糖源根据发酵培养基选自葡萄糖、右旋糖、淀粉、果糖、半乳糖、
木糖、木糖醇、菊糖、山梨醇、岩藻糖、糖蜜、蔗糖、乳糖、甘油、果胶、半乳糖醛酸、麦芽糖、麦芽糊精、麦芽三糖和高级低聚麦芽糖或麦芽糖糖浆或其混合物。出于描述本发明的目的,麦芽糖糖浆的浓度基于以重量计50%含水糖浆计算;当糖浆中麦芽糖浓度小于50%时,麦芽糖糖浆的容量因此须调整。当存在时,培养基中前述糖源的总浓度是至少5g/l、优选地至少40g/l、更优选地50-400g/l。
[0057]
进一步优选地,本发明的发酵培养基还包含
[0058]-mnso4*h2o:1-1000mg/l、优选地8-100mg/l
[0059]-cuso4*5h2o:0.1-100mg/l、优选地2-8mg/l
[0060]-na2moo4*2h2o:0.1-50mg/l、优选地1-5mg/l
[0061]-fe2(so4)3*h2o:0.8-1000mg/l、优选地5-50mg/l
[0062]-柠檬酸:0.1-100g/l、优选地0.5-20g/l
[0063]
并且任选地
[0064]-ca(no3)2*4h2o:0-3g/l、优选地0-1g/l
[0065]
已经令人惊讶地发现,添加这类物质导致植物健康促进性微生物产生抗真菌物质进一步增加。例如,已经惊讶地发现,使用类芽孢杆菌属微生物的发酵中杀镰孢菌素的产生速度和终浓度增加。另外,已经惊讶地发现,在各种植物健康促进性微生物中,从这类发酵收获的无细胞材料的抗真菌活性增加。
[0066]
进一步优选地根据本发明,发酵培养基还包含
[0067]-一种或多种或优选地全部以下氨基酸
[0068]
组氨酸:至少10mg/l、优选地50-1000mg/l,
[0069]
脯氨酸:至少10mg/l、优选地300-1000mg/l,
[0070]
精氨酸:至少10mg/l、优选地50-1000mg/l,
[0071]
谷氨酸盐:至少10mg/l、优选地200-5000mg/l,
[0072]-和任选地一种或多种或,优选地,全部以下氨基酸
[0073]
半胱氨酸:至少10mg/l、优选地50-1000mg/l,最优选地300-600mg/l
[0074]
色氨酸:至少10mg/l、优选地50-1000mg/l,最优选地200-500mg/l。
[0075]
添加前述氨基酸允许降低缓释氨基酸源的含量、优选地降低大豆粉的含量,同时不降低可实现的总杀镰孢菌素浓度。
[0076]
本发明尤其提供优选的发酵培养基,其中
[0077]-发酵培养基中非鼓励性缓释氨基酸源的浓度是0-3g/l,并且发酵培养基中酵母提取物与酵母自溶产物的浓度是0-3g/l,
[0078]-发酵培养基中总糖源的浓度是10-100g/l并且糖源优选地包括麦芽糖、麦芽糊精、麦芽三糖和高级低聚麦芽糖或麦芽糖糖浆或由其组成,并且
[0079]-总缓释氨基酸蛋白质或蛋白质水解物源的浓度是5-100g/l,并且缓释氨基酸源优选地包含大豆粕或其水解物或由其组成。
[0080]
这类发酵培养基允许实现本发明提供的优势。这类发酵培养基在以下实施例中进一步描述。
[0081]
本发明也提供发酵方法。在本发明的发酵方法中,培养微生物培养物。术语“培养”指在培养时间中,通过合适环境下用合适养分饲养一种或多种用来产生所需组分的微生
物,以增加这类组分的量的任何微生物方法。出于本发明目的,合适的养分由本发明的发酵培养基提供或添加至如本文所述的发酵培养基。根据本发明待产生的所需组分可以是微生物自身、其孢子或胞囊或发酵期间微生物产生的代谢物,例如杀镰孢菌素。本发明的微生物是植物健康促进性微生物;本文中描述了优选的微生物。
[0082]
发酵方法可以作为分批法执行,其中在包含发酵培养基的发酵器中提供微生物,随后在发酵器中培养微生物并且最终收获发酵器内容物。发酵也可以作为补料分批步骤执行或包括该步骤,其中在发酵期间添加额外组分至发酵培养基,因而增加发酵器内容物的容积直至达到标称发酵器容积。可以例如通过连续补入额外组分至发酵培养基或通过提供间歇浓剂补料做到这点。还可能的是分批或补料分批发酵,其中在收获期间,发酵器内容物并不完全取出,而留下某个容积于发酵器中作为接种物用于下一个发酵批次。这两种方法可以结合起来。本发明发酵方法也可以作为连续培养物进行,例如作为恒浊培养(turbidostat)或恒化培养(chemostat)。
[0083]
在本发明的发酵方法中,本发明的发酵培养基内容物提供给微生物。这可以通过提供本发明的发酵培养基、添加包含一种或多种植物健康促进性微生物的起子微生物培养物至培养基并且培养该培养物来实现。实施发酵的另一个方式是提供培养基,添加包含一种或多种植物健康促进性微生物的起子微生物培养物至培养基并且在培养中添加本发明发酵培养基的内容物。添加发酵培养基的内容物可以在培养期间按一步、连续地或反复进行。用于这类发酵中的植物健康促进性微生物能够生成孢子时,建议防止饥饿足够时间,旨在延迟孢子形成并且增加营养期细胞的数目直至进入孢子形成状态以实现高的孢子终浓度。
[0084]
在培养期间添加本发明的发酵培养基内容物时,以下有效剂量相对于发酵液体积为优选:
[0085]-烟酸:至少0.04mg/(l d)、优选地至少0.86mg/(l d)、更优选地至少2mg/(l d)、更优选地2-66mg/(l d),
[0086]
生物素:至少0.004mg/(l d)、优选地至少0.02mg/(l d)、更优选地0.02-660mg/(l d)、更优选地至少0.05mg/(l d)、更优选地0.05-660mg/(l d),
[0087]-甲硫氨酸:至少4mg/(l d)、优选地至少40mg/(l d)、更优选地至少80mg/(l d)、更优选地0.08-2g/(l d)。
[0088]
通过求和在任意所选端点的24小时时段期间添加组分的质量并且除以24小时时段期间的发酵液体积,计算出发酵培养基组分的前述有效剂量。例如,假定在发酵开始(t=0)后2小时、4小时、6小时和28小时向其添加组分的发酵。则如果对于本发明发酵培养基的每种必备组分,发酵培养基中t=0时和之后在2小时、4小时和/或6小时添加存在于发酵培养基中的相应组分之总量并且除以24小时时发酵液体积后落在本发明发酵培养基的上文浓度定义或有效剂量范围内,可以执行本发明的发酵方法。然而,如果对于本发明发酵培养基的每种必备组分,发酵培养基中在4小时、6小时和28小时添加后存在的相应组分之总量除以28小时处发酵液体积而落在本发明发酵培养基的上文浓度定义或有效剂量范围内,也可以执行本发明的发酵方法。本发明的发酵方法因此有利地允许灵活剂量方案。
[0089]
优选但不必要的是,本发明发酵培养基的全部必备和/或兼性组分按恒定量添加。相反,还有利的是通过起初按高量添加糖源并且减少在稍后添加过程中添加的量,首先允
许已培养的一种或多种微生物快速生长。另外,优选的是24小时后额外增加缓释氨基酸源的量并且在孢子形成开始时和之后额外地减少缓释氨基酸源的量。
[0090]
本发明发酵培养基的其他各个组分的优选有效剂量是:
[0091]-如权利要求2中限定的总缓释氨基酸源:0-100g/(l d)、优选地0.04-100g/(l d),其中优选地,培养期间发酵培养基中酵母提取物和酵母自溶产物总浓度是0-5g/(l d)、优选地是0-1.3g/(l d),并且其中特别优选,培养期间发酵培养基中非鼓励源的总浓度是0-5g/(l d)、优选地0-1.3g/(l d),
[0092]-如权利要求4中限定的总糖源优选地是至少2g/(l d)、优选地至少17g/(l d)、更优选地12-270g/(l d),
[0093]-mnso4*h2o:优选地1-670mg/(l d)、更优选地3-67mg/(l d)
[0094]-scuso4*5h2o:优选地0.04-67mg/(l d)、更优选地0.86-5.5mg/(l d)
[0095]-na2moo4*2h2o:优选地0.1-10mg/(l d)、更优选地1-5mg/(l d)
[0096]-fe2(so4)3*h2o:优选地0.3-670mg/(l d)、更优选地2-35mg/(l d)
[0097]-柠檬酸:优选地0.04-67g/(l d)、更优选地0.2-15g/(l d)
[0098]-ca(no3)2*4h2o:优选地0-2g/(l d)、更优选地0-0.5g/(l d)
[0099]-优选地一种或多种或更优选地全部以下氨基酸
[0100]
组氨酸:至少4mg/(l d)、优选地21-670mg/(l d),
[0101]
脯氨酸:至少4mg/(l d)、优选地120-670mg/(l d),
[0102]
精氨酸:至少4mg/(l d)、优选地21-670mg/(l d),
[0103]
谷氨酸盐:至少4mg/(l d)、优选地85-670mg/(l d),
[0104]-优选地一种或多种或更优选地全部以下氨基酸:
[0105]
半胱氨酸:至少4mg/(l d)、优选地21-670mg/(l d)、最优选地120-400mg/(l d);
[0106]
色氨酸:至少4mg/(l d)、优选地21-670mg/(l d)、最优选地85-350mg/(l d)。
[0107]
借助这些有效剂量,可以实现上文就各种物质或物质组所述的优势。
[0108]
本发明的发酵方法优选地用一种发酵培养基执行,其中其组分按高于相应最小浓度的浓度存在,例外是非鼓励性缓释氨基酸源。因此,例如,起始发酵培养基包含至少2mg/l烟酸、至少0.05mg/l生物素、至少0.1g/l甲硫氨酸,和优选地还包含至少20g/l麦芽糖糖浆(以重量计50%),并且还优选地包含至少3g/l、更优选地至少6g/l大豆粕。同样地,在本发明发酵培养基的组分在培养期间添加情况下,优选添加的量高于本发明发酵培养基的最小量,非鼓励性氨基酸缓释源除外。
[0109]
本发明的发酵培养基优选地针对本发明发酵方法中所用的微生物,从而微生物培养物优选地包含一种或多种生物控制性微生物或由其组成,所述生物控制性微生物选自:
[0110]-厚壁菌门(firmicutes)、更优选地芽孢杆菌纲(bacilli)、更优选地芽孢杆菌目(bacillales)、更优选地以下任一者:
[0111]
芽孢杆菌科(bacillaceae)、更优选地芽孢杆菌属(bacillus);
[0112]
类芽孢杆菌科(paenibacillaceae)、更优选地类芽孢杆菌属(paenibacillus);
[0113]-变形菌门(proteobacteria)、更优选地γ-变形菌纲(gammaproteobacteria)、更优选地假单胞菌目(pseudomonadales)、更优选地假单胞菌科(pseudomonadaceae)、更优选地假单胞菌属(pseudomonas);
[0114]-变形菌门(proteobacteria)、更优选地β-变形菌纲(betaproteobacteria)、更优选地伯克氏菌目(burkholderiales)、更优选地伯克霍尔德菌科(burkholderiaceae)、更优选地以下任一者:
[0115]
伯克霍尔德菌属(burkholderia);
[0116]
副克霍尔德菌属(paraburkholderia);
[0117]-变形菌门(proteobacteria)、更优选地α-变形菌纲(alphaproteobacteria)、更优选地根瘤菌目(rhizobiales)、更优选地以下任一者:
[0118]
根瘤菌科(rhizobiaceae)、更优选地根瘤菌属(rhizobium);
[0119]
慢生根瘤菌科(bradyrhizobiaceae)、更优选地慢生根瘤菌属(bradyrhizobium);
[0120]
根瘤菌科、更优选地中华根瘤菌属(sinorhizobium);
[0121]-变形菌门(proteobacteria)、更优选地α-变形菌纲(alphaproteobacteria)、更优选地鞘脂单胞菌目(sphingomonadales)、更优选地鞘氨醇单胞菌科(sphingomonadaceae)、更优选地鞘氨醇单胞菌属(sphingomonas);
[0122]-放线菌门(actinobacteria)、更优选地放线菌纲(actinobacteria class)、更优选地链霉菌目(streptomycetales)、更优选地链霉菌科(streptomycetaceae)、更优选地链霉菌属(streptomyces);
[0123]-拟杆菌门(bacteroidetes)、更优选地黄杆菌纲(flavobacteria)、更优选地黄杆菌目(flavobacteriales)、更优选地黄杆菌科(flavobacteriaceae)、更优选地金黄杆菌属(chryseobacterium);
[0124]-放线菌门、更优选地放线菌纲、更优选地棒状杆菌目(corynebacteriales)、更优选地诺卡氏菌科(nocardiaceae)、更优选地红球菌属(rhodococcus);
[0125]
这些分类阶层的成员因其植物健康促进活性和优选地因为其抗真菌活性著称。如实施例中所示,本发明发酵方法中所用的本发明发酵培养基用于产生有效对抗多种真菌性植物病害的本发明产物。尤其,优选以下物种的成员以纳入或形成本发明发酵方法中的微生物培养物:
[0126]
类芽孢杆菌属(paenibacillus)物种:静冈类芽孢杆菌(p.abekawaensis)、深海类芽孢杆菌(p.abyssi)、槭类芽孢杆菌(p.aceris)、醋醅类芽孢杆菌(p.aceti)、沼泽类芽孢杆菌(p.aestuarii)、食琼脂类芽孢杆菌(p.agarexedens)、噬琼脂类芽孢杆菌(p.agaridevorans)、白色类芽孢杆菌(p.alba)、偏白类芽孢杆菌(p.albidus)、白菌落类芽孢杆菌(p.albus)、解藻酸类芽孢杆菌(p.alginolyticus)、冷泉类芽孢杆菌(p.algorifonticola)、碱土类芽孢杆菌(p.alkaliterrae)、蜂房类芽孢杆菌(p.alvei)、解淀粉类芽孢杆菌(p.amylolyticus)、厌氧类芽孢杆菌(p.anaericanus)、南极类芽孢杆菌(p.antarcticus)、嗜抗生素类芽孢杆菌(p.antibioticophila)、洞穴类芽孢杆菌(p.antri)、蜂巢类芽孢杆菌(p.apiaries)、蜂类芽孢杆菌(p.apiarius)、蜜蜂类芽孢杆菌(p.apis)、湖水类芽孢杆菌(p.aquistagni)、花生类芽孢杆菌(p.arachidis)、北极类芽孢杆菌(p.arcticus)、阿萨姆类芽孢杆菌(p.assamensis)、橙色类芽孢杆菌(p.aurantiacus)、偶氮还原类芽孢杆菌(p.azoreducens)、固氮类芽孢杆菌(p.azotifigens)、火山口湖泥芽孢杆菌(p.baekrokdamisoli)、巴塞罗那类芽孢杆菌(p.barcinonensis)、巴氏类芽孢杆菌(p.barengoltzii)、北京类芽孢杆菌
(p.beijingensis)、北方类芽孢杆菌(p.borealis)、罗讷河口类芽孢杆菌(p.bouchesdurhonensis)、牦牛类芽孢杆菌(p.bovis)、巴西类芽孢杆菌(p.brasilensis)、腌菜类芽孢杆菌(p.brassicae)、落地生根类芽孢杆菌(p.bryophyllum)、草地类芽孢杆菌(p.caespitis)、山茶类芽孢杆菌(p.camelliae)、喀麦隆类芽孢杆菌(p.camerounensis)、坎皮纳斯类芽孢杆菌(p.campinasensis)、栗树类芽孢杆菌(p.castaneae)、梓类芽孢杆菌(p.catalpae)、檀香类芽孢杆菌(p.cathormii)、山洞类芽孢杆菌(p.cavernae)、解纤维素类芽孢杆菌(p.cellulosilyticus)、食纤维素类芽孢杆菌(p.cellulositrophicus)、纸厂类芽孢杆菌(p.chartarius)、千叶类芽孢杆菌(p.chibensis)、中国类芽孢杆菌(p.chinensis)、晋州类芽孢杆菌(p.chinjuensis)、解几丁质类芽孢杆菌(p.chitinolyticus)、软骨素类芽孢杆菌(p.chondroitinus)、韩中类芽孢杆菌(p.chungangensis)、火山灰类芽孢杆菌(p.cineris)、西斯洛克类芽孢杆菌(p.cisolokensis)、污染类芽孢杆菌(p.contaminans)、库氏类芽孢杆菌(p.cookii)、巨蛎类芽孢杆菌(p.crassostreae)、黄瓜类芽孢杆菌(p.cucumis)、解凝胶多糖类芽孢杆菌(p.curdlanolyticus)、大田类芽孢杆菌(p.daejeonensis)、达喀尔类芽孢杆菌(p.dakarensis)、p.darangshiensis、达尔文山脉类芽孢杆菌(p.darwinianus)、胡萝卜类芽孢杆菌(p.dauci)、树形类芽孢杆菌(p.dendritiformis)、p.dongdonensis、p.donghaensis、斗山类芽孢杆菌(p.doosanensis)、坚韧类芽孢杆菌(p.durus)、土壤类芽孢杆菌(p.edaphicus)、爱媛类芽孢杆菌(p.ehimensis)、乐金类芽孢杆菌(p.elgii)、披碱草类芽孢杆菌(p.elymi)、根瘤内生类芽孢杆菌(p.endophyticus)、恩施类芽孢杆菌(p.enshidis)、解酯类芽孢杆菌(p.esterisolvens)、醚类芽孢杆菌(p.etheri)、杜仲类芽孢杆菌(p.eucommiae)、粪类芽孢杆菌(p.faecis)、蜂窝状类芽孢杆菌(p.favisporus)、铁矿类芽孢杆菌(p.ferrarius)、蕨类芽孢杆菌(p.filicis)、鞭毛类芽孢杆菌(p.flagellatus)、泉生类芽孢杆菌(p.fonticola)、连翘类芽孢杆菌(p.forsythiae)、抗冷类芽孢杆菌(p.frigoriresistens)、富士山类芽孢杆菌(p.fujiensis)、富士类芽孢杆菌(p.fukuinensis)、甘肃类芽孢杆菌(p.gansuensis)、解明胶类芽孢杆菌(p.gelatinilyticus)、参田类芽孢杆菌(p.ginsengagri)、参畦类芽孢杆菌(p.ginsengarvi)、参腐质类芽孢杆菌(p.ginsengihumi)、参壤类芽孢杆菌(p.ginsengiterrae)、冷境类芽孢杆菌(p.glacialis)、土块类芽孢杆菌(p.glebae)、解葡聚糖类芽孢杆菌(p.glucanolyticus)、解聚糖类芽孢杆菌(p.glycanilyticus)、大猩猩类芽孢杆菌(p.gorillae)、禾谷类芽孢杆菌(p.graminis)、食颗粒淀粉类芽孢杆菌(p.granivorans)、广州类芽孢杆菌(p.guangzhouensis)、沙漠类芽孢杆菌(p.harenae)、向日葵类芽孢杆菌(p.helianthi)、萱草生类芽孢杆菌(p.hemerocallicola)、剪叶苔类芽孢杆菌(p.herberti)、西班牙类芽孢杆菌(p.hispanicus)、保土谷类芽孢杆菌(p.hodogayensis)、大麦类芽孢杆菌(p.hordei)、花园类芽孢杆菌(p.horti)、腐殖质类芽孢杆菌(p.humicus)、湖南类芽孢杆菌(p.hunanensis)、p.ihbetae、p.ihuae、p.ihumii、伊利诺伊类芽孢杆菌(p.illinoisensis)、岛屿类芽孢杆菌(p.insulae)、肠道类芽孢杆菌(p.intestini)、杰米尔类芽孢杆菌(p.jamilae)、李氏类芽孢杆菌(p.jilunlii)、神户类芽孢杆菌(p.kobensis)、噬鞘类芽孢杆菌(p.koleovorans)、韩建类芽孢杆菌(p.konkukensis)、konsid类芽孢杆菌(p.konsidensis)、韩国类芽孢杆菌(p.koreensis)、
kribb类芽孢杆菌(p.kribbensis)、庆熙类芽孢杆菌(p.kyungheensis)、乳酸类芽孢杆菌(p.lactis)、湖泊类芽孢杆菌(p.lacus)、幼虫类芽孢杆菌(p.larvae)、灿烂类芽孢杆菌(p.lautus)、浮萍类芽孢杆菌(p.lemnae)、缓病类芽孢杆菌(p.lentimorbus)、迟缓类芽孢杆菌(p.lentus)、辽宁类芽孢杆菌(p.liaoningensis)、栖泥类芽孢杆菌(p.limicola)、羽扇豆类芽孢杆菌(p.lupini)、金黄类芽孢杆菌(p.luteus)、粘土矿类芽孢杆菌(p.lutimineralis)、浸软类芽孢杆菌(p.macerans)、麦夸里岛类芽孢杆菌(p.macquariensis)、地钱类芽孢杆菌(p.marchantiophytorum)、海泥类芽孢杆菌(p.marinisediminis)、海生类芽孢杆菌(p.marinum)、马赛类芽孢杆菌(p.massiliensis)、玉米类芽孢杆菌(p.maysiensis)、苜蓿类芽孢杆菌(p.medicaginis)、孟德尔类芽孢杆菌(p.mendelii)、嗜中温类芽孢杆菌(p.mesophilus)、甲醇类芽孢杆菌(p.methanolicus)、运动类芽孢杆菌(p.mobilis)、山壤类芽孢杆菌(p.montanisoli)、山地类芽孢杆菌(p.montaniterrae)、本部类芽孢杆菌(p.motobuensis)、黏滑类芽孢杆菌(p.mucilaginosus)、楠府类芽孢杆菌(p.nanensis)、噬萘类芽孢杆菌(p.naphthalenovorans)、象白蚁类芽孢杆菌(p.nasutitermitis)、内布拉斯加类芽孢杆菌(p.nebraskensis)、嗜线虫类芽孢杆菌(p.nematophilus)、烟草类芽孢杆菌(p.nicotianae)、米酒类芽孢杆菌(p.nuruki)、海洋沉积物类芽孢杆菌(p.oceanisediminis)、带嗅类芽孢杆菌(p.odorifer)、月见草类芽孢杆菌(p.oenotherae)、口腔类芽孢杆菌(p.oralis)、稻类芽孢杆菌(p.oryzae)、稻根泥类芽孢杆菌(p.oryzisoli)、奥氏类芽孢杆菌(p.ottowii)、p.ourofinensis、饲料类芽孢杆菌(p.pabuli)、芍药类芽孢杆菌(p.paeoniae)、人参类芽孢杆菌(p.panacihumi)、参壤类芽孢杆菌(p.panacisoli)、参田类芽孢杆菌(p.panaciterrae)、重楼类芽孢杆菌(p.paridis)、帕萨迪纳类芽孢杆菌(p.pasadenensis)、解果胶类芽孢杆菌(p.pectinilyticus)、皮尔瑞俄类芽孢杆菌(p.peoriae)、巴西甘草类芽孢杆菌(p.periandrae)、福赛类芽孢杆菌(p.phocaensis)、菲尼克斯类芽孢杆菌(p.phoenicis)、叶际类芽孢杆菌(p.phyllosphaerae)、小立碗藓类芽孢杆菌(p.physcomitrellae)、松类芽孢杆菌(p.pini)、松腐质类芽孢杆菌(p.pinihumi)、松壤类芽孢杆菌(p.pinisoli)、松杂物类芽孢杆菌(p.pinistramenti)、抱川类芽孢杆菌(p.pocheonensis)、多粘类芽孢杆菌(p.polymyxa)、解多糖类芽孢杆菌(p.polysaccharolyticus)、丽金龟类芽孢杆菌(p.popilliae)、杨根类芽孢杆菌(p.populi)、深底泥类芽孢杆菌(p.profundus)、牧豆类芽孢杆菌(p.prosopidis)、花金龟类芽孢杆菌(p.protaetiae)、普罗旺斯类芽孢杆菌(p.provencensis)、抗低温类芽孢杆菌(p.psychroresistens)、普洱茶类芽孢杆菌(p.pueri)、普洱类芽孢杆菌(p.puernese)、草滩类芽孢杆菌(p.puldeungensis)、净室类芽孢杆菌(p.purispatii)、青生类芽孢杆菌(p.qingshengii)、秦岭类芽孢杆菌(p.qinlingensis)、橡树类芽孢杆菌(p.quercus)、根类芽孢杆菌(p.radicis)、芝麻粕类芽孢杆菌(p.relictisesami)、叶渣类芽孢杆菌(p.residui)、根面类芽孢杆菌(p.rhizoplanae)、稻根类芽孢杆菌(p.rhizoryzae)、根际类芽孢杆菌(p.rhizosphaerae)、水浇地类芽孢杆菌(p.rigui)、河岸类芽孢杆菌(p.ripae)、发褪色类芽孢杆菌(p.rubinfantis)、瘤胃生类芽孢杆菌(p.ruminocola)、圆柏类芽孢杆菌(p.sabinae)、泗川类芽孢杆菌(p.sacheonensis)、盐泥类芽孢杆菌(p.salinicaeni)、血红类芽孢杆菌
(p.sanguinis)、底泥类芽孢杆菌(p.sediminis)、农地类芽孢杆菌(p.segetis)、硒地类芽孢杆菌(p.selenii)、亚硒酸还原类芽孢杆菌(p.selenitireducens)、塞内加尔类芽孢杆菌(p.senegalensis)、塞内加尔-马赛类芽孢杆菌(p.senegalimassiliensis)、p.seodonensis、楠府类芽孢杆菌(p.septentrionalis)、墓地类芽孢杆菌(p.sepulcri)、沈阳类芽孢杆菌(p.shenyangensis)、白神山类芽孢杆菌(p.shirakamiensis)、李氏类芽孢杆菌(p.shunpengii)、暹罗类芽孢杆菌(p.siamensis)、青贮类芽孢杆菌(p.silagei)、森林类芽孢杆菌(p.silvae)、桃儿七类芽孢杆菌(p.sinopodophylli)、茄科类芽孢杆菌(p.solanacearum)、茄属类芽孢杆菌(p.solani)、土壤类芽孢杆菌(p.soli)、苦苣菜类芽孢杆菌(p.sonchi)群、苦参类芽孢杆菌(p.sophorae)、精灵类芽孢杆菌(p.spiritus)、痰类芽孢杆菌(p.sputi)、星孢类芽孢杆菌(p.stellifer)、宿松类芽孢杆菌(p.susongensis)、首女类芽孢杆菌(p.swuensis)、台中类芽孢杆菌(p.taichungensis)、太湖类芽孢杆菌(p.taihuensis)、台湾类芽孢杆菌(p.taiwanensis)、桃花山类芽孢杆菌(p.taohuashanense)、塔里木类芽孢杆菌(p.tarimensis)、大地类芽孢杆菌(p.telluris)、微温类芽孢杆菌(p.tepidiphilus)、土地类芽孢杆菌(p.terrae)、泥土类芽孢杆菌(p.terreus)、土源类芽孢杆菌(p.terrigena)、p.tezpurensis、泰国类芽孢杆菌(p.thailandensis)、嗜热嗜气类芽孢杆菌(p.thermoaerophilus)、嗜热类芽孢杆菌(p.thermophilus)、解硫胺类芽孢杆菌(p.thiaminolyticus)、天目山类芽孢杆菌(p.tianmuensis)、西藏类芽孢杆菌(p.tibetensis)、拉蒂蒙类芽孢杆菌(p.timonensis)、透明类芽孢杆菌(p.translucens)、小麦类芽孢杆菌(p.tritici)、麦壤类芽孢杆菌(p.triticisoli)、图瓦雷克类芽孢杆菌(p.tuaregi)、古墓类芽孢杆菌(p.tumbae)、冻原类芽孢杆菌(p.tundrae)、苏黎世类芽孢杆菌(p.turicensis)、粉孢牛肝菌类芽孢杆菌(p.tylopili)、香蒲类芽孢杆菌(p.typhae)、泥炭渍沼类芽孢杆菌(p.tyrfis)、潮湿类芽孢杆菌(p.uliginis)、尿类芽孢杆菌(p.urinalis)、强壮类芽孢杆菌(p.validus)、p.velaei、窖泥类芽孢杆菌(p.vini)、缬草类芽孢杆菌(p.vortex)、p.vorticalis、伤口类芽孢杆菌(p.vulneris)、陈氏类芽孢杆菌(p.wenxiniae)、p.whitsoniae、p.wooponensis、p.woosongensis、乌鲁木齐类芽孢杆菌(p.wulumuqiensis)、威氏类芽孢杆菌(p.wynnii)、解黄原胶类芽孢杆菌(p.xanthanilyticus)、解黄质类芽孢杆菌(p.xanthinilyticus)、耐干热类芽孢杆菌(p.xerothermodurans)、新疆类芽孢杆菌(p.xinjiangensis)、食木聚糖类芽孢杆菌(p.xylanexedens)、解木聚糖类芽孢杆菌(p.xylaniclasticus)、溶木聚糖类芽孢杆菌(p.xylanilyticus)、溶黄原胶类芽孢杆菌(p.xylanisolvens)、阳澄类芽孢杆菌(p.yanchengensis)、龙仁类芽孢杆菌(p.yonginensis)、云南类芽孢杆菌(p.yunnanensis)、花椒类芽孢杆菌(p.zanthoxyli)、玉蜀黍类芽孢杆菌(p.zeae)。
[0127]
优选地食琼脂类芽孢杆菌、噬琼脂类芽孢杆菌、解藻酸类芽孢杆菌、碱土类芽孢杆菌、蜂房类芽孢杆菌、解淀粉类芽孢杆菌、厌氧类芽孢杆菌、南极类芽孢杆菌、阿萨姆类芽孢杆菌、偶氮还原类芽孢杆菌、巴塞罗那类芽孢杆菌、北方类芽孢杆菌、腌菜类芽孢杆菌、坎皮纳斯类芽孢杆菌、晋州类芽孢杆菌、解几丁质类芽孢杆菌、软骨素类芽孢杆菌、火山灰类芽孢杆菌、解凝胶多糖类芽孢杆菌、大田类芽孢杆菌、树形类芽孢杆菌、爱媛类芽孢杆菌、乐金类芽孢杆菌、蜂窝状类芽孢杆菌、解葡聚糖类芽孢杆菌、解聚糖类芽孢杆菌、禾谷类芽孢杆菌、食颗粒淀粉类芽孢杆菌、保土谷类芽孢杆菌、伊利诺伊类芽孢杆菌、杰米尔类芽孢杆菌、
神户类芽孢杆菌、噬鞘类芽孢杆菌、韩国类芽孢杆菌、kribb类芽孢杆菌、乳酸类芽孢杆菌、幼虫类芽孢杆菌、灿烂类芽孢杆菌、缓病类芽孢杆菌、浸软类芽孢杆菌、麦夸里岛类芽孢杆菌、马赛类芽孢杆菌、孟德尔类芽孢杆菌、本部类芽孢杆菌、噬萘类芽孢杆菌、嗜线虫类芽孢杆菌、带嗅类芽孢杆菌、饲料类芽孢杆菌、皮尔瑞俄类芽孢杆菌、菲尼克斯类芽孢杆菌、叶际类芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、丽金龟类芽孢杆菌、根际类芽孢杆菌、血红类芽孢杆菌、星孢类芽孢杆菌、台中类芽孢杆菌、土地类芽孢杆菌、解硫胺类芽孢杆菌、拉蒂蒙类芽孢杆菌、粉孢牛肝菌类芽孢杆菌、苏黎世类芽孢杆菌、强壮类芽孢杆菌、缬草类芽孢杆菌、伤口类芽孢杆菌、威氏类芽孢杆菌、溶木聚糖类芽孢杆菌。
[0128]
特别优选韩国类芽孢杆菌(paenibacillus koreensis)、根际类芽孢杆菌(paenibacillus rhizosphaerae)、多粘类芽孢杆菌(paenibacillus polymyxa)、解淀粉类芽孢杆菌(paenibacillus amylolyticus)、土地类芽孢杆菌(paenibacillus terrae)、多粘类芽孢杆菌多粘亚种(paenibacillus polymyxa polymyxa)、多粘类芽孢杆菌植物亚种(paenibacillus polymyxa plantarum)、类芽孢杆菌附生新物种(paenibacillus nov.spec epiphyticus)、土地类芽孢杆菌、浸麻类芽孢杆菌(paenibacillus macerans)、蜂房类芽孢杆菌(paenibacillus alvei),更优选的是多粘类芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌多粘亚种、多粘类芽孢杆菌植物亚种、类芽孢杆菌附生新物种、土地类芽孢杆菌、浸麻类芽孢杆菌、蜂房类芽孢杆菌、甚至更优选地多粘类芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌多粘亚种、多粘类芽孢杆菌植物亚种和土地类芽孢杆菌。
[0129]
芽孢杆菌属物种(bacillus sp.)物种:海渊芽孢杆菌(b.abyssalis)、老鼠簕芽孢杆菌(b.acanthi)、酸快生芽孢杆菌(b.acidiceler)、酸居芽孢杆菌(b.acidicola)、产酸芽孢杆菌(b.acidiproducens)、耐酸芽孢杆菌(b.aciditolerans)、嗜酸普鲁兰芽孢杆菌(b.acidopullulyticus)、贪酸芽孢杆菌(b.acidovorans)、埃奥利芽孢杆菌(b.aeolius)、海芽孢杆菌(b.aequororis)、铜矿芽孢杆菌(b.aeris)、空气芽孢杆菌(b.aerius)、b.aerolacticus、河口芽孢杆菌(b.aestuarii)、艾丁湖芽孢杆菌(b.aidingensis)、石坂氏芽孢杆菌(b.akibai)、b.alcaliinulinus、嗜碱芽孢杆菌(b.alcalophilus)、栖藻芽孢杆菌(b.algicola)、碱栖芽孢杆菌(b.alkalicola)、碱湖芽孢杆菌(b.alkalilacus)、喜碱用腈芽孢杆菌(b.alkalinitrilicus)、碱底泥芽孢杆菌(b.alkalisediminis)、碱壤芽孢杆菌(b.alkalitelluris)、耐碱芽孢杆菌(b.alkalitolerans)、芽孢杆菌b.alkalogaya、高空芽孢杆菌(b.altitudinis)、b.alveayuensis、b.amiliensis、安氏芽孢杆菌(b.andreesenii)、安德烈氏芽孢杆菌(b.andreraoultii)、芽孢杆菌(b.aporrhoeus)、海水芽孢杆菌(b.aquimaris)、食熊果苷芽孢杆菌(b.arbutinivorans)、阿耶氏芽孢杆菌(b.aryabhattai)、旭化成芽孢杆菌(b.asahii)、桔橙色芽孢杆菌(b.aurantiacus)、南海芽孢杆菌(b.australimaris)、产氮芽孢杆菌(b.azotoformans)、b.bacterium、栗棕芽孢杆菌(b.badius)、白翎芽孢杆菌(b.baekryungensis)、巴达维亚芽孢杆菌(b.bataviensis)、食安息香酸芽孢杆菌(b.benzoevorans)、白令芽孢杆菌(b.beringensis)、伯氏芽孢杆菌(b.berkeleyi)、贝弗氏芽孢杆菌(b.beveridgei)、兵马俑芽孢杆菌(b.bingmayongensis)、博格利亚湖芽孢杆菌(b.bogoriensis)、淤泥芽孢杆菌(b.borbori)、喜硼芽孢杆菌(b.boroniphilus)、食丁醇芽孢杆菌(b.butanolivorans)、b.cabrialesii、粪芽孢杆菌(b.caccae)、山茶芽孢杆菌(b.camelliae)、盐场芽孢杆菌(b.campisalis)、卡纳维拉尔芽
孢杆菌(b.canaveralius)、山柑芽孢杆菌(b.capparidis)、嗜碳芽孢杆菌(b.carboniphilus)、b.casamancensis、解酪朊芽孢杆菌(b.caseinilyticus)、链样芽孢杆菌(b.catenulatus)、山洞芽孢杆菌(b.cavernae)、b.cecembensis、解纤维素芽孢杆菌(b.cellulosilyticus)、b.chagannorensis、b.chandigarhensis、天安芽孢杆菌(b.cheonanensis)、韩中芽孢杆菌(b.chungangensis)、b.ciccensis、慈湖芽孢杆菌(b.cihuensis)、环状芽孢杆菌(b.circulans)、克劳氏芽孢杆菌(b.clausii)、凝固芽孢杆菌(b.coagulans)、科阿韦拉芽孢杆菌(b.coahuilensis)、柯氏芽孢杆菌(b.cohnii)、堆肥芽孢杆菌(b.composti)、松柏芽孢杆菌(b.coniferum)、高丽芽孢杆菌(b.coreaensis)、巨牡蛎芽孢杆菌(b.crassostreae)、月牙形芽孢杆菌(b.crescens)、黄瓜根际芽孢杆菌(b.cucumis)、达喀尔芽孢杆菌(b.dakarensis)、洱海孢杆菌(b.daliensis)、岘港芽孢杆菌(b.danangensis)、大庆芽孢杆菌(b.daqingensis)、腐叶芽孢杆菌(b.decisifrondis)、褪色芽孢杆菌(b.decolorationis)、凹陷芽孢杆菌(b.depressus)、b.deramificans、荒漠芽孢杆菌(b.deserti)、b.dielmoensis、b.djibelorensis、德伦特芽孢杆菌(b.drentensis)、产四氢嘧啶芽孢杆菌(b.ectoiniformans)、爱胜蚓芽孢杆菌(b.eiseniae)、b.enclensis、岩内生芽孢杆菌(b.endolithicus)、内生芽孢杆菌(b.endophyticus)、根内芽孢杆菌(b.endoradicis)、花椒内生芽孢杆菌(b.endozanthoxylicus)、混合饲料芽孢杆菌(b.farraginis)、苛求芽孢杆菌(b.fastidiosus)、封丘芽孢杆菌(b.fengqiuensis)、发酵芽孢杆菌(b.fermenti)、魔星兰芽孢杆菌(b.ferrariarum)、丝状芽孢杆菌(b.filamentosus)、b.firmis、坚强芽孢杆菌(b.firmus)、温热芽孢杆菌(b.flavocaldarius)、柔软芽孢杆菌(b.flexus)、孔洞芽孢杆菌(b.foraminis)、福氏芽孢杆菌(b.fordii)、美丽芽孢杆菌(b.formosensis)、强壮芽孢杆菌(b.fortis)、弗罗氏芽孢杆菌(b.freudenreichii)、食果糖芽孢杆菌(b.fucosivorans)、喷气孔芽孢杆菌(b.fumarioli)、索状芽孢杆菌(b.funiculus)、解半乳糖芽孢杆菌(b.galactosidilyticus)、加利西亚芽孢杆菌(b.galliciensis)、吉氏芽孢杆菌(b.gibsonii)、参壤芽孢杆菌(b.ginsenggisoli)、参腐质芽孢杆菌(b.ginsengihumi)、参壤芽孢杆菌(b.ginsengisoli)、格伦氏芽孢杆菌(b.glennii)、大豆发酵芽孢杆菌(b.glycinifermentans)、戈壁芽孢杆菌(b.gobiensis)、棉花芽孢杆菌(b.gossypii)、高蒂氏芽孢杆菌(b.gottheilii)、草类芽孢杆菌(b.graminis)、格拉纳达芽孢杆菌(b.granadensis)、哈肯萨克芽孢杆菌(b.hackensackii)、海口芽孢杆菌(b.haikouensis)、盐敏芽孢杆菌(b.halmapalus)、耐盐芽孢杆菌(b.halodurans)、喜盐噬糖芽孢杆菌(b.halosaccharovorans)、海恩氏芽孢杆菌(b.haynesii)、解半纤维素芽孢杆菌(b.hemicellulosilyticus)、马粪海胆芽孢杆菌(b.hemicentroti)、海博斯坦芽孢杆菌(b.herbersteinensis)、b.hisashii、堀越氏芽孢杆菌(b.horikoshii)、霍内氏芽孢杆菌(b.horneckiae)、花园芽孢杆菌(b.horti)、惠州芽孢杆菌(b.huizhouensis)、腐质芽孢杆菌(b.humi)、湖南芽孢杆菌(b.hunanensis)、花津浦芽孢杆菌(b.hwajinpoensis)、b.idriensis、印度芽孢杆菌(b.indicus)、婴儿芽孢杆菌(b.infantis)、地下芽孢杆菌(b.infernus)、居间芽孢杆菌(b.intermedius)、肠道芽孢杆菌(b.intestinalis)、b.iocasae、伊莎氏芽孢杆菌(b.isabeliae)、以色列芽孢杆菌(b.israeli)、吉达芽孢杆菌(b.jeddahensis)、咸海鲜芽孢杆菌(b.jeotgali)、科学号芽孢杆菌(b.kexueae)、小昆沙芽
孢杆菌(b.kiskunsagensis)、科赫芽孢杆菌(b.kochii)、小木偶形芽孢杆菌(b.kokeshiiformis)、韩国芽孢杆菌(b.koreensis)、库尔勒芽孢杆菌(b.korlensis)、b.kribbensis、克鲁氏芽孢杆菌(b.krulwichiae)、夸希奥科芽孢杆菌(b.kwashiorkori)、京畿道芽孢杆菌(b.kyonggiensis)、盐湖芽孢杆菌(b.lacisalsi)、湖芽孢杆菌(b.lacus)、列城芽孢杆菌(b.lehensis)、迟缓芽孢杆菌(b.lentus)、嗜木质素芽孢杆菌(b.ligniniphilus)、林甸芽孢杆菌(b.lindianensis)、海滨芽孢杆菌(b.litoralis)、蔓山鹃芽孢杆菌(b.loiseleuriae)、b.lonarensis、b.longiquaesitum、长孢芽孢杆菌(b.longisporus)、b.luciferensis、浅黄芽孢杆菌(b.luteolus)、橙色芽孢杆菌(b.luteus)、番茄芽孢杆菌(b.lycopersici)、巨大芽孢杆菌(b.magaterium)、马利氏芽孢杆菌(b.malikii)、红树芽孢杆菌(b.mangrovensis)、红树林芽孢杆菌(b.mangrovi)、解甘露聚糖芽孢杆菌(b.mannanilyticus)、马努斯芽孢杆菌(b.manusensis)、消瘦芽孢杆菌(b.marasmi)、马氏芽孢杆菌(b.marcorestinctum)、海泥芽孢杆菌(b.marinisedimentorum)、黄海芽孢杆菌(b.marisflavi)、海洋芽孢杆菌(b.maritimus)、马尔马拉芽孢杆菌(b.marmarensis)、马赛冰川芽孢杆菌(b.massiliglaciei)、马赛厌食症芽孢杆菌(b.massilioanorexius)、马赛加蓬芽孢杆菌(b.massiliogabonensis)、马赛大猩猩芽孢杆菌(b.massiliogorillae)、马赛尼日尔芽孢杆菌(b.massilionigeriensis)、马赛塞内加尔芽孢杆菌(b.massiliosenegalensis)、地中海芽孢杆菌(b.mediterraneensis)、巨兽芽孢杆菌(b.megaterium)、仙芽孢杆菌(b.mesonae)、嗜中温芽孢杆菌(b.mesophilum)、嗜常温芽孢杆菌(b.mesophilus)、甲醇芽孢杆菌(b.methanolicus)、芒属芽孢杆菌(b.miscanthi)、墙壁芽孢杆菌(b.muralis)、马丁墙芽孢杆菌(b.murimartini)、中村芽孢杆菌(b.nakamurai)、南海底泥芽孢杆菌(b.nanhaiisediminis)、嗜苏打芽孢杆菌(b.natronophilus)、b.ndiopicus、尼尔氏芽孢杆菌(b.nealsonii)、杀线虫芽孢杆菌(b.nematocida)、b.niabensis、烟酸芽孢杆菌(b.niacini)、尼亚美芽孢杆菌(b.niameyensis)、嗜硝芽孢杆菌(b.nitritophilus)、三七壤芽孢杆菌(b.notoginsengisoli)、休耕地芽孢杆菌(b.novalis)、阻塞芽孢杆菌(b.obstructivus)、大洋芽孢杆菌(b.oceani)、大洋沉积物芽孢杆菌(b.oceanisediminis)、b.ohbensis、奥卡港芽孢杆菌(b.okhensis)、b.okuhidensis、噬油芽孢杆菌(b.oleivorans)、奥莱龙岛芽孢杆菌(b.oleronius)、橄榄芽孢杆菌(b.olivae)、韦尔瓦芽孢杆菌(b.onubensis)、稻芽孢杆菌(b.oryzae)、稻壳芽孢杆菌(b.oryzaecorticis)、稻根芽孢杆菌(b.oryzisoli)、稻田芽孢杆菌(b.oryziterrae)、大岛芽孢杆菌(b.oshimensis)、巴基斯坦芽孢杆菌(b.pakistanensis)、参壤芽孢杆菌(b.panacisoli)、参土芽孢杆菌(b.panaciterrae)、副弯曲芽孢杆菌(b.paraflexus)、巴塔哥尼芽孢杆菌(b.patagoniensis)、波斯芽孢杆菌(b.persicus)、群集芽孢杆菌(b.pervagus)、b.phocaeensis、b.pichinotyi、栖鱼芽孢杆菌(b.piscicola)、鱼肉生芽孢杆菌(b.piscis)、海绵芽孢杆菌(b.plakortidis)、抱川芽孢杆菌(b.pocheonensis)、蓼芽孢杆菌(b.polygoni)、多战芽孢杆菌(b.polymachus)、胡杨芽孢杆菌(b.populi)、农场芽孢杆菌(b.praedii)、假嗜碱芽孢杆菌(b.pseudalcaliphilus)、假坚强芽孢杆菌(b.pseudofirmus)、假弯曲芽孢杆菌(b.pseudoflexus)、假巨兽芽孢杆菌(b.pseudomegaterium)、冷解糖芽孢杆菌(b.psychrosaccharolyticus)、短小芽孢杆菌(b.pumilus)、抗扫除芽孢杆菌(b.purgationiresistens)、范氏芽孢杆菌
(b.qingshengii)、消旋乳酸芽孢杆菌(b.racemilacticus)、根际芽孢杆菌(b.rhizosphaerae)、b.rigiliprofundi、b.rubiinfantis、乡村芽孢杆菌(b.ruris)、b.safensis、萨根氏芽孢杆菌(b.saganii)、毛虾芽孢杆菌(b.salacetis)、盐芽孢杆菌(b.salarius)、抗盐芽孢杆菌(b.salidurans)、盐上芽孢杆菌(b.salis)、耐盐芽孢杆菌(b.salitolerans)、b.salmalaya、喜盐芽孢杆菌(b.salsus)、底泥芽孢杆菌(b.sediminis)、硒砷芽孢杆菌(b.selenatarsenatis)、塞内加尔芽孢杆菌(b.senegalensis)、西海芽孢杆菌(b.seohaeanensis)、莎车芽孢杆菌(b.shacheensis)、b.shackletonii、山东芽孢杆菌(b.shandongensis)、希瓦氏芽孢杆菌(b.shivajii)、相似芽孢杆菌(b.similis)、简单芽孢杆菌(b.simplex)、b.sinesaloumensis、地窖芽孢杆菌(b.siralis)、史密氏芽孢杆菌(b.smithii)、茄属芽孢杆菌(b.solani)、土壤芽孢杆菌(b.soli)、红树林地芽孢杆菌(b.solimangrovi)、森林土壤芽孢杆菌(b.solisilvae)、宋卡芽孢杆菌(b.songklensis)、海绵芽孢杆菌(b.spongiae)、耐热孢芽孢杆菌(b.sporothermodurans)、施塔氏芽孢杆菌(b.stamsii)、地下芽孢杆菌(b.subterraneus)、斯韦氏芽孢杆菌(b.swezeyi)、泰安芽孢杆菌(b.taeanensis)、台湾芽孢杆菌(b.taiwanensis)、柽柳芽孢杆菌(b.tamaricis)、红豆杉芽孢杆菌(b.taxi)、土地芽孢杆菌(b.terrae)、睾丸芽孢杆菌(b.testis)、茶叶芽孢杆菌(b.thaonhiensis)、嗜热碱芽孢杆菌(b.thermoalkalophilus)、热解淀粉芽芽孢杆菌(b.thermoamyloliquefaciens)、热噬淀粉芽孢杆菌(b.thermoamylovorans)、热粪芽孢杆菌(b.thermocopriae)、耐热乳芽孢杆菌(b.thermolactis)、嗜热芽孢杆菌(b.thermophilus)、嗜热溶蛋白芽胞杆菌(b.thermoproteolyticus)、地热芽孢杆菌(b.thermoterrestris)、嗜热玉米芽孢杆菌(b.thermozeamaize)、产硫芽孢杆菌(b.thioparans)、天目山芽孢杆菌(b.tianmuensis),陶氏芽孢杆菌(b.tianshenii)、蒂蒙芽孢杆菌(b.timonensis)、b.tipchiralis、栖独角仙芽孢杆菌(b.trypoxylicola)、图瓦雷克人芽孢杆菌(b.tuaregi)、乌鲁木齐芽孢杆菌(b.urumqiensis)、越南芽孢杆菌(b.vietnamensis)、窖泥芽孢杆菌(b.vini)、田地芽孢杆菌(b.vireti)、粘稠芽孢杆菌(b.viscosus)、卵黄色芽孢杆菌(b.vitellinus)、和光芽孢杆菌(b.wakoensis)、威海芽孢杆菌(b.weihaiensis)、五大连池芽孢杆菌(b.wudalianchiensis)、武夷山芽孢杆菌(b.wuyishanensis)、厦门芽孢杆菌(b.xiamenensis)、小溪芽孢杆菌(b.xiaoxiensis)、花椒芽孢杆菌(b.zanthoxyli)、玉蜀黍芽孢杆菌(b.zeae)、漳州芽孢杆菌(b.zhangzhouensis)、湛江芽孢杆菌(b.zhanjiangensis)。
[0130]
优选地,地衣芽孢杆菌(bacillus licheniformis)、巨兽芽孢杆菌(b.megaterium)、枯草芽孢杆菌(b.subtilis)、短小芽孢杆菌(b.pumilus)、坚强芽孢杆菌(b.firmus)、苏云金芽孢杆菌(b.thuringiensis)、贝莱斯芽孢杆菌(b.velezensis)、b.linens、深褐芽孢杆菌(b.atrophaeus)、解淀粉芽孢杆菌(b.amyloliquefaciens)、阿耶氏芽孢杆菌(b.aryabhattai)、蜡样芽胞杆菌(b.cereus)、b.aquatilis、环状芽孢杆菌(b.circulans)、克劳氏芽孢杆菌(b.clausii)、球状芽孢杆菌(b.sphaericus)、解硫胺芽孢杆菌(b.thiaminolyticus)、莫哈韦芽孢杆菌(b.mojavensis)、死谷芽孢杆菌(b.vallismortis)、凝固芽孢杆菌(b.coagulans)、索诺拉芽孢杆菌(b.sonorensis)、耐盐芽孢杆菌(b.halodurans)、抱川芽孢杆菌(b.pocheonensis)、吉氏芽孢杆菌(b.gibsonii)、
酸快生芽孢杆菌(b.acidiceler)、柔软芽孢杆菌(b.flexus)、湖南芽孢杆菌(b.hunanensis)、假真菌样芽孢杆菌(b.pseudomycoides)、简单芽孢杆菌(b.simplex)、b.safensis、真菌样芽孢杆菌(b.mycoides)。
[0131]
特别优选解淀粉芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、贝莱斯芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌。
[0132]
假单胞菌属(pseudomonas)物种:致金色假单胞菌(p.aureofaciens)、洋葱假单胞菌(p.cepacia)、起皱假单胞菌(p.corrugata)、荧光假单胞菌(p.fluorescens)、恶臭假单胞菌(p.putida)、铜绿假单胞菌(p.aeruginosa)、绿针假单胞菌(p.chlororaphis)、韩国假单胞菌(p.koreensis)(浅黄绿)、硝基还原假单胞菌(p.nitroreducens)、丁香假单胞菌(p.syringae)、亚麻假单胞菌(p.lini)、印度洋假单胞菌(p.indica)、曼氏假单胞菌(p.mandelii)(亚群)、罗氏假单胞菌(p.rhodesiae)、根际假单胞菌(p.rhizosphaere)、耐寒假单胞菌(p.psychrotolerans)、嗜松香烷假单胞菌(p.abietaniphila)、远东假单胞菌(p.extremorientalis)、浅黄假单胞菌(p.lutea)、皮克特假单胞菌(p.pictorum)、奇幻岛假单胞菌(p.deceptionensis)、青紫葛假单胞菌(p.cissicola)。
[0133]
优选荧光假单胞菌、丁香假单胞菌和恶臭假单胞菌。
[0134]
伯克霍尔德菌属(burkholderia)物种:植物强化伯克霍尔德菌(b.phytofirmans)、唐菖蒲伯克霍尔德菌(b.gladioli)、洋葱伯克霍尔德菌(b.cepacia)、花朵伯克霍尔德菌(b.anthina)、植物园伯克霍尔德菌(b.arboris)、稻粒伯克霍尔德菌(b.seminalis)、两面伯克霍尔德菌(b.ambifaria)、加勒多尼伯克霍尔德菌(b.caledonica)、新洋葱伯克霍尔德菌(b.cenocepacia)、污染伯克霍尔德菌(b.contaminans)、欺瞒伯克霍尔德菌(b.dolosa)、颖壳伯克霍尔德菌(b.glumae)、禾谷伯克霍尔德菌(b.graminis)、久留里伯克霍尔德菌(b.kururiensis)、多噬伯克霍尔德菌(b.multivorans)、硝吡咯伯克霍尔德菌(b.pyrrocinia)、蔗园伯克霍尔德菌(b.sacchari)、大西洋森林伯克霍尔德菌(b.silvatlantica)、稳定伯克霍尔德菌(b.stabilis)、热带伯克霍尔德菌(b.tropica)、乌拉姆伯克霍尔德菌(b.unamae)、越南伯克霍尔德菌(b.vietnamiensis)、噬异伯克霍尔德菌(b.xenovorans)、加勒比伯克霍尔德菌(b.caribensis)、含羞草伯克霍尔德菌(b.mimosarum)、结瘤伯克霍尔德菌(b.nodosa)、根瘤伯克霍尔德菌(b.phymatum)、隆起伯克霍尔德菌(b.tuberum)、b.calva、科氏九节木伯克霍尔德菌(b.kirkii)、黑斑九节木伯克霍尔德菌(b.nigropunctata)、颖壳伯克霍尔德菌(b.glumae)、康乃馨伯克霍尔德菌(b.caryophylli)、真菌伯克霍尔德菌(b.fungorum)、梅克伦伯克霍尔德菌(b.megapolitana)、参壤伯克霍尔德菌(b.ginsengisoli)、土栖伯克霍尔德菌(b.terricola)、解酚伯克霍尔德菌(b.phenoliruptrix)、沉积物栖居伯克霍尔德菌(b.sedimincola)、苔藓伯克霍尔德菌(b.bryophila)、吩嗪伯克霍尔德菌(b.phenazinium)。
[0135]
优选洋葱伯克霍尔德菌和污染伯克霍尔德菌。
[0136]
副克霍尔德菌属(paraburkholderia)物种:加勒多尼亚副克霍尔德菌(p.caledonica)、植物强化副克霍尔德菌(p.phytofirmans)、土栖副克霍尔德菌(p.terricola)、土壤副克霍尔德菌(p.terrae)、医院副克霍尔德菌(p.hospital)、智异山副克霍尔德菌(p.jirisanensis)、驯鹿副克霍尔德菌(p.caribensis)、热带副克霍尔德菌
(p.tropica)、梅克伦副克霍尔德菌(p.megapolitana)。
[0137]
优选植物强化副克霍尔德菌。
[0138]
根瘤菌目(rhizobiales):祁连山根瘤菌(rhizobium qilianshanense)、玉米根瘤菌(r.mayense)、汨罗根瘤菌(r.miluonense)、热带根瘤菌(r.tropici)、卢西塔尼亚根瘤菌(r.lusitanum)、粘稠根瘤菌(r.viscosum)、卢西塔尼亚根瘤菌、耐金属根瘤菌(r.metallidurans)、玉米根瘤菌、菜豆根瘤菌(r.phaseoli)、热带根瘤菌(r.tropici)、多宿主根瘤菌(r.multihospitium)、大豆根瘤菌(r.japonicum)、豌豆根瘤菌(r.leguminosarum)、豌豆根瘤菌菜豆生物型(r.leguminosarum bv.phaseoli)、豌豆根瘤菌蚕豆生物型(r.leguminosarum bv.viciae)、豌豆根瘤菌车轴草生物型(r.leguminosarum bv.trifolii)、车轴根瘤菌(r.trifolii)、羽扇豆根瘤菌(r.lupine)、大豆慢生根瘤菌(bradyrhizobium japonicum)、草木犀中华根瘤菌(sinorhizobium meliloti)、草木犀中生根瘤菌(mesorihizobium meliloti)、草木犀剑菌(ensifer meliloti)。
[0139]
优选大豆慢生根瘤菌、大豆根瘤菌(rhizobium japonicum)、豌豆根瘤菌和豌豆根瘤菌菜豆生物型。
[0140]
鞘氨醇单胞菌属物种(sphingomonas sp.):藪内氏鞘脂单胞菌(s.yabuuchiae)、寡噬香鞘脂单胞菌(s.oligoaromativorans)、固氮鞘脂单胞菌(s.azotifigens)、楚氏鞘脂单胞菌(s.trueperi)、固氮鞘脂单胞菌、藪内氏鞘脂单胞菌、特氏鞘脂单胞菌、s.kyeonggiensis、特氏鞘脂单胞菌、红豆杉鞘脂单胞菌(s.taxi)、抹布鞘脂单胞菌(s.panni)、s.endophytica、抹布鞘脂单胞菌、人参鞘脂单胞菌(s.panacis)、粘液鞘脂单胞菌(s.pituitosa)、气生鞘脂单胞菌(s.aerolata)、类少动鞘脂单胞菌(s.parapaucimobilis)。
[0141]
优选类少动鞘脂单胞菌和血红鞘脂单胞菌(s.sanguinis)。
[0142]
链霉菌属(streptomyces)物种:阿氏链霉菌(s.araujoniae)、s.barakatei、β普通链霉菌(s.beta-vulgaris)、吸水链霉菌(s.hygroscopicus)、龟裂链霉菌(s.rimosus)、环圈链霉菌(s.anulatus)、郝氏链霉菌(s.halstedii)、津岛链霉菌(s.tsusimaensis)、西唐氏链霉菌(s.setonii)、白刺链霉菌(s.albospinus)、利迪链霉菌(s.lydicus)、库氏链霉菌(s.kurssanvii)、灰略红链霉菌(s.griseorubens)、三原链霉菌(s.miharaensis)、黄麻链霉菌(s.corchorusii)、易变链霉菌(s.mutabilis)、玫瑰淀粉酶链霉菌(s.roseodiastaticus)、突发链霉菌(s.erumpens)、桔橙链霉菌(s.aurantiacus)、枝链霉菌(s.rameus)、沙链霉菌(s.psammoticus)、嗜热一氧化碳链霉菌(s.thermocarboxydus)、比基尼链霉菌(s.bikiniensis)、五色链霉菌(s.goshikiensis)、壮观链霉菌(s.spectabilis)、玫瑰产色链霉菌(s.roseochromogenus)、暗黄紫链霉菌(s.fulvoviolaceus)、娄彻氏链霉菌(s.rochei)、灰绿链霉菌(s.griseiviridis)、星孢链霉菌(s.asterosporus)、千叶链霉菌(s.chibaensis)、抗菌素链霉菌(s.antibioticus)、秘鲁链霉菌(s.peruviensis)、春日链霉菌(s.kasugaensis)、灰色链霉菌自养变种(s.griseus var.autotrophicus)、橄榄链霉菌(s.olivaceus)、黄棕色链霉菌(s.flavofuscus)、藤黄链霉菌(s.luteogriseus)、孢淡灰链霉菌(s.spororaveus)、白黄链霉菌(s.alboflavus)、唐德链霉菌(s.tendae)、灰皱链霉菌(s.griseoruginosus)、紫黑链
霉菌(s.violaceusniger)、灰色链霉菌(s.griseus)、褶皱链霉菌(s.plicatus)、恰塔努加链霉菌(s.chattanoogensis)、纳塔尔链霉菌(s.natalensis)、褐黄孢链霉菌(s.gilvosporeus)、假委内瑞拉链霉菌(s.pseudovenezuelae)、和田山链霉菌(s.wadayamensis)、硫藤黄链霉菌(s.thioluteus)、灰绿链霉菌(s.griseoviridis)和杀优洛菌素链霉菌(s.eurocidicus)。
[0143]
优选普拉特链霉菌(s.platensis)、黄灰链霉菌(s.flavogriseus)、淡紫灰链霉菌(s.lavendulae)、吸水链霉菌和利迪链霉菌。
[0144]
金黄杆菌属(chryseobacterium)物种:水生金黄杆菌(c.aquaticum)、c.hagamense、产吲哚金黄杆菌(c.indologenes)、大安金黄杆菌(c.taeanense)、尼泊尔金黄杆菌(c.nepalense)、山黧豆金黄杆菌(c.lathyri)、玉蜀黍金黄杆菌(c.zeae)、台中金黄杆菌(c.taiwanense)、冷水金黄杆菌(c.aquifrigidense)、马鞍藤栖金黄杆菌(c.soldanellicola)、金矿金黄杆菌(c.balustinum)。
[0145]
优选产吲哚金黄杆菌和马鞍藤栖金黄杆菌。
[0146]
红球菌属物种(rhodococcus sp.):红平红球菌(r.erythropolis)、玫瑰红红球菌(r.rhodochrous)、缠绕假单胞菌(r.fascians)和马假单胞菌(r.equi)。
[0147]
优选红平红球菌和缠绕假单胞菌。
[0148]
枝芽孢菌属(virgibacillus)物种:死海枝芽孢菌(v.marismortui)、嗜盐土地芽孢杆菌(terribacillus halophilus)、伸长盐单胞菌(halomonas elongate)、莱比托游动球菌(lanococcus rifietoensis)、马胃葡萄球菌(staphylococcus equorum)、草生欧文氏菌(erwinia herbicola)、成团泛菌(pantoea agglomerans)、蜡黄葡萄糖杆菌(glucanobacter cerinus)、植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)、乳酸片球菌(pediococcus acidilactici)、戊糖片球菌(pediococcus pentosaceus)、普利茅斯赤芽孢杆菌(serratia plymuthica)、短短芽胞杆菌(brevibacillus brevis)。
[0149]
优选短短芽胞杆菌和植物乳杆菌。
[0150]
如实施例中所显示,已经用这类微生物获得特别好的结果。
[0151]
优选的植物健康促进性微生物属于如上文所述的类芽孢杆菌属(paenibacillus)或芽孢杆菌属(bacillus),其中类芽孢杆菌属微生物甚至更优选。最优选的植物健康促进性微生物是多粘类芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌植物亚种和土地类芽孢杆菌。
[0152]
本发明发酵方法中的微生物培养物优选地是由不同微生物物种和/或微生物物种的不同株组成的混合培养物。本发明因此提供可用于培养植物健康产生性微生物联合体的发酵方法。
[0153]
备选地,本发明发酵方法中的微生物培养物优选地是纯培养物,所述纯培养物由一种微生物的一个物种组成并且甚至更优选地由微生物的一个物种的一个株组成。在这个实施方案中,本发明的发酵方法特别易于使用标准微生物学技术和生物技术控制。
[0154]
当微生物培养物的至少一种微生物在培养期间在本发明的发酵方法中生产孢子时,则优选地收获这类孢子。本领域技术人员已知多种收获技术如离心、过滤和齿轮过滤(gear filtration)。本发明发酵方法的一个具体优势是可以在低费力下适当短的时间内以高抗真菌活性产生具有高含量抗真菌物质(尤其杀镰孢菌素)的高滴度孢子。
[0155]
还优选在本发明发酵方法结束时收获无细胞悬液。再次,用于获得本领域技术人
员未知的无细胞悬液的技术可以有利地与用于收获孢子的方法组合。
[0156]
本发明也提供通过本发明方法可获得或获得的植物健康促进组合物。如本文所述的,这类组合物令人惊讶地有效,并且它们易于产生且产生快速及成本有效地产生。
[0157]
植物健康组合物任选地还包含括稳定剂,优选地如wo2019222253a中所公开那样,并且还优选地包含一种或多种杀镰孢菌素。杀镰孢菌素是从类芽孢杆菌属物种分离的来自环状脂缩肽类的一组抗生素,它们经常共有以下结构特征:由6个氨基酸残基组成的大环,其中三个氨基酸残基是l-thr、d-allo-thr和d-ala,以及通过酰胺键连接n-末端l-thr残基的15-胍基-3-羟基十五酸尾部(chemmedchem 7,871
ꢀ‑
882,2012;j.microbiol.meth.85,175-182,2011)。这些化合物通过n-末端l-thr羟基基团和c-末端d-ala羰基基团之间的内酯桥环化。缩酚酸肽(depsipeptide)环内氨基酸残基的位置通常从上述l-thr(其自身也携带ghpd链)开始编号,并结束于c-末端d-ala。从类芽孢杆菌分离的杀镰孢菌素的非限制性实例称为li-f03、li-f04、li-f05、li-f07和li-f08(j.antibiotics40(11),1506-1514,1987;heterocycles 53(7),1533-1549,2000;peptides 32,1917-1923,2011)以及杀镰孢菌素a(也称为ll-f04a)、杀镰孢菌素b(也称为ll-f04b)、杀镰孢菌素c(也称为ll-f03a)和杀镰孢菌素d(也称为ll-f03b)(j.antibiotics 49(2),129-135,1996;j.antibiotics 50(3),220-228,1997)。杀镰孢菌素的氨基酸链不按核糖体方式生成,而通过非核糖体肽合成酶生成。在分离的杀镰孢菌素抗生素中,杀镰孢菌素a已经显示出最有前景的抗微生物活性,对抗各种临床上相关的真菌和革兰氏阳性细菌,如金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)(mic值范围:0.78-3.12g/ml)(chemmedchem 7,871-882,2012)。也报道杀镰孢菌素a、b、c和d可以抑制植物病原真菌,如尖镰孢(fusarium oxysporum)、黑曲霉(aspergillus niger)、米曲霉(aspergillus oryzae)和托姆青霉(penicillus thomii)(j.antibiotics 49(2),129-135,1996;j.antibiotics 50(3),220-228,1997)。已经发现杀镰孢菌素如li-f05、li-f07和li-f08具有一定的对抗各种植物病原真菌(如串珠镰孢(fusarium moniliforme)、尖镰孢、粉红镰孢(f.roseum)、藤仓赤霉(giberella fujkuroi)、芝麻长蠕孢(helminthosporium sesamum)和扩展青霉(penicillium expansum))的抗真菌活性(j.antibiotics 40(11),1506-1514,1987)。杀镰孢菌素还具有对抗革兰氏阳性细菌(包括金黄色葡萄球菌)的抗细菌活性(j.antibiotics 49,129-135,1996;j.antibiotics 50,220-228,1997)。此外,杀镰孢菌素具有对抗斑点小球腔菌(leptosphaeria maculans)的抗真菌活性,斑点小球腔菌引起卡诺拉油菜(canola)的根黑腐病(can.j.microbiol.48,159-169,2002)。此外,发现某些类芽孢杆菌菌株产生的杀镰孢菌素a和b及其相关的两种化合物在培养的欧芹细胞中诱导抗性反应并且抑制尖镰孢生长(wo 2006/016558;ep 1788074a1)。在wo 2016/020371中,发现细菌菌株lu16774、lu17007和lu17015的全培养液、培养物基质和无细胞提取物显示尤其对抗链格孢属(alternaria spp.)、灰葡萄孢(botrytis cinerea)和致病疫霉(phytophthora infestans)的抑制活性。
[0158]
另外本发明的植物健康组合物优选地还包含
[0159]
a)一种或多种具有杀真菌活性、杀菌活性、杀病毒活性和/或植物防御激活物活性的微生物农药,
[0160]
b)一种或多种具有杀真菌活性、杀菌活性、杀病毒活性和/或植物防御激活物活性的生物化学农药,
[0161]
c)一种或多种具有杀昆虫、杀螨、杀螺(molluscidal)和/或杀线虫活性的微生物农药,
[0162]
d)一种或多种具有杀昆虫活性、杀螨活性、杀螺活性、信息素活性和/或杀线虫活性的生物化学农药,
[0163]
e)一种或多种选自呼吸抑制剂、固醇生物合成抑制剂、核酸合成抑制剂、细胞分裂和细胞骨架形成或功能的抑制剂、氨基酸与蛋白质合成抑制剂、信号转导抑制剂、脂质和膜合成抑制剂、多位点起效的抑制剂、细胞壁合成抑制剂、植物防御诱导物的杀真菌剂和作用模式未知的杀真菌剂。
[0164]
wo2017137353中描述了其他组分a)-d),所述文献出于列举相应物质的目在此并入。wo2017137351中描述了其他组分e),所述文献也出于列举相应杀真菌剂的目在此并入。
[0165]
本发明也提供在其表面上包含植物健康促进组合物的植物材料、优选地植物繁殖材料。这种应用起到实现本发明组合物的有利植物健康促进属性作用。除非上下文另外清晰指出,否则术语“植物”意在包括处于任何成熟或发育阶段的植物,以及取自或源自任意这种植物的任何组织或器官(植物部分)。术语“植物材料”指植物产生的任何组织、器官或材料,包括但不限于植物细胞、茎、根、花、胚珠、雄蕊、种子、叶、胚胎、分生组织区、愈伤组织、花药培养物、配子体、孢子体、花粉、小孢子、原生质体、须根培养物、稿秆、籽粒、果实和坚果壳。如本文所用,“植物细胞”包括,但不限于原生质体、配子生产细胞和再生成为完整植株的细胞。术语"植物繁殖材料"将理解为表示植物的全部有生育能力部分,如种子和营养型植物材料如插条和块茎(例如马铃薯),它们可以用于植物的繁殖。这包括植物的种子、根、果实、块茎、球茎、根茎、枝、芽和其他部分,包括秧苗和幼苗,其可以在萌发后或从土壤萌出后移栽。也可以在移栽前通过浸没于本发明的植物健康促进组合物中或向其倾倒本发明的植物健康促进组合物,进行整体或部分处理来保护这些幼苗。
[0166]
本发明的植物健康促进组合物优选地通过任何拌药、喷洒、包衣、薄膜包衣、丸化、撒布或浸泡步骤,施加至植物材料、优选地植物繁殖材料。
[0167]
根据本发明,本发明的植物健康促进组合物用于防止、限制或减少植物病原性真菌疾病和/或改善植物健康和/或增加植物产量。如本文所述,当施加至植物材料,优选地植物可见部分和/或其根时,本发明的组合物有利地改善植物健康,优选地通过防止、限制或减少植物病原性真菌疾病来改善。可以对显示真菌疾病症状的植物或其部分施加组合物以减弱疾病强度或限制其扩散。可以对未显示真菌疾病症状的植物或其部分施加组合物以防止或延迟其发作或传播。处理植物或其足够部分导致植物健康改善和优选地导致产量增加。
[0168]
特别有利的是,本发明可用于防止、限制或减少植物病原性真菌疾病,其中
[0169]
i)真菌疾病选自:白疱病(white blister)、霜霉病、白粉病、根肿病(clubroot)、核盘菌腐病(sclerotinia rot)、镰刀霉枯萎病(fusarium wilts)和腐病(rots)、葡萄灰腐病(botrytis rots)、炭疽病、丝核菌腐病(rhizoctonia rots)、立枯病、空腔斑病(cavity spot)、块茎病、锈病、黑根腐病、靶斑病(target spot)、丝囊霉根腐病(aphanomyces root rot)、壳二胞囊领腐病(ascochyta collar rot)、蔓枯病(gummy stem blight)、格孢叶斑病(alternaria leaf spot)、黑胫病(black leg)、环斑病、晚疫病、褐斑病(cercospora)、叶枯病、壳针孢斑病(septoria spot)、叶枯病或其组合,和/或
[0170]
ii)真菌疾病由选自以下分类阶层的微生物造成或加重:
[0171]-粪壳菌纲(sordariomycetes)、更优选地肉座菌目(hypocreales)、更优选地丛赤壳科(nectriaceae)、更优选地镰刀菌属(fusarium);
[0172]-粪壳菌纲(sordariomycetes)、更优选地小丛壳目(glomerellales)、更优选地小丛壳科(glomerellaceae)、更优选地刺盘孢属(colletotrichum);
[0173]-锤舌菌纲(leotinomycetes)、更优选地柔膜菌目(helotiales)、更优选地核盘菌科(sclerotiniaceae)、更优选地葡萄孢属(botrytis);
[0174]-座囊菌纲(dothideomycetes)、更优选地格孢腔菌目(pleosporales)、更优选地格孢腔菌科(pleosporaceae)、更优选地链格孢属(alternaria);
[0175]-座囊菌纲、更优选地格孢腔菌目、更优选地暗球腔菌科(phaeosphaeriaceae)、更优选地暗球腔菌属(phaeosphaeria);
[0176]-座囊菌纲(dothideomycetes)、更优选地葡萄球菌目(botryosphaeriales)、更优选地葡萄球菌科(botryosphaeriaceae)、更优选地亚大茎点霉属(macrophomina);
[0177]-座囊菌纲、更优选地煤炱目(capnodiales)、更优选地球腔菌科(mycosphaerellaceae)、更优选地发酵壳针孢属(zymoseptoria);
[0178]-伞菌纲(agraricomycetes)、更优选地鸡油菌目(cantharellales)、更优选地角担菌科(ceratobasidiaceae)、更优选地丝核菌属(rhizoctonia)或亡革菌属(thanatephorus);
[0179]-柄锈菌纲(pucciniomycetes)、更优选地柄锈菌目(pucciniales)、更优选地柄锈菌科(pucciniaceae)、更优选地单胞锈菌属(uromyces)或柄锈菌属(puccinia);
[0180]-黑粉菌纲(ustilaginomycetes)、更优选地黑粉菌目(ustilaginales)、更优选地黑粉菌科(ustilaginaceae)、更优选地黑粉菌属(ustilago);
[0181]-卵菌纲(oomycota)、更优选地腐霉目(pythiales)、更优选地腐霉科(pythiaceae)、更优选地腐霉属(pythium);
[0182]-卵菌纲、更优选地霜霉目(peronosporales)、更优选地霜霉科(peronosporaceae)、更优选地疫霉属(phytophthora)、单轴霉属(plasmopara)或假霜霉属(pseudoperonospora)。
[0183]
优选地,本发明的组合物用来对付或可用对抗以下任何病原体:
[0184]-镰刀菌属(fusarium)物种:黑荆镰刀菌(f.acaciae-mearnsii)、百子莲镰刀菌(f.agapanthi)、微白镰刀菌(f.albidum)、嗜线虫镰刀菌(f.nematophilum)、f.andiyazi、分节孢子状镰刀菌(f.arthrosporioides)、f.austroamericanum、栖红豆镰刀菌(f.azukicola)、f.babinda、竹镰刀菌(f.bambusae)、f.boothii、巴西镰刀菌(f.brasilicum)、f.buharicum、f.sublunatum、f.algeriense、f.beomiforme、f.burgessii、栖黄杨镰刀菌(f.buxicola)、f.cyanostomum、镰刀菌(f.caeruleum)、弯角镰刀菌(f.camptoceras)、高加索镰刀菌(f.caucasicum)、f.cavispermum、蜀黍镰刀菌(f.cerealis)、f.atrovinosum、f.aywerte、厚垣镰刀菌(f.chlamydosporum)、栖腐质镰刀菌(f.humicola)、微分生孢镰刀菌(f.microconidium)、尼氏镰刀菌(f.nelsonii)、秘鲁镰刀菌(f.peruvianum)、刺镰刀菌(f.spinosum)、孢子丛镰刀菌(f.sporodochiale)、f.tjaynera、镰刀菌(f.ciliatum)、栖柑橘镰刀菌(f.citricola)、f.salinense、蓝色镰刀
菌(f.coeruleum)、f.anguioides、f.austroafricanum、单色镰刀菌(f.concolor)、f.convolutans、蒲苇镰刀菌(f.cortaderiae)、f.crassistipitatum、f.dactylidis、f.albosuccineum、多隔镰刀菌(f.decemcellulare)、f.detonianum、双隔孢镰刀菌(f.biseptatum)、鹰嘴豆镰刀菌(f.delphinoides)、双孢镰刀菌(f.dimerum)、砖镰刀菌(f.domesticum)、新月形镰刀菌(f.lunatum)、f.nectrioides、f.penzigii、杂色镰刀菌(f.diversisporum)、f.ensiforme、真马特镰刀菌(f.eumartii)、扩展镰刀菌(f.expansum)、f.acutatum、f.ananatum、f.annulatum、花腐镰刀菌(f.anthophilum)、f.awaxy、f.bactridioides、f.begoniae、短链镰刀菌(f.brevicatenulatum)、f.bulbicola、f.circinatum、f.coicis、轮纹镰刀菌(f.concentricum)、f.denticulatum、f.dlaminii、f.ficicrescens、f.fracticaudum、f.fractiflexum、f.fredkrugeri、藤仓镰刀菌(f.fujikuroi)、f.globosum、f.guttiforme、f.konzum、乳酸镰刀菌(f.lactis)、芒果镰刀菌(f.mangiferae)、f.marasasianum、墨西哥镰刀菌(f.mexicanum)、f.mundagurra、芜菁状镰刀菌(f.napiforme)、f.nygamai、f.parvisorum、f.phyllophilum、f.pininemorale、层出镰刀菌(f.proliferatum)、假花腐镰刀菌(f.pseudoanthophilum)、f.pseudocircinatum、f.pseudonygamai、f.ramigenum、甘蔗镰刀菌(f.sacchari)、f.secorum、f.sororula、胶孢镰刀菌(f.subglutinans)、f.succisae、温带镰刀菌(f.temperatum)、产黄色镰刀菌(f.thapsinum)、f.tjaetaba、潮湿镰刀菌(f.udum)、轮枝镰刀菌(f.verticillioides)、f.xylarioides、f.xyrophilum、镰状镰刀菌(f.fusarioides)、f.gibbosum、异孢镰刀菌(f.heterosporum)、f.hostae、f.hyaloacrosporum、f.aberrans、f.arcuatisporum、f.brevicaudatum、f.bubalinum、f.caatingaense、f.cateniforme、f.citri、f.clavum、咖啡镰刀菌(f.coffeatum)、紧致镰刀菌(f.compactum)、镰刀菌(f.croceum)、f.duofalcatisporum、木贼镰刀菌(f.equiseti)、f.fasciculatum、f.flagelliforme、f.gracilipes、桂林镰刀菌(f.guilinense)、海南镰刀菌(f.hainanense)、腐质镰刀菌(f.humuli)、变红镰刀菌(f.incarnatum)、番薯镰刀菌(f.ipomoeae)、不规则镰刀菌(f.irregulare)、f.lacertarum、长尾镰刀菌(f.longicaudatum)、f.longifundum、丝瓜镰刀菌(f.luffae)、f.monophialidicum、f.mucidum、多头镰刀菌(f.multiceps)、f.nanum、新半裸镰刀菌(f.neosemitectum)、f.pernambucanum、桃色镰刀菌(f.persicinum)、藨草镰刀菌(f.scirpi)、苏拉威西镰刀菌(f.sulawesiense)、塔纳本布镰刀菌(f.tanahbumbuense)、九州镰刀菌(f.kyushuense)、f.larvarum、砖红镰刀菌(f.lateritium)、肤色镰刀菌(f.sarcochroum)、束梗镰刀菌(f.stilboides)、f.lunulosporum、f.macroceras、黑绿镰刀菌(f.melanochlorum)、南方镰刀菌(f.meridionale)、节镰刀菌(f.merismoides)、中美洲镰刀菌(f.mesoamericanum)、香蕉镰刀菌(f.musae)、f.musarum、新孢镰刀菌(f.neocosmosporiellum)、f.newnesense、共享镰刀菌(f.commune)、f.gaditjirri、f.lyarnte、芒草镰刀菌(f.miscanthi)、西门镰刀菌(f.nisikadoi)、f.nurragi、f.oligoseptatum、f.ophiodes、f.callistephi、f.carminascens、f.contaminatum、f.cugenangense、弯曲镰刀菌(f.curvatum)、f.duoseptatum、f.elaeidis、豆科镰刀菌(f.fabacearum)、臭镰刀菌(f.foetens)、大豆镰刀菌(f.glycines)、棉镰刀菌(f.gossypinum)、f.hoodiae、f.inflexum、f.languescens、f.libertatis、f.nirenbergiae、f.odoratissimum、尖孢镰刀菌(f.oxysporum)、
f.pharetrum、缓生厚垣镰刀菌(f.tardichlamydosporum)、三隔镰刀菌(f.triseptatum)、f.veterinarium、f.palustre、f.polyphialidicum、f.praegraminearum、f.pyriforme、芬芳镰刀菌(f.redolens)、网状镰刀菌(f.reticulatum)、f.riograndense、f.robustum、f.rusci、f.aethiopicum、f.armeniacum、亚洲镰刀菌(f.asiaticum)、海枣镰刀菌(f.brachygibbosum)、黄色镰刀菌(f.culmorum)、f.gerlachii、f.goolgardi、禾谷镰刀菌(f.graminearum)、f.langsethiae、f.longipes、f.louisianense、尼泊尔镰刀菌(f.nepalense)、f.nodosum、早熟禾镰刀菌(f.poae)、假禾谷镰刀菌(f.pseudograminearum)、接骨木镰刀菌(f.sambucinum)、f.sibiricum、拟枝孢镰孢(f.sporotrichioides)、f.transvaalense、f.venenatum、f.vorosii、底泥生镰刀菌(f.sedimenticola)、f.setosum、f.siculi、中华镰刀菌(f.sinensis)、f.ambrosium、巴西镰刀菌(f.brasiliense)、楔形镰刀菌(f.cuneirostrum)、f.euwallaceae、f.falciforme、f.floridanum、f.haematococcum、f.illudens、f.kelerajum、f.keratoplasticum、f.kuroshium、库鲁内格勒镰刀菌(f.kurunegalense)、栖地衣镰刀菌(f.lichenicola)、f.mahasenii、f.obliquiseptatum、f.paranaense、f.petroliphilum、菜豆镰刀菌(f.phaseoli)、f.plagianthi、f.pseudensiforme、f.rectiphorum、镰刀菌(f.rekanum)、茄镰刀菌(f.solani)、f.striatum、f.tuaranense、f.tucumaniae、枝状镰刀菌(f.virguliforme)、f.cicatricum、f.fuckelii、f.staphyleae、新西兰镰刀菌(f.zealandicum)、f.sterilihyphosum、亚热带镰刀菌(f.subtropicale)、f.sudanense、f.sulphureum、土生镰刀菌(f.terricola)、f.continuum、f.torreyae、花椒镰刀菌(f.zanthoxyli)、念珠镰刀菌(f.torulosum)、锐顶镰刀菌(f.acuminatum)、燕麦镰刀菌(f.avenaceum)、柔毛镰刀菌(f.flocciferum)、f.petersiae、三线镰刀菌(f.tricinctum)、f.tumidum、f.tupiense、f.ussurianum、f.ventricosum、疣状镰刀菌(f.verrucosum)、玉蜀黍镰刀菌(f.zeae),最优选地禾谷镰刀菌(fusarium graminearum);
[0185]-刺盘孢属(colletotrichum)物种:刺盘孢(c.acerbum)、c.acidae、c.abscissum、c.acutatum、c.brisbanense、c.cairnsense、c.carthami、c.chrysanthemi、柑橘刺盘孢(c.citri)、c.cosmi、c.costaricense、c.cuscutae、c.fioriniae、c.godetiae、c.guajavae、印尼刺盘孢(c.indonesiense)、爪哇刺盘孢(c.javanense)、刺盘孢(c.laticiphilum)、c.limetticola、羽扇豆刺盘孢(c.lupini)、瓜类刺盘孢(c.melonis)、c.nymphaeae、c.paranaense、c.paxtonii、c.salicis、c.scovillei、c.simmondsii、c.sloanei、c.tamarilloi、c.walleri、龙舌兰刺盘孢(c.agaves)、c.alcornii、c.ampelinum、c.arboricola、c.artocarpicola、c.arxii、c.atractylodicola、c.australe、c.axonopodi、巴尔的摩刺盘孢(c.baltimorense)、c.annellatum、c.beeveri、c.boninense、巴西刺盘孢(c.brasiliense)、芸薹生刺盘孢(c.brassicicola)、c.constrictum、c.karsti、c.petchii、c.phyllanthi、芸薹刺盘孢(c.brassicae)、山茶刺盘孢日本变种(c.camelliae-japonicae)、辣椒刺盘孢(c.capsici)、c.caricae、c.cariniferi、c.catinaense、c.caudasporum、刺盘孢(c.caudatum)、c.ochraceae、c.somersetense、c.zoysiae、c.chiangraiense、c.chlorophyti、c.citri-maximae、柑橘生刺盘孢(c.citricola)、c.clavatum、c.cobbittiense、c.coccodes、c.coelogynes、咖啡刺盘孢(c.coffeanum)、c.colombiense、c.condaoense、c.crassipes、c.cymbidiicola、
c.dacrycarpi、c.anthrisci、c.circinans、束状刺盘孢(c.dematium)、果生刺盘孢(c.fructi)、c.hemerocallidis、刺盘孢(c.insertae)、c.lineola、c.menispermi、c.quinquefoliae、c.sedi、菠菜刺盘孢(c.spinaciae)、c.shisoi、c.americae-borealis、c.antirrhinicola、c.bryoniicola、c.destructivum、c.fuscum、c.higginsianum、c.lentis、c.ocimi、c.panacicola、c.pisicola、c.tabaci、c.tanaceti、c.utrechtense、c.doitungense、c.duyunense、c.eryngiicola、大戟刺盘孢(c.euphorbiae)、c.excelsum-altitudinum、c.feijoicola、草莓刺盘孢(c.fragariae)、c.fructivorum、c.fusiforme、c.gigasporum、c.aenigma、c.aeschynomenes、刺盘孢(c.alatae)、c.alienum、c.aotearoa、亚洲刺盘孢(c.asianum)、山茶刺盘孢(c.camelliae)、昌平刺盘孢(c.changpingense)、c.chrysophilum、c.clidemiae、c.conoides、朱蕉生刺盘孢(c.cordylinicola)、c.endophyticum、果生刺盘孢(c.fructicola)、胶孢刺盘孢(c.gloeosporioides)、c.grevilleae、c.grossum、河北刺盘孢(c.hebeiense)、c.helleniense、河南刺盘孢(c.henanense)、c.horii、c.hystricis、江西刺盘孢(c.jiangxiense)、c.kahawae、c.makassarense、c.musae、萍蓬草生刺盘孢(c.nupharicola)、c.perseae、c.proteae、c.psidii、c.queenslandicum、c.salsolae、c.siamense、c.syzygiicola、台南刺盘孢(c.tainanense)、c.theobromicola、c.ti、热带刺盘孢(c.tropicale)、c.viniferum、无锡刺盘孢(c.wuxiense)、c.xanthorrhoeae、棉刺盘孢(c.gossypii)、黑麦刺盘孢(c.cereale)、稗刺疣刺盘孢(c.echinochloae)、c.eleusines、c.endophytum、c.eremochloae、c.falcatum、禾生刺盘孢(c.graminicola)、c.hanaui、c.jacksonii、c.miscanthi、c.navitas、c.nicholsonii、刺盘孢(c.paspali)、c.guaranicola、c.hederiicola、c.hippeastri、c.hsienjenchang、c.hymenocallidicola、c.incarnatum、c.jasminigenum、c.jinshuiense、c.johnstonii、c.kakivorum、c.kinghornii、c.kniphofiae、c.lagenaria、c.lauri、c.ledebouriae、c.limonicola、c.lini、c.lobatum、刺盘孢(c.magnisporum)、c.brevisporum、c.cacao、辽宁刺盘孢(c.liaoningense)、c.magnum、c.merremiae、c.okinawense、c.panamense、c.metake、c.neosansevieriae、烟草刺盘孢(c.nicotianae)、黑刺盘孢(c.nigrum)、c.novae-zelandiae、c.oncidii、c.bidentis、c.lindemuthianum、c.malvarum、c.orbiculare、c.sidae、c.tebeestii、车轴草刺盘孢(c.trifolii)、c.cattleyicola、刺盘孢(c.cliviicola)、c.dracaenophilum、c.musicola、c.orchidearum、c.piperis、c.plurivorum、c.sojae、c.vittalense、c.orchidophilum、露兜树生刺盘孢(c.pandanicola)、c.parallelophorum、c.parsonsiae、菜豆刺盘孢(c.phaseolorum)、c.phormii、c.phyllachoroides、豌豆刺盘孢(c.pisi)、c.pseudoacutatum、c.pseudomajus、c.pyricola、c.pyrifoliae、根刺盘孢(c.radicis)、c.rhexiae、c.rhombiforme、c.ricini、c.roseum、c.rusci、c.sambucicola、c.sansevieriae、c.serranegrense、c.sichuanense、c.sonchicola、c.bletillum、c.guizhouense、c.incanum、c.lilii、刺盘孢(c.liriopes)、c.riograndense、c.spaethianum、c.tofieldiae、c.verruculosum、c.spinosum、c.sublineola、赛多刺盘孢(c.sydowii)、台湾刺盘孢(c.taiwanense)、温带刺盘孢(c.temperatum)、c.torulosum、c.trichellum、c.tropicicola、c.aciculare、c.curcumae、平头刺盘孢(c.truncatum)、越南刺盘孢(c.vietnamense)、c.vignae、万宁刺盘孢(c.wanningense)、c.watphraense、
c.yulongense、云南刺盘孢(c.yunnanense),最优选地葫芦科刺盘孢(c.lagenarium);
[0186]-葡萄孢属(botrytis)物种:b.aclada、葱葡萄孢(b.allii)、b.arisaemae、亚麻色葡萄孢(b.byssoidea)、加利福尼亚葡萄孢(b.californica)、b.caroliniana、灰葡萄孢(b.cinerea)、b.croci、b.cryptomeriae、b.elliptica、b.eucalypti、b.euroamericana、蚕豆葡萄孢(b.faba)、b.fabae、b.fabiopsis、草莓葡萄孢(b.fragariae)、b.fuckeliana、b.galanthina、b.hyacinthi、b.mali、芍药葡萄孢(b.paeoniae)、b.pelargonii、韭葱葡萄孢(b.porri)、李葡萄孢(b.prunorum)、假灰葡萄孢(b.pseudocinerea)、b.sinoallii、b.sinoviticola、b.tulipae,最优选地灰葡萄孢;
[0187]-链格孢属(alternaria)物种:链格孢(a.abutilonis)、a.aconidiophora、葱链格孢(a.allii)、a.alstroemeriae、a.altcampina、a.alternariacida、a.anodae、a.argyranthemi、a.ascaloniae、a.atrans、a.azadirachtae、红豆链格孢(a.azukiae)、a.beticola、a.bokurai、芸薹链格孢(a.brassicae)、a.brassicinae、a.broccoli-italicae、a.broussonetiae、苔藓链格孢(a.bryophylli)、辣椒链格孢(a.capsicicola)、a.caricicola、a.carthamicola、a.catalpae、链格孢(a.catananches)、a.celosiae、a.centaureae、a.cerasi、a.cerasidanica、a.cesenica、藜生链格孢(a.chenopodiicola)、厚垣链格孢(a.chlamydosporifera)、a.chrysanthemi、柑橘链格孢(a.citricancri)、a.citrullicola、紧致链格孢(a.compacta)、a.conidiophora、a.curvata、a.cyamopsidis、a.dactylidicola、a.daturicola、a.dennisii、a.deserticola、a.dianthi、a.doliconidium、a.echinaceae、a.eichhorniae、a.ellisii、a.ershadii、a.fasciculata、a.fimeti、a.forlicesenensis、草莓链格孢(a.fragaria)、a.fulva、a.gansuensis、a.geophila、a.gossypina、a.grisea、a.grossulariae、a.hampshirensis、a.helianthiinficiens、a.heveae、腐质生链格孢(a.humicola)、a.hungarica、肿胀链格孢(a.inflata)、a.interrupta、番薯链格孢(a.ipomoeae)、a.iranica、澳洲鸢尾链格孢(a.iridiaustralis)、鸢尾生链格孢(a.iridicola)、a.iridis、意大利链格孢(a.italica)、a.jacinthicola、a.jesenskae、a.kareliniae、a.kordkuyana、a.lawrencei、a.linariae、a.longissima、a.maritima、a.montanica、a.montsantina、a.murispora、a.napiformis、a.nelumbii、新番薯链格孢(a.neoipomoeae)、a.novae-guineensis、a.obtecta、a.ochroleuca、a.oxytropis、a.padwickii、a.paralinicola、a.parvicaespitosa、a.peglionii、a.peucedani、a.pharbitidis、a.physalidis、a.pipionipisi、a.pluriseptata、a.poaceicola、a.pobletensis、a.pomicola、a.populi、a.prasonis、a.pruni、链格孢(a.pseudoventricosa)、a.pulvinifungicola、栎生链格孢(a.quercicola)、a.quercus、a.ranunculi、a.resedae、a.roseogrisea、a.rosicola、a.sanguisorbae、番泻叶链格孢(a.sennae)、芝麻生链格孢(a.sesamicola)、a.sidae、a.silybi、a.soliaridae、a.sorghicola、a.tamaricis、a.thalictrigena、a.thlaspis、a.thunbergiae、a.tillandsiae、a.tomato、a.tropaeoli、a.undulata、a.vaccinii、a.vanuatuensis、a.venezuelensis、a.viniferae、葡萄链格孢(a.viticola)、a.vitis、链格孢(a.yaliinficiens),最优选地交链格孢(a.alternata);
[0188]-暗球腔菌属(phaeosphaeria)物种:金合欢暗球腔菌(p.acaciae)、p.ammophilae、p.ampeli、p.anchiala、p.arenaria、p.berlesei、p.breonadiae、菖蒲生暗
球腔菌(p.calamicola)、苔草生暗球腔菌(p.caricicola)、p.caricinella、p.caricis、p.chiangraina、禾秆暗球腔菌(p.culmorum)、苏铁暗球腔菌(p.cycadis)、p.dennisiana、伸长暗球腔菌(p.elongata)、p.epicalamia、p.eustoma、p.fuckelii、p.fusispora、折甜茅暗球腔菌(p.glyceriae-plicatae)、p.graminis、p.halima、柔毛暗球腔菌(p.herpotrichoides)、p.insignis、p.juncicola、p.juncina、p.juncophila、p.lindii、p.luctuosa、暗球腔菌(p.lunariae)、浅黄暗球腔菌(p.lutea)、石松暗球腔菌(p.lycopodina)、马西山暗球腔菌(p.marciensis)、拟暗球腔菌(p.musae)、p.nardi、p.nigrans、p.norfolcia、隐匿暗球腔菌(p.occulta)、橄榄暗球腔菌(p.olivacea)、p.orae-maris、稻暗球腔菌(p.oryzae)、番木瓜暗球腔菌(p.papayae)、p.parvula、狼尾草暗球腔菌(p.penniseti)、拟刺葵生暗球腔菌(p.phoenicicola)、p.pleurospora、p.poagena、p.podocarpi、p.pontiformis、p.rousseliana、p.setosa、p.silenes-acaulis、森林暗球腔菌(p.silvatica)、中华暗球腔菌(p.sinensis)、p.sowerbyi、米草暗球腔菌(p.spartinae)、p.spartinicola、粽叶芦生暗球腔菌(p.thysanolaenicola)、岩菖蒲暗球腔菌(p.tofieldiae)、水麦冬生暗球腔菌(p.triglochinicola)、p.vagans、暗球腔菌(p.volkartiana),最优选地颍枯暗球腔菌(p.nodorum);
[0189]-壳球孢属(macrophomina)物种:大戟壳球孢(m euphorbiicola)、伪菜豆壳球孢(m.pseudophaseolina)、越桔壳球(m.vaccinii)、菜豆壳球孢(m.phaseolina),最优选地菜豆壳球孢;
[0190]-发酵壳针孢属(zymoseptoria)物种:粗柄发酵壳针孢(z.ardabiliae)、短柄发酵壳针孢(z.brevis)、新月形发酵壳针孢(z.crescenta)、嗜盐发酵壳针孢(z.halophila)、雀形目发酵壳针孢(z.passerinii)、假小麦发酵壳针孢(z.pseudotritici)、小麦发酵壳针孢(z.tritici)、发酵壳针孢(z.verkleyi),最优选地小麦发酵壳针孢;
[0191]-丝核菌属(rhizoctonia)物种:高山丝核菌(r.alpina)、双角丝核菌(r.bicornis)、r.butinii、丝核菌(r.callae)、胡萝卜丝核菌(r.carotae)、丝核菌(r.endophytica)、丛毛丝核菌(r.floccosa)、草莓丝核菌(r.fragariae)、梣丝核菌(r.fraxini)、梭孢丝核菌(r.fusispora)、球状丝核菌(r.globularis)、棉丝核菌(r.gossypii)、丝核菌(r.muneratii)、番木瓜丝核菌(r.papayae)、栎丝核菌(r.quercus)、匍匐丝核菌(r.repens)、悬钩子丝核菌(r.rubi)、林地丝核菌(r.silvestris)、立枯丝核菌(r.solani),最优选地立枯丝核菌;
[0192]-亡革菌属(thanatephorus)物种:瓜亡革菌(t.cucumeris)、t.obscurus、赭色亡革菌(t.ochraceus)、悬垂(t.pendulus)、佐木氏亡革菌(t.sasakii),最优选地瓜亡革菌;
[0193]-单胞锈菌属(uromyces)物种:单孢锈菌(u.acetosae)、u.acuminatus、u.aemulus、u.aloes、u.alopecuri、u.alyxiae、u.anthyllidis、疣顶单孢锈菌(u.appendiculatus)、u.ari-triphylli、甜菜单孢锈菌(u.betae)、甜菜生单孢锈菌(u.beticola)、u.bidenticola、鳞芹生单孢锈菌(u.bulbinicola)、常绿苔草单孢锈菌(u.caricis-sempervirentis)、u.cestri、鹰嘴豆单孢锈菌(u.ciceris-arietini)、u.clignyi、u.coloradensis、鸭趾草单孢锈菌(u.commelinae)、冠状单孢锈菌(u.coronatus)、鸭茅单孢锈菌(u.dactylidis)、u.dianthi、u.dolicholi、u.durus、皱稃草单孢锈菌(u.ehrhartae)、画眉草单孢锈菌(u.eragrostidis)、u.erythronii、大戟单孢锈
菌(u.euphorbiae)、u.euphorbiae-corniculati、u.ficariae、u.gageae、u.galegae、u.gaubae、老鹳草单孢锈菌(u.geranii)、u.gladioli、u.goyazensis、u.halstedii、u.hawksworthii、暗味岩黄芪单胞锈菌(u.hedysari-obscuri)、u.hobsonii、u.holwayi、u.hordeinus、u.inaequialtus、u.intricatus、鸢属单孢锈菌(u.ixiae)、日本单孢锈菌(u.japonicus)、u.jonesii、u.junci、u.klotzschianus、毒豆单孢锈菌(u.laburni)、平铺胡枝子单胞锈菌(u.lespedezae-procumbentis)、补血草单孢锈菌(u.limonii)、u.lomandracearum、羽扇豆单孢锈菌(u.lupini)、u.lycoctoni、u.magnusii、u.minor、芭蕉单孢锈菌(u.musae)、u.muscari、新热带单孢锈菌(u.neotropicalis)、u.novissimus、u.oaxacanus、u.orientalis、u.otaviensis、u.pedicellata、u.peglerae、菜豆单胞锈菌(u.phaseoli)、豌豆单孢锈菌(u.pisi)、豌豆单孢锈菌u.pisi-sativi、u.plumbarius、萹蓄单胞锈菌(u.polygoni-avicularis)、u.probus、斑点单孢锈菌(u.punctatus)、u.reichertii、酸模单孢锈菌(u.rumicis)、猪毛菜单孢锈菌(u.salsolae)、草海桐单孢锈菌(u.scaevolae)、u.scillarum、u.scrophulariae、u.scutellatus、粟单孢锈菌(u.setariae-italicae)、u.socius、u.sommerfeltii、鼠尾粟生单孢锈菌(u.sporobolicola)、条纹单孢锈菌(u.striatus)、u.striolatus、u.strobilanthis、u.tenuicutis、u.transversalis、车轴草单孢锈菌(u.trifolii)、白轴草单孢锈菌(u.trifolii-repentis)、蚕豆单胞锈菌(u.viciae-fabae)、豇豆单孢锈菌(u.vignae)、u.wedeliae、单孢锈菌(u.zygadeni),最优选地疣顶单胞锈菌(u.appendiculatus);
[0194]-柄锈菌属(puccinia)物种:p.aberrans、异常柄锈菌(p.abnormis)、p.abrupta、p.acetosae、鲜卑芨芨草柄锈菌(p.achnatheri-sibirici)、p.acroptili、类叶升麻-冰草柄锈菌(p.actaeae-agropyri)、类叶升麻-滨麦柄锈菌(p.actaeae-elymi)、p.adenocauli、p.aegopodii、p.afra、p.agrophila、p.agropyrina、p.aizazii、p.albescens、p.albulensis、葱柄锈菌(p.allii)、p.alpina、p.amari、p.andropogonis、p.annularis、金鱼草柄锈菌(p.antirrhini)、花生柄锈菌(p.arachidis)、无心菜柄锈菌(p.arenariae)、p.argentata、p.aridariae、p.arrhenatheri、p.arrhenathericola、p.artemisiae-keiskeanae、p.arthrocnemi、p.arundinariae、p.asarina、p.asparagi、p.asteris、p.atra、p.aucta、p.baccharidis、p.ballotiflora、p.balsamorrhizae、p.bardanae、p.bartholomaei、p.bassiae、p.berkheyicola、p.bistortae、p.boroniae、短柄草柄锈菌(p.brachypodii)、p.bromina、p.bupleuri、p.buxi、p.cacabata、p.calcitrapae、驴蹄草柄锈菌(p.calthae)、p.calthicola、p.calystegiae-soldanellae、p.canaliculata、p.cannacearum、p.cardui-pycnocephali、p.carduorum、薹草柄锈菌(p.caricina)、苔草柄锈菌(p.caricis)、p.caricis-montanae、p.caricis-stipatae、p.carissae、红花柄锈菌(p.carthami)、p.cenchri、p.cerinthes-agropyrina、p.cesatii、p.chardoniensis、p.chloridis、p.chondrillina、p.chrysanthemi、p.chrysosplenii、p.chunjii、p.circaeae、p.circumdata、p.clavata、p.cnici、p.cnici-oleracei、p.codyi、p.coleataeniae、p.colossea、p.commelinae、p.conoclinii、p.consimilis、p.convolvuli、冠柄锈菌(p.coronata)、早熟禾冠柄锈菌(p.coronati-agrostidis)、p.coronati-brevispora、p.coronati-calamagrostidis、p.coronati-hordei、p.coronati-japonica、p.coronati-longispora、p.crandallii、p.crepidis-japonicae、
p.crotonopsidis、p.crupinae、p.cumminsii、p.cyani、p.cygnorum、p.cymbopogonis、p.cynodontis、p.cyperi、p.dactylidina、p.dampierae、p.dianellae、p.dichondrae、p.dietelii、p.digitata、p.digraphidis、p.dimidipes、p.dioicae、p.dispersa、p.distincta、p.dolosa、p.drabae、p.dracunculina、p.durangensis、p.duthiae、披碱草柄锈菌(p.elymi)、p.emaculata、p.emiliae、p.esclavensis、p.eupatorii-columbiani、p.fergussonii、p.ferruginosa、p.firma、p.flavenscentis、p.fumosa、p.funkiae、p.galeniae、p.galiiuniversa、p.gansensis、p.gastrolobii、p.geitonoplesii、多毛老鹳草柄锈菌(p.geranii-pilosi)、p.gigantea、p.gilgiana、p.glechomatis、p.globosipes、p.gnaphaliicola、禾生柄锈菌(p.graminicola)、禾谷柄锈菌(p.graminis)、p.grevilleae、p.haemodori、p.helianthi、p.hemerocallidis、p.heterogenea、p.heterospora、p.heucherae、p.hieracii、p.holcina、大麦柄锈菌(p.hordei)、p.hordei-secalini、p.horiana、p.hydrocotyles、柄锈菌(p.hypochoeridis)、p.hysterium、p.impatientis、p.impedita、p.imposita、p.insolita、鸢尾柄锈菌(p.iridis)、芦苇柄锈菌(p.isiacae)、p.jaceae、茉莉柄锈菌(p.jasmini)、p.jogashimensis、p.junci、爵床柄锈菌(p.justiciae)、p.klugkistiana、p.knersvlaktensis、p.komarovii、p.kuehnii、p.kusanoi、瓶头草柄锈菌(p.lagenophorae)、马缨丹柄锈菌(p.lantanae)、稻搓菜柄锈菌(p.lapsanae)、p.lasiacidis、p.lateritia、p.levis、p.liberta、百合柄锈菌(p.liliacearum)、p.linkii、p.linosyridis-caricis、p.lippiivora、p.littoralis、p.lobata、p.lophatheri、p.loranthicola、p.ludwigii、地杨梅柄锈菌(p.luzulae)、p.luzulae-maximae、p.lycii、p.lygodii、p.macra、p.maculosa、马格纳斯柄锈菌(p.magnusiana)、p.malvacearum、p.mariae-wilsoniae、p.marrubii、p.melampodii、p.melanocephala、p.mellifera、p.menthae、p.merrilliana、p.mesembryanthemi、p.mesnieriana、p.meyeri-albertii、p.mikaniae、p.millefolii、p.millegranae、p.miscanthi、p.miscanthidii、p.mixta、p.modiolae、p.monoica、p.montanensis、p.morata、p.morrisoni、p.morthieri、p.muehlenbeckiae、p.myrsiphylli、p.mysuruensis、p.nakanishikii、p.nepalensis、p.nigrescens、p.nishidana、p.nitida、p.novopanici、p.oahuensis、模糊柄锈菌(p.obscura)、p.ocimi、p.oenanthes-stoloniferae、p.operta、p.otzeniani、p.oxalidis、p.oxyriae、p.paederiae、p.paludosa、p.pammelii、p.pampeana、p.pappophori、p.paradoxapoda、p.pascua、p.paspali、p.paspalina、p.patriniae、p.paullula、p.pazschkei、p.pelargonii-zonalis、p.penicillariae、p.pentstemonis、p.peperomiae、p.peradeniyae、p.perplexans、p.persistens、p.phlomidis、p.physalidis、茴芹柄锈菌(p.pimpinellae)、p.pittieriana、p.platyspora、p.poae-nemoralis、p.poarum、p.polygoni-amphibii、p.polysora、p.porri、p.pritzeliana、p.prostii、p.pseudodigitata、p.pseudomesnieriana、假条形柄锈菌(p.pseudostriiformis)、p.psychotriae、p.punctata、p.punctiformis、p.purpurea、p.rapipes、隐匿柄锈菌(p.recondita)、p.rhagodiae、p.rhaphidophorae、p.rhei-undulati、p.ribesii-caricis、p.ribesii-diversicoloris、p.ribesii-pendulae、p.ribis、p.rufipes、p.rupestris、p.saccardoi、p.salihae、p.salviae、p.saxifragae、p.scirpi、p.scleriae、p.scorzonerae、
p.senecionis、p.senecionis-acutiformis、p.septentrionalis、p.serpylli、p.sessilis、p.setariae、p.sherardiana、p.silphii、p.silvatica、p.similis、p.smilacis、p.sorghi、p.sparganioidis、p.spegazzinii、p.sporoboli、p.stipina、p.stobaeae、p.striiformis、p.striiformoides、p.stylidii、p.subalpina、p.substriata、p.suzutake、p.symphoricarpi、p.taeniatheri、p.tageticola、p.tanaceti、p.tatarinovii、p.tetragoniae、p.thaliae、p.thlaspeos、p.tillandsiae、p.tiritea、p.trebouxi、p.triticina、p.tubulosa、p.tulipae、p.tumidipes、p.turgida、p.uliginosa、p.unciniarum、p.unica、p.urbaniana、p.ursiniae、p.urticae-acutae、p.urticae-acutiformis、p.urticae-caricis、p.urticae-hirtae、p.urticae-inflatae、p.urticata、p.vaga、具鞘苔草柄锈菌(p.vaginatae)、p.vernoniae-mollis、p.veronicae-longifoliae、变色柄锈菌(p.versicolor)、p.vexans、p.vincae、p.violae、p.virgata、一枝黄花柄锈菌(p.virgaureae)、p.wahlenbergiae、p.wiehei、温得和克柄锈菌(p.windhoekensis)、p.windsoriae、p.wolgensis、p.wyomensis、苍耳柄锈菌(p.xanthii)、p.xanthosiae、结缕草柄锈菌(p.zoysiae),最优选地小麦柄锈菌;
[0195]-黑粉菌属(ustilago)物种:u.abaconensis、u.aeluropodis、u.affinis、u.agrostidis-palustris、u.airae-caespitosae、u.alcornii、u.alopecurivora、u.altilis、u.austro-africana、燕麦散黑粉菌(u.avenae)、u.bouriqueti、u.brizae、u.bromina、雀麦黑粉菌(u.bromivora)、雀麦黑粉菌(u.bullata)、拂子茅黑粉菌(u.calamagrostidis)、u.chloridis、薏苡黑粉菌(u.coicis)、u.comburens、u.corcontica、粟黑粉菌(u.crameri)、u.cruenta、u.curta、狗牙根黑粉菌(u.cynodontis)、戴维斯黑粉菌(u.davisii)、u.denotarisii、u.drakensbergiana、u.echinata、菰黑粉菌(u.esculenta)、甜茅黑粉菌(u.filiformis)、芦苇黑粉菌(u.grandis)、大麦坚黑粉菌(u.hordei)、u.inaltilis、u.ixophori、u.jagei、u.kamerunensis、u.kummeri、u.levis、u.lituana、u.loliicola、u.longissima、玉米黑粉菌(u.maydis)、u.milii、u.neocopinata、类芦黑粉菌(u.neyraudiae)、大麦散黑粉菌(u.nuda)、u.nunavutica、u.pamirica、u.panici-gracilis、u.perennans、u.phrygica、u.pinguiculae、u.porosa、u.quitensis、u.salveii、u.scaura、u.schmidtiae、u.schroeteriana、蜂窝状黑粉菌(u.scrobiculata)、赖草黑粉菌(u.serpens)、山西黑粉菌(u.shanxiensis)、白井黑粉菌(u.shiraiana)、暹罗黑粉菌(u.siamensis)、u.sieglingiae、u.sparsa、u.sparti、画眉黑粉菌(u.spermophora)、u.sphaerogena、u.spinificis、印度鼠尾粟黑粉菌(u.sporoboli-indici)、条形黑粉菌(u.striiformis)、马唐黑粉菌(u.syntherismae)、u.tragana、婆罗门参黑粉菌(u.tragopogonis-pratensis)、稗黑粉菌(u.trichophora)、小麦散黑粉菌(u.tritici)、土库曼黑粉菌(u.turcomanica)、香根黑粉菌(u.vetiveriae)、u.vinosa、威廉斯黑粉菌(u.williamsii)、旱米草黑粉菌(u.xerochloae),最优选地u.segetum;
[0196]-腐霉属腐霉(pythium)物种:p.abappressorium、棘腐霉(p.acanthicum)、顶生腐霉(p.acrogynum)、粘腐霉(p.adhaerens)、无性腐霉(p.afertile)、p.alternatum、孤雌腐霉(p.amasculinum)、无雄腐霉(p.anandrum)、狭囊腐霉(p.angustatum)、瓜果腐霉(p.aphanidermatum)、p.apiculatum、未满器腐霉(p.apleroticum)、浮游腐霉
(p.aquatile)、芒孢腐霉(p.aristosporum)、强雄腐霉(p.arrhenomanes)、引雄腐霉(p.attrantheridium)、p.baisense、p.barbulae、p.biforme、二歧腐霉(p.bifurcatum)、p.brachiatum、甘蓝腐霉(p.brassicum)、短枝腐霉(p.breve)、p.buismaniae、p.burgundicum、巴特勒腐霉(p.butleri)、钟形腐霉(p.campanulatum)、p.camurandrum、加纳利腐霉(p.canariense)、p.capillosum、卡地腐霉(p.carolinianum)、链状腐霉(p.catenulatum)、腐霉(p.cederbergense)、腐霉(p.cedri)、软骨生腐霉(p.chondricola)、色孢腐霉(p.coloratum)、菌丝状腐霉(p.conidiophorum)、p.contiguanum、隐畸雄腐霉(p.cryptoirregulare)、葫芦科腐霉(p.cucurbitacearum)、筒孢腐霉(p.cylindrosporum)、成囊腐霉(p.cystogenes)、德巴利腐霉(p.debaryanum)、德里腐霉(p.deliense)、毁坏腐霉(p.destruens)、异丝腐霉(p.diclinum)、二态腐霉(p.dimorphum)、p.dissimile、宽雄腐霉(p.dissotocum)、p.echinogynum、针棘腐霉(p.echinulatum)、p.emineosum、猬木腐霉(p.erinaceum)、p.ershadii、弗莱福腐霉(p.flevoense)、囊形腐霉(p.folliculosum)、球序腐霉(p.glomeratum)、禾生腐霉(p.graminicola)、大孢囊腐霉(p.grandisporangium)、广西腐霉(p.guangxiense)、贵阳腐霉(p.guiyangense)、旋雄腐霉(p.helicandrum)、p.heteroogonium、p.heterothallicum、p.hydnosporum、腐霉(p.hypogynum)、木蓝腐霉(p.indigoferae)、肿囊腐霉(p.inflatum)、诡谲腐霉(p.insidiosum)、畸雌腐霉(p.irregulare)、岩山腐霉(p.iwayamai)、茉莉腐霉(p.jasmonium)、p.junctum、坎多万腐霉(p.kandovanense)、克什米尔万腐霉(p.kashmirense)、昆明腐霉(p.kunmingense)、长雄腐霉(p.longandrum)、长乳突腐霉(p.longipapillum)、长孢囊腐霉(p.longisporangium)、腐霉(p.lucens)、腐霉(p.lutarium)、番茄腐霉(p.lycopersicum)、巨孢腐霉(p.macrosporum)、乳突腐霉(p.mamillatum)、海洋腐霉(p.marinum)、p.mastophorum、大雄腐霉(p.megalacanthum)、奇雄腐霉(p.middletonii)、小腐霉(p.minus)、简囊腐霉(p.monospermum)、多孢腐霉(p.multisporum)、p.myophilum、群结腐霉(p.myriotylum)、长井腐霉(p.nagaii)、结节腐霉(p.nodosum)、努氏腐霉(p.nunn)、奥卡纳根腐霉(p.okanoganense)、寡雄腐霉(p.oligandrum)、p.oopapillum、p.ornacarpum、腐霉p.ornamentatum、p.oryzicollum、粗缆腐霉(p.pachycaule)、p.paddicum、短小腐霉(p.parvum)、解果胶腐霉(p.pectinolyticum)、周雄腐霉(p.periilum)、缠器腐霉(p.periplocum)、无序腐霉(p.perplexum)、芦苇生腐霉(p.phragmiticola)、芦根腐霉(p.phragmitis)、满器腐霉(p.pleroticum)、多卵腐霉(p.plurisporium)、极地腐霉(p.polare)、p.polymastum、紫菜腐霉(p.porphyrae)、p.prolatum、层出腐霉(p.proliferatum)、绚丽腐霉(p.pulchrum)、p.pyrilobum、p.pyrioosporum、栎腐霉(p.quercum)、辐射腐霉(p.radiosum)、p.recalcitrans、规则腐霉(p.regulare)、蔗根腐霉(p.rhizosaccharum)、利尻腐霉(p.rishiriense)、p.rostratifingens、喙腐霉(p.rostratum)、腐霉(p.salinum)、角柄腐霉(p.salpingophorum)、施密特腐霉(p.schmitthenneri)、硬腐霉(p.scleroteichum)、p.segnitium、p.selbyi、p.senticosum、p.solare、针腐霉(p.spiculum)、p.sterilum、密集腐霉(p.stipitatum)、p.sukuiense、沟腐霉(p.sulcatum)、林栖腐霉(p.sylvaticum)、高山腐霉(p.takayamanum)、缓生腐霉(p.tardicrescens)、土栖腐霉(p.terrestris)、簇囊腐霉(p.torulosum)、嗜管腐霉(p.tracheiphilum)、弯柱腐霉(p.uncinulatum)、p.urmianum、
p.utonaiense、范特腐霉(p.vanterpoolii)、p.viniferum、墓菜腐霉(p.violae)、卷旋腐霉(p.volutum)、腐霉(p.yorkensis)、姜腐(p.zingiberis),最优选地,终极腐霉(p.ultimum)和畸雌腐霉(p.irregulare);
[0197]-疫霉属(phytophthora)物种:p.abietivora、槭疫霉(p.acerina)、p.agathidicida、p.aleatoria、赤杨叶疫霉(p.alni)、p.alticola、苋菜疫霉(p.amaranthi)、p.amnicola、p.andina、p.aquimorbida、槟榔疫霉(p.arecae)、无心菜疫霉(p.arenaria)、亚洲疫霉(p.asiatica)、芦笋疫霉(p.asparagi)、p.attenuata、智利翠柏(p.austrocedrae)、p.balyanboodja、p.batemanensis、木番茄疫霉(p.betacei)、p.bilorbang、p.bisheria、毕氏疫霉(p.bishii)、苎麻疫霉(p.boehmeriae)、疫霉(p.boodjera)、北方疫霉(p.borealis)、簇囊疫霉(p.botryosa)、芸薹疫霉(p.brassicae)、恶疫霉(p.cactorum)、山峰疫霉(p.cacuminis)、木豆疫霉(p.cajani)、栗黑水疫霉(p.cambivora)、好望角疫霉(p.capensis)、辣椒疫霉(p.capsici)、欺骗疫霉(p.captiosa)、山核桃疫霉(p.caryae)、日本栗疫霉(p.castaneae)、欧洲栗疫霉(p.castanetorum)、p.chesapeakensis、厚垣疫霉(p.chlamydospora)、菊疫霉(p.chrysanthemi)、菊苣疫霉(p.cichorii)、樟疫霉(p.cinnamomi)、柑橘生疫霉(p.citricola)、柑橘褐腐疫霉(p.citrophthora)、隐蔽疫霉(p.clandestina)、椰子疫霉(p.cocois)、芋疫霉(p.colocasiae)、木麻黄疫霉(p.condilina)、弱缢疫霉(p.constricta)、库尔加罗疫霉(p.cooljarloo)、厚壁疫霉(p.crassamura)、隐地疫霉(p.cryptogea)、p.cuyabensis、莎草疫霉(p.cyperi)、胡萝卜疫霉(p.dauci)、掘氏疫霉(p.drechsleri)、伸长疫霉(p.elongata)、绯腐疫霉(p.erythroseptica)、河口疫霉(p.estuarina)、欧洲疫霉(p.europaea)、狡猾疫霉(p.fallax)、弯曲疫霉(p.flexuosa)、水滨疫霉(p.fluvialis)、叶病疫霉(p.foliorum)、美丽疫霉(p.formosa)、台湾疫霉(p.formosana)、草莓疫霉(p.fragariae)、草莓叶冠疫霉(p.fragariaefolia)、耐寒疫霉(p.frigida)、p.gallica、并蒂疫霉(p.gemini)、盈凸疫霉(p.gibbosa)、格氏疫霉(p.glovera)、节水霉状疫霉(p.gonapodyides)、冈瓦纳疫霉(p.gondwanensis)、茎褐腐疫霉(p.gregata)、短雄疫霉(p.hedraiandra)、橡胶疫霉(p.heveae)、冬生疫霉(p.hibernalis)、喜马拉雅疫霉(p.himalayensis)、p.himalsilva、腐殖疫霉(p.humicola)、水生疫霉(p.hydrogena)、水致病疫霉(p.hydropathica)、覆盆子疫霉(p.idaei)、冬青疫霉(p.ilicis)、肿囊疫霉(p.inflata)、缺雄疫霉(p.insolita)、居间疫霉(p.intercalaris)、缠结疫霉(p.intricata)、水湿疫霉(p.inundata)、番薯疫霉(p.ipomoeae)、伊朗疫霉(p.iranica)、灌溉疫霉(p.irrigata)、p.katsurae、康沃尔疫霉(p.kernoviae)、p.kwongonina、莴苣疫霉(p.lactucae)、湖泊疫霉(p.lacustris)、雪松疫霉(p.lateralis)、百合疫霉(p.lilii)、荔枝疫霉(p.litchii)、海滨疫霉(p.litoralis)、纤长疫霉(p.macilentosa)、大厚垣疫霉(p.macrochlamydospora)、米氏疫霉(p.meadii)、苜蓿疫霉(p.medicaginis)、大核疫霉(p.megakarya)、大雄疫霉(p.megasperma)、瓜类疫霉(p.melonis)、门氏疫霉(p.mengei)、墨西哥疫霉(p.mexicana)、奇异疫霉(p.mirabilis)、密西西比疫霉(p.mississippiae)、巴戟天疫霉(p.morindae)、多泡疫霉(p.multivesiculata)、多嗜疫霉(p.multivora)、永井氏疫霉(p.nagaii)、p.nemorosa、烟草疫霉(p.nicotianae)、尼氏疫霉(p.niederhauseri)、p.niederhauserii、模糊疫霉
(p.obscura)、隐匿疫霉(p.occultans)、油橄榄疫霉(p.oleae)、山地疫霉(p.oreophila)、装饰疫霉(p.ornamentata)、厚囊疫霉(p.pachypleura)、棕榈疫霉(p.palmivora)、寄生疫霉(p.parasitica)、波斯疫霉(p.parsiana)、小孢疫霉(p.parvispora)、菜豆疫霉(p.phaseoli)、疫霉(p.pini)、针叶疫霉(p.pinifolia)、豌豆疫霉(p.pisi)、阿月浑子疫霉(p.pistaciae)、多食疫霉(p.plurivora)、p.pluvialis、波兰疫霉(p.polonica)、韭葱疫霉(p.porri)、报春疫霉(p.primulae)、假隐地疫霉(p.pseudocryptogea)、假莴苣疫霉(p.pseudolactucae)、假波兰疫霉(p.pseudopolonica)、假蔷薇疫霉(p.pseudorosacearum)、假丁香疫霉(p.pseudosyringae)、花旗松疫霉(p.pseudotsugae)、嗜冷疫霉(p.psychrophila)、栎林疫霉(p.quercetorum)、栎疫霉(p.quercina)、金鸡纳疫霉(p.quininea)、根际疫霉(p.rhizophorae)、马蹄莲疫霉(p.richardiae)、河岸林疫霉(p.riparia)、蔷薇疫霉(p.rosacearum)、悬钩子疫霉(p.rubi)、p.sansomeana、中华疫霉(p.sinensis)、西斯基尤疫霉(p.siskiyouensis)、大豆疫霉(p.sojae)、p.stricta、p.sulawesiensis、丁香疫霉(p.syringae)、p.tabaci、p.tentaculata、顶花疫霉(p.terminalis)、嗜热疫霉(p.thermophila)、车轴草疫霉(p.trifolii)、热带疫霉(p.tropicalis)、p.tubulina、第勒尼安疫霉(p.tyrrhenica)、p.uliginosa、p.undulata、单形疫霉(p.uniformis)、红珠麻疫霉(p.urerae)、豇豆疫霉(p.vignae)、弗吉尼亚疫霉(p.virginiana)、火山土疫霉(p.vulcanica)、p.heterohybrida、p.incrassata、多形疫霉(p.multiformis)、天竺葵疫霉(p.pelgrandis)、p.serendipita、最优选地致病疫霉(p.infestans);
[0198]-单轴霉属(plasmopara)物种:白芷单轴霉(p.angelicae)、苍耳单轴霉(p.angustiterminalis)、澳洲单轴霉(p.australis)、p.baudysii、p.chaerophylli、p.constantinescui、p.densa、葱单轴霉(p.destructor)、柳叶菜单轴霉(p.epilobii)、水米草单轴霉(p.euphrasiae)、天竺葵单轴霉(p.geranii)、天竺葵-林栖单轴霉(p.geranii-sylvatici)、郝氏单轴霉(p.halstedii)、p.invertifolia、p.laserpitii、马耶氏单轴霉(p.majewskii)、大雄单轴霉(p.megasperma)、p.mei-foeniculi、墙壁单轴霉(p.muralis)、雪白单轴霉(p.nivea)、凤仙单轴霉(p.obducens)、欧防风单轴霉(p.pastinacae)、狼尾草单轴霉(p.penniseti)、前胡单轴霉(p.peucedani)、茴芹单轴霉(p.pimpinellae)、p.praetermissa、微小单轴霉(p.pusilla)、豨莶草单轴霉(p.siegesbeckiae)、p.sii、斯哥佐单轴霉(p.skvortzovii)、一枝黄花单轴霉(p.solidaginis)、蟛蜞菊生单轴霉(p.sphagneticolae)、p.velutina、葡萄生疫霉(p.viticola)、p.wildemaniana、p.wilsonii,最优选地葡萄生疫霉(p.viticola),
[0199]-假霜霉属(pseudoperonospora)物种:大麻假霜霉(p.cannabina)、朴树假霜霉(p.celtidis)、古巴假霜霉(p.cubensis)、葎草假霜霉(p.humuli)、荨麻假霜霉(p.urticae),最优选地古巴假霜霉。
[0200]
特别有利的是,本发明的植物健康促进组合物有效对抗镰刀菌属(fusarium)的病原体,如实施例所显示。
[0201]
相应地,本发明还提供一种用于防止、限制或减少植物病原性真菌疾病和/或增加植物健康的方法,所述方法包括向植物、其部分或繁殖材料或向植物应在其中生长的土壤施加有效量的本发明的植物健康促进组合物。因此,植物健康促进组合物可以如本文所述
那样发挥其有益作用。
[0202]
下文通过实施例并参考附图描述本发明。附图和实施例均不意在限制本发明的范围。
实施例
[0203]
实施例1:烟酸添加改善生长
[0204]
培养基
[0205]
预培养培养基:px-125
[0206]
下表中列出px-125的组成。母液的组分溶解于蒸馏水中并且经无菌过滤或121℃,1巴超压高压灭菌60分钟。无菌溶液储存在室温或4℃。将消泡剂在马上启动高压灭菌过程之前添加至主溶液。在混合母液后,用25%(w/w)氨溶液或40%(w/w)磷酸设定培养基的ph至6.5。
[0207]
表:复合培养基px125的组成连同母液储存规范(室温(rt)或4℃)和灭菌方法(无菌过滤/高压灭菌,s/a)。
[0208][0209][0210]
主培养培养基:改良poolman培养基
[0211]
表:改良poolman培养基的组成连同母液储存规范(室温(rt)或4℃)和灭菌方法
(无菌过滤/高压灭菌,s/a)。
[0212]
[0213]
[0214][0215]
将母液的组分溶解于蒸馏水中并且当需要时,添加氢氯酸和氢氧化钾以溶解维生素组分、核苷酸组分和氨基酸组分。
[0216]
用氢氧化钠设定含mes缓冲液的母液的ph至6.5。用磷酸设定磷酸氢二钾溶液至ph 6.5。将poolman培养基的溶液在121℃和1巴超压经高压灭菌60分钟或无菌过滤。无菌溶液储存在室温或在4℃。全部母液均一并分装(pipetted together),并用25%(w/w)铵溶液和40%(w/w)磷酸设定ph至ph6.5。在结束时,添加磷酸氢二钾溶液。
[0217]
培养条件
[0218]
作为预培养物,将30ml px-125培养基用180μl深低温小瓶培养物接种。培养在33℃按振摇频率150转/分钟和25mm振摇直径在硅胶塞密封的250ml摇瓶进行24小时。
[0219]
对于主培养物,随后将改良poolman培养基用2%(v/v)预培养物接种。测试改良poolman培养基的组成。作为参比,使用含标准浓度维生素溶液的改良poolman培养基。随后作为第二培养基,使用三倍浓度的维生素溶液,并且测试具有三倍烟酸浓度和标准维生素溶液的第三培养基。培养在填充容积800μl的48圆孔微量滴定板中在33℃以转速1000转/分钟、振摇频率3mm实施。用允许气体通过的无菌膜密封平板。
[0220]
在培养开始和结束时66小时处取得离线样品。在光度计中600nm波长处测量培养物培养基的光密度。为保持在0.1和0.3之间的线性范围内,样品用0.9%(w/v)的氯化钠溶液稀释,该溶液还作为空白使用。od值通过培养之前和之后称量平板对蒸发作修正。
[0221]
图1显示光密度(od)对培养基组成的依赖性。烟酸单独增长是大部分的微生物生物量增长的原因,如od所佐证。
[0222]
实施例2:添加烟酸改善生长呈浓度依赖性
[0223]
培养根据实施例1中提到的方法实施。烟酸浓度升高至初始浓度的3倍、6倍和12倍(参见实施例1的表)。
[0224]
图2显示最终od的形成依赖于烟酸浓度。随着烟酸浓度升高,实现最大细菌生长。
[0225]
实施例3:添加烟酸改善杀镰孢菌素产量
[0226]
为测量实施例2发酵样品的杀镰孢菌素,将50μl培养物培养液与950μl乙腈-水(1:1)混合物混合在一起供提取。将样品在20℃于超声波浴中处理30分钟。随后将样品按14000转/分钟离心5分钟并将上清液过滤入hplc小瓶供测量。通过hplc-uv-vis如下测定杀镰孢菌素浓度。
[0227][0228]
时间[分钟]a[%]b[%]流量[ml/分钟]0.0770.0330.01.009.0660.0440.01.0012.00.00100.01.0018.070.003100.01.00
[0229]
图3显示实施例2里所获得的发酵液中总杀镰孢菌素a、b和d的浓度。较高的烟酸初始浓度升高杀镰孢菌素浓度。在大约10mg/l烟酸时,杀镰孢菌素浓度的升高开始趋稳。
[0230]
实施例4:添加生物素改善生长
[0231]
培养根据实施例1中提到的方法实施。烟酸浓度升高至初始浓度的3倍,并且用含和不含生物素的培养基实施实验(参见实施例1的表)。
[0232]
图4显示最终od依赖于生物素浓度。在缺少生物素的情况下,抵达最大细菌生长速度的时间明显延迟并且最终生物量浓度降低。
[0233]
实施例5:酵母提取物可以在无损杀镰孢菌素含量的情况下减少
[0234]
培养基
[0235]
预培养培养基:px-105
[0236]
表中列出px-105的组成。母液的组分溶解于蒸馏水中并且经无菌过滤或121℃,1巴超压高压灭菌60分钟。无菌溶液储存在室温或4℃。将消泡剂在马上启动高压灭菌过程之前添加至主溶液。在混合母液后,用25%(w/w)氨溶液或40%(w/w)磷酸设定培养基的ph至6.5。
[0237]
表:复合培养基px-105的组成连同母液储存规范(室温(rt)或4℃)和灭菌方法(无菌过滤/高压灭菌,s/a)。
[0238][0239]
主培养培养基:px-135
[0240]
表:复合培养基px-135的组成连同母液储存规范(室温(rt)或4℃)和灭菌方法(无菌过滤/高压灭菌,s/a)。将100mm mes缓冲液添加至培养基。
[0241][0242]
培养条件
[0243]
作为预培养物,将30ml px-105培养基用180μl深低温小瓶培养物接种。培养在33℃按振摇频率150转/分钟和25mm振摇直径在透气硅胶塞密封的250ml摇瓶进行24小时。
[0244]
主培养培养基px-135随后用2%(v/v)的预培养物接种并且作为参考使用。在对比培养基中,将50mg/l d/ll-甲硫氨酸添加至px-135培养基。进一步,参考培养基补充1.5g/l、3g/l和5g/l酵母提取物。在另一组烧瓶中,除前述酵母浓度之外,还添加200mg/l dl-甲硫氨酸。全部这些培养均在具有30ml填充容积和透气硅胶塞的250ml摇瓶实验中在33℃按振摇频率150转/分钟和25mm振摇直径实施48小时。
[0245]
在培养开始和结束时取得离线样品。在光度计中600nm波长处测量培养物培养基的光密度。为保持在0.1和0.3之间的线性范围内,样品用0.9%(w/v)的氯化钠溶液稀释,该溶液还作为空白使用。
[0246]
为测量杀镰孢菌素,将50μl培养物培养液与950μl乙腈-水(1:1)混合物混合在一起供提取。将样品在20℃于超声波浴中处理30分钟。随后将样品按14000转/分钟离心5分钟并将上清液过滤入hplc小瓶供测量。如下测定杀镰孢菌素浓度。
[0247]
通过hplc-uv-vis如下实施杀镰孢菌素分析:
[0248][0249]
时间[分钟]a[%]b[%]流量[ml/分钟]0.080.020.01.0020.050.050.01.0030.00.00100.01.0040.00.00100.01.00
[0250]
图5显示48小时发酵后发酵液中杀镰孢菌素(杀镰孢菌素a、b和d总和)的浓度。杀镰孢菌素浓度在初始酵母提取物含量最低且dl-甲硫氨酸初始浓度高的培养基中最高。
[0251]
实施例6:酵母提取物可以在无损细菌生长的情况下减少
[0252]
培养基
[0253]
预培养培养基:px-125
[0254]
下表中列出px-125的组成。母液的组分溶解于蒸馏水中并且经无菌过滤或121℃,1巴超压高压灭菌60分钟。无菌溶液储存在室温或4℃。将消泡剂在马上启动高压灭菌过程之前添加至主溶液。在混合母液后,用25%(w/w)氨溶液或40%(w/w)磷酸设定培养基的ph至6.5。
[0255]
表:复合培养基px-125的组成连同母液储存规范(室温(rt)或4℃)和灭菌方法(无菌过滤/高压灭菌,s/a)。
[0256]
[0257][0258]
主培养培养基:px-130
[0259]
表:复合培养基px-130的组成连同母液储存规范(室温(rt)或4℃)和灭菌方法(无菌过滤/高压灭菌,s/a)。
[0260]
[0261][0262]
主培养基:px-152
[0263]
表:复合培养基px-152的组成连同母液储存规范(室温(rt)或4℃)和灭菌方法(无菌过滤/高压灭菌,s/a)。
[0264]
[0265][0266]
主培养培养基:px-162
[0267]
表:复合培养基px-162的组成连同母液储存规范(室温(rt)或4℃)和灭菌方法(无菌过滤/高压灭菌,s/a)。
[0268][0269]
培养条件
[0270]
作为预培养物,将110ml px-125培养基用0.3%深低温小瓶培养物接种。将深低温小瓶在60℃热处理30分钟。培养在33℃按振摇频率150转/分钟和25mm振摇直径在透气硅胶塞密封的1l摇瓶进行24小时。
[0271]
主培养物随后按2%(v/v)的总体积接种。作为参考,使用含10g/l酵母的px-130。在px-152中,降低酵母浓度至1.5g/l,同时添加400mg/l甲硫氨酸。通过添加400mg/l甲硫氨酸和增加烟酸至0.015g/l,可以在培养基px-162中完全省略酵母提取物。全部这些培养均在具有12l培养物培养基的反应器中于33℃实施60小时。ph设定至6.5并且用氢氧化铵或磷
酸调节。通过调节搅拌器速度(500-1200转/分钟)和通气(5-30l/分钟),将溶解氧设定至》20%。
[0272]
在培养开始和结束时取得离线样品。在光度计中600nm波长处测量培养物培养基的光密度。为保持在0.1和0.3之间的线性范围内,样品用0.9%(w/v)的氯化钠溶液稀释,该溶液还作为空白使用。
[0273]
图6显示光密度的形成依赖于培养基组成。如通过od增加所示的细菌生长速度在相比完全酵母提取物培养基,包含降低含量的酵母提取物及升高浓度的dl-甲硫氨酸和烟酸的那些培养基中维持。
[0274]
实施例7:酵母提取物可以在无损杀镰孢菌素含量的情况下减少
[0275]
在实施例6的发酵中,杀镰孢菌素浓度如实施例5中所述那样测定。
[0276]
图7显示相对于含有酵母提取物的培养基的最大杀镰孢菌素浓度,杀镰孢菌素(总杀镰孢菌素a、b和d)浓度的形成依赖于培养基组成。杀镰孢菌素浓度在包含降低含量的酵母提取物及升高浓度的dl-甲硫氨酸和烟酸的那些培养基中较高。
[0277]
实施例8:盐改善在发酵期间细菌生长速率
[0278]
培养基
[0279]
预培养培养基:px-176
[0280]
下表中列出px-176的组成。母液的组分溶解于蒸馏水中并且经无菌过滤或121℃,1巴超压高压灭菌60分钟。无菌溶液储存在室温或4℃。将消泡剂在马上启动高压灭菌过程之前添加至主溶液。在混合母液后,用25%(w/w)氨溶液或40%(w/w)磷酸设定培养基的ph至6.5。
[0281]
表:复合培养基px-176的组成连同母液储存规范(室温(rt)或4℃)和灭菌方法(无菌过滤/高压灭菌,s/a)。
[0282]
[0283][0284]
主培养培养基:px-172
[0285]
表:复合培养基px-172的组成连同母液储存规范(室温(rt)或4℃)和灭菌方法(无菌过滤/高压灭菌,s/a)。
[0286]
[0287][0288]
培养条件
[0289]
作为预培养物,将80ml px-176培养基用0.2%深低温小瓶培养物接种。将深低温小瓶培养物在80℃热处理20分钟。培养在33℃按振摇频率280转/分钟和25mm振摇直径在透气硅胶塞密封的1l摇瓶进行24小时。
[0290]
主培养物随后用2%(v/v)的预培养物接种。作为参考,使用含微量元素溶液的px-172。在一个平行反应器中,px-172培养基在不添加微量元素溶液的情况下使用。全部这些培养均在具有1.1l培养物培养基的反应器中于33℃实施72小时。ph设定至6.5并且用氢氧化铵或磷酸调节。通过调节搅拌器速度(400-1400转/分钟)和通气(18-180l/小时),将溶解氧(po2)设定至》30%。
[0291]
在培养开始和结束时取得离线样品。在光度计中600nm波长处测量培养物培养基的光密度。为保持在0.1和0.3之间的线性范围内,样品用0.9%(w/v)的氯化钠溶液稀释,该溶液还作为空白使用。
[0292]
图8显示od的形成依赖于盐存在。在盐存在下,如依照光密度所示的最大细菌生长延长。
[0293]
实施例9:盐改善杀镰孢菌素产量
[0294]
在实施例8的发酵中,杀镰孢菌素浓度如实施例3中所述那样测量。
[0295]
图9显示杀镰孢菌素(总杀镰孢菌素a、b和d)浓度的形成依赖于盐存在。与不添加盐的相应培养基相比,在盐存在时杀镰孢菌素浓度升高更快并且抵达更高最大值。
[0296]
实施例10:与现有培养基比较-发酵期间需氧量
[0297]
培养基
[0298]
预培养培养基:px-48
[0299]
表中列出px-48的组成。母液的组分溶解于蒸馏水中并且经无菌过滤或121℃,1巴超压高压灭菌60分钟。无菌溶液储存在室温或4℃。将消泡剂在马上启动高压灭菌过程之前添加至主溶液。在混合母液后,用25%(w/w)氨溶液或40%(w/w)磷酸设定培养基的ph至6.5。
[0300]
表:复合培养基px-48的组成连同母液储存规范(室温(rt)或4℃)和灭菌方法(无菌过滤/高压灭菌,s/a)。
[0301][0302][0303]
主培养基:px-152
[0304]
表:复合培养基px-152的组成连同母液储存规范(室温(rt)或4℃)和灭菌方法(无菌过滤/高压灭菌,s/a)。
[0305][0306]
表:改良m9培养基的组成。将全部组分(葡萄糖除外)混合在一起并且高压灭菌及储存在室温。用磷酸或氨溶液设定ph至6.5。
[0307][0308][0309]
表:复合培养基胰蛋白胨培养液培养基的组成。将全部组分(硫酸亚铁除外)混合在一起,高压灭菌及储存在室温。用磷酸或氨溶液设定ph至6.5。
[0310]
组分培养基中浓度[g/l]
胰蛋白胨10nacl5蔗糖40mgso4 x 7h2o0.325znso40.0288fecl3 x 6h2o0.0136
[0311]
表:gsc培养基的组成。将全部组分(硫酸亚铁和葡萄糖溶液除外)混合在一起,高压灭菌及储存在室温。用磷酸或氨溶液设定ph至6.5。
[0312]
组分培养基中浓度[g/l]葡萄糖20淀粉20(nh4)2so420酵母提取物10k2hpo42.6feso4
·
7h2o0.1mgso4
·
7h2o0.5nacl0.25caco39
[0313]
培养条件
[0314]
作为预培养物,将85ml px-48培养基用衍生自isp2培养平板的培育48小时的多粘类芽孢杆菌m1接种:
[0315]
表:isp2琼脂培养基的组成。将全部组分混合在一起,高压灭菌及储存在室温。
[0316][0317][0318]
px-48中液体培养在33℃按振摇频率280转/分钟和25mm振摇直径在透气硅胶塞密封的1l摇瓶进行24小时。
[0319]
主培养物随后用2%(v/v)的预培养物接种。借助文献中提到的其他用于类芽孢杆菌培养的常见培养基(改良m9培养基,ryu等人,2019;胰蛋白胨培养基,raza等人,2010;gsc培养基,nyu等人,2013),评价px-152培养基的性能。全部这些培养均在具有1l培养物培养基的反应器中于33℃实施72小时。ph设定至6.5并且用氢氧化铵或磷酸调节。通过调节搅拌器速度(400-1400转/分钟)和通气(18-180sl/小时),将溶解氧设定至》30%。
[0320]
在培养开始和结束时取得离线样品。在光度计中600nm波长处测量培养物培养基的光密度。为保持在0.1和0.3之间的线性范围内,样品用0.9%(w/v)的氯化钠溶液稀释,该溶液还作为空白使用。
[0321]
为测量杀镰孢菌素,将50μl培养物培养液与950μl乙腈-水(1:1)混合物混合在一起供提取。将样品在20℃于超声波浴中处理30分钟。随后将样品按14000转/分钟离心5分钟并将上清液过滤入hplc小瓶供测量。如实施例55中所述测量杀镰孢菌素浓度。
[0322]
图10显示氧转移率(otr)的形成依赖于培养基组成。对糖源浓度归一化时,与现有培养基相比,本发明培养基的如依照otr所示的最大细菌代谢活性最高。
[0323]
实施例11:与现有培养基比较
‑–
杀镰孢菌素产量
[0324]
在实施例10的发酵中,杀镰孢菌素浓度如实施例5中所述那样测量。
[0325]
图11显示杀镰孢菌素浓度(杀镰孢菌素a、b和d总和)的形成依赖于培养基组成。对糖源浓度归一化时,与现有培养基相比,杀镰孢菌素浓度最高。
[0326]
实施例12:植物健康促进组合物对抗镰刀菌的功效
[0327]
表:复合培养基px的组成连同母液储存规范(室温(rt)或4℃)和灭菌方法(无菌过滤/高压灭菌,s/a)。
[0328][0329][0330]
表:复合培养基px-143mod的组成连同母液储存规范(室温(rt)或4℃)和灭菌方法(无菌过滤/高压灭菌,s/a)。将100mm mes缓冲液添加至培养基。
[0331][0332][0333]
表:复合培养基px-162的组成连同母液储存规范(室温(rt)或4℃)和灭菌方法(无菌过滤/高压灭菌,s/a)。将100mm mes缓冲液添加至培养基。
[0334][0335]
表:设定成ph 6.5的复合培养基tsb培养基的组成。
[0336]
组分培养基中浓度[g/l]酪蛋白的胰酶消化物15大豆的胰酶消化物(大豆胨)5氯化钠5麦芽糖糖浆(50%)40
[0337]
表:复合培养基pbs培养基的组成。
[0338]
组分培养基中浓度[m]磷酸盐缓冲液0.01氯化钾0.0027氯化钠0.137
[0339]
表:复合培养基mpg培养基的组成。
[0340]
组分培养基中浓度[g/l]葡萄糖14.6真菌蛋白胨7.1酵母提取物1.4
[0341]
培养细菌和用于真菌分析的样品制备
[0342]
具有6ml容积的48深孔平板用0.5ml微生物生长培养基(胰蛋白酶解大豆培养液、px、px-143mod、px-162)填充。使用深低温保存的细菌接种各种培养基(0.6%v/v)。每种条件重复四次。使用相应的未接种培养基作为空白,实施600nm处初始od测量。将细菌在28℃以190转/分钟振摇和80%湿度培养三天。在培养结束时,通过测量od
600
评价细菌生长。将培养液在4500转/分钟离心10分钟以移除生物质。通过用96孔0.2μm滤膜板过滤200μl上清液,实现培养液进一步澄清。通过在4500转/分钟离心板10分钟获得用于真菌分析的滤液。
[0343]
制备真菌孢子
[0344]
筛选分析中所用的真菌孢子来自禾谷镰刀菌和灰葡萄孢。为收获孢子,将5ml pbs缓冲液添加至每块真菌平板并且使用灭菌涂布棒温和刮下生物量。为了移除菌丝体,借助0.4μm滤膜过滤孢子悬液。为了深低温保存,使孢子重悬于含10%甘油和7% l-脯氨酸的pbs缓冲液中。调节孢子浓度至5.3x 106个孢子/ml。将深低温小瓶在-20℃储存24小时并此后储存在-80℃。
[0345]
真菌测定法的设立
[0346]
将深低温保存的真菌接种物在室温解冻30分钟并添加至含有140ml真菌生长培养基(mpg)的无菌烧瓶。先前制备的细菌培养物上清液按每个孔含有15μl填充入96孔微量滴定板。作为对照,将15μl每种细菌培养培养基加入该平板。随后,将135μl真菌接种物添加至每个孔。将平板在室温黑暗下温育三天(禾谷镰刀菌)或七天(灰葡萄孢)。为测定真菌抑制作用,将od
620
在温育结束时测量并且如下计算:
[0347][0348]
图12显示在培养各种植物健康促进性微生物后无细胞培养物滤液对抗禾谷镰刀菌的功效。总体上,对于本发明培养基中培养那些生物后获得的滤液的功效改善。
[0349]
图13显示在培养类芽胞杆菌后无细胞培养物滤液对抗灰葡萄孢的功效。总体上,对于本发明培养基中培养后获得的滤液的功效改善。
[0350]
实施例13:本发明极限培养基的广阔适用性
[0351]
培养基
[0352]
预培养培养基:px-79
[0353]
表中列出px-79的组成。母液的组分溶解于蒸馏水中并且经无菌过滤或121℃,1巴超压高压灭菌60分钟。无菌溶液储存在室温或4℃。将消泡剂在马上启动高压灭菌过程之前添加至主溶液。在混合母液后,用25%(w/w)氨溶液或40%(w/w)磷酸设定培养基的ph至6.5。
[0354]
表:复合培养基px-79的组成连同母液储存规范(室温(rt)或4℃)和灭菌方法(无菌过滤/高压灭菌,“s”/“a”)。
[0355][0356][0357]
主培养培养基:px-143
[0358]
表:复合培养基px-143的组成连同母液储存规范(室温(rt)或4℃)和灭菌方法(无菌过滤/高压灭菌,“s”/“a”)。
[0359][0360][0361]
主培养培养基:极限培养基
[0362]
表:极限培养基的组成。将全部组分(葡萄糖除外)混合在一起并且高压灭菌及储存在室温。用磷酸或氨溶液设定ph至6.5。
[0363][0364]
生成和鉴定野生型菌株lu17007的杀镰孢菌素改善型突变体
[0365]
通过添加诱变剂ntg(n-甲基-n
′‑
硝基-n-亚硝基胍)至解冻的深低温小瓶培养物,随机诱变多粘类芽孢杆菌野生型株lu17007获得这个实验中受测的菌株。将诱变的培养物铺种在lb平板上并且在28℃温育3天以获得单菌落。为鉴定具有改进杀镰孢菌素产量的突变体,挑取单菌落并且随后转移入含预培养培养基px-79的48微孔平板(0.8ml)并且在33℃和220转/分钟按5cm振摇直径温育24小时。2%(v/v)种子培养物用来接种含0.6ml主培养培养基px-143的48微孔平板。培养在33℃和220转/分钟按50mm振摇直径进行32小时。
[0366]
在培养结束时取得离线样品,以测量od600和杀镰孢菌素。全部培养孔的od600均在48孔微量滴定板中使用酶标仪测量。为了测量杀镰孢菌素,通过混合50μl培养液+950μl乙腈进行提取。在16200转/分钟离心10分钟后,将上清液转移至hplc瓶并用短-hplc法定量。
[0367]
短plc法:
[0368]
柱:thermo hypersil gold c18,100x4,6mm;5μm
[0369]
前置柱:相容性thermo c18
[0370]
温度:40℃
[0371]
流速:2.00ml/分钟
[0372]
进样量:1.0μl
[0373]
洗涤/冲洗:水中20% meoh(2500μl/5000μl)
[0374]
进样器注入:2分钟后
[0375]
检测:uv 200nm
[0376]
分离:fusd(2.2分钟)和fusb(3.4分钟)
[0377]
线性度:1μl进样时至多1g/l未稀释的分析物
[0378]
运行时间:10分钟
[0379]
洗脱剂a:含0.1%h3po4的h2o
[0380]
洗脱剂b:乙睛
[0381]
表:hplc梯度程序
[0382]
时间[分钟]%a%b0.0070304.0070304.015956.005956.01703010.07030
[0383]
培养基性能比较
[0384]
培养条件
[0385]
对于产杀镰孢菌素突变体,随机挑取18个菌株并如下发酵:
[0386]
作为预培养物,将30ml px-79培养基用如实施例10中所述那样铺种在isp2培养平板上的各个多粘类芽孢杆菌菌株接种。培养在33℃按振摇频率150转/分钟和25mm振摇直径在硅胶塞密封的250ml带挡板的摇瓶进行24小时。
[0387]
主培养物随后用2%(v/v)的预培养物接种。对比上文的极限培养培养基,评价px-143培养基的性能。主培养物培养在250转/分钟按50mm振摇直径振摇的含30ml培养培养基的250ml摇瓶中33℃实施48小时。
[0388]
在培养结束时(48小时)取得离线样品,以测定600nm处光密度和杀镰孢菌素浓度。为测量杀镰孢菌素,将50μl培养物培养液与950μl乙腈-水(1:1)混合物混合在一起供提取。将样品在20℃于超声波浴中处理30分钟。随后将样品按14000转/分钟离心5分钟并将上清液过滤入hplc小瓶供测量。如实施例13中上文所述测量杀镰孢菌素浓度。
[0389]
图14显示与不同培养基中的野生型祖细胞相比,以上培养后对18种多粘类芽孢杆菌化学ntg突变体所获得的总杀镰孢菌素a、b和d的归一化浓度。与复合培养基px143相比,本发明的以上极限培养基(该图中标记为“mm”)中突变体的杀镰孢菌素产量在18种受测突变体的15者中显著增加。另外,对于7种突变体,与复合培养基中野生型菌株的杀镰孢菌素产量相比,杀镰孢菌素产量在极限培养基中明确地更高。仅4种突变体明确地显示复合培养基中杀镰孢菌素产量改善。总之,该图显示本发明极限培养基的有益效果(尤其杀镰孢菌素产量增加)不限于特定菌株,而是广泛适用。
[0390]
图15显示如图14中所述的相同摇瓶培养的总杀镰孢菌素a、b和d产量。48小时发酵
后通过总杀镰孢菌素a、b和d浓度除以相应培养物的od600近似估算杀镰孢菌素产量。对于全部突变体,与野生型相比,杀镰孢菌素产量在本发明的极限培养基(该图中标记为“mm”)中均增加。在复合培养基中培养时与野生型相比,仅一个突变体显示改善的杀镰孢菌素产量。再次,该图显示本发明极限培养基的益处(这里,产量改善)广泛适用,而不限于特定类芽孢杆菌菌株。

 

技术特征:
1.用于产生植物健康促进性微生物,优选地抗真菌性微生物的发酵培养基,包含-烟酸和生物素,其中发酵培养基中烟酸的浓度是至少0.1mg/l、优选地至少2mg/l、更优选地至少5mg/l和更优选地5-100mg/l,和其中发酵培养基中生物素的浓度是至少0.01mg/l、优选地至少0.05mg/l、更优选地0.05-1000mg/l、更优选地至少0.12mg/l、更优选地0.12-1000mg/l,和-甲硫氨酸,其中发酵培养基中甲硫氨酸的浓度是至少0.01g/l、优选地至少0.1g/l、更优选地至少0.2g/l、更优选地0.2-3g/l。2.根据权利要求1所述的发酵培养基,还包含选自以下一者或多者的缓释氨基酸源:-一种或多种选自以下的蛋白质源:玉米浸液、乳蛋白、脱脂乳蛋白、乳清蛋白、酪蛋白、豌豆蛋白、棉籽蛋白、小麦面筋蛋白、猪肉蛋白、牛肉蛋白、明胶、卵蛋白、鱼肉蛋白、微生物蛋白、大豆蛋白和大豆粕,-一种或多种选自以下者的蛋白质水解物源:一种或多种前述蛋白质源的水解物、胰蛋白(来自蛋白质混合物-胰蛋白酶消化物的蛋白胨)、蛋白-蛋白胨、来自酪蛋白的蛋白胨)、来自明胶的蛋白胨、乳清蛋白水解物、肝脏水解物、来自肉的蛋白胨、来自猪心的蛋白胨、来自植物蛋白的蛋白胨、来自蚕豆的蛋白胨、来自玉米的谷蛋白水解物、来自豌豆的蛋白胨、来自马铃薯的蛋白胨、来自大豆的蛋白胨、来自大豆粕的蛋白胨、来自小麦的蛋白胨、来自真菌蛋白的蛋白胨和马铃薯浸出粉,以及-一种或多种选自以下者的非鼓励源:脑提取物,尤其来自猪脑的脑提取物;心脑浸液;心脏提取物,尤其来自牛心脏的心脏提取物;心脏浸出粉,尤其来自牛心脏的心脏浸出粉;肉类提取物;酵母自溶产物和酵母提取物,其中发酵培养基中前述缓释氨基酸源的总浓度是0-100g/l、优选地0.1-100g/l。3.根据权利要求2所述的发酵培养基,其中发酵培养基中酵母提取物和酵母自溶产物的总浓度是0-8g/l、优选地0-3g/l,并且其中特别优选发酵培养基中非鼓励源的总浓度是0-8g/l、优选地0-3g/l。4.根据前述权利要求任一项所述的发酵培养基、还包含选自以下的糖源:葡萄糖、右旋糖、淀粉、果糖、半乳糖、木糖、木糖醇、菊糖、山梨醇、岩藻糖、糖蜜、蔗糖、乳糖、甘油、果胶、半乳糖醛酸、麦芽糖、麦芽糊精、麦芽三糖和高级低聚麦芽糖或麦芽糖糖浆或其混合物,其中前述糖源的总浓度是至少5g/l、优选地至少40g/l、更优选地50-400g/l。5.根据前述权利要求任一项所述的发酵培养基,还包含-mnso4*h2o:1-1000mg/l、优选地8-100mg/l-scuso4*5h2o:0.1-100mg/l、优选地2-8mg/l-na2moo4*2h2o:0.1-10mg/l、优选地1-5mg/l-fe2(so4)3*h2o:0.8-1000mg/l、优选地5-50mg/l-柠檬酸:0.1-100g/l、优选地0.5-20g/l-ca(no3)2*4h2o:0-3g/l、优选地0-1g/l。6.根据前述权利要求任一项所述的发酵培养基,还包含-一种或多种或优选地全部以下氨基酸
组氨酸:至少10mg/l、优选地50-1000mg/l,脯氨酸:至少10mg/l、优选地300-1000mg/l,精氨酸:至少10mg/l、优选地50-1000mg/l,谷氨酸:至少10mg/l、优选地200-5000mg/l,-和任选地一种或多种或优选地全部以下氨基酸半胱氨酸:至少10mg/l、优选地50-1000mg/l、最优选地300-600mg/l色氨酸:至少10mg/l、优选地50-1000mg/l,最优选地200-500mg/l。7.根据前述权利要求任一项所述的发酵培养基,其中-发酵培养基中非鼓励性缓释氨基酸源的浓度是0-3g/l,并且发酵培养基中酵母提取物与酵母自溶产物的浓度是0-3g/l,-发酵培养基中总糖源的浓度是10-100g/l并且糖源优选地包括麦芽糖、麦芽糊精、麦芽三糖和高级低聚麦芽糖或麦芽糖糖浆或由其组成,并且-总缓释氨基酸蛋白质或蛋白质水解物源的浓度是5-100g/l,并且缓释氨基酸源优选地包含大豆粕或其水解物或由其组成。8.一种发酵方法,包括培养微生物培养物的步骤,所述微生物培养物包含一种或多种植物健康促进性微生物或由其组成,其中将根据权利要求1至7中任一项所述发酵培养基的内容物在至多72小时的时间范围内提供给培养物。9.根据权利要求8所述的发酵方法,其中微生物培养物包含一种或多种生物控制性微生物或由其组成,所述生物控制性微生物选自以下分类阶层:-厚壁菌门(firmicutes)、更优选地芽孢杆菌纲(bacilli)、更优选地芽孢杆菌目(bacillales)、更优选地以下任一者:芽孢杆菌科(bacillaceae)、更优选地芽孢杆菌属(bacillus);类芽孢杆菌科(paenibacillaceae)、更优选地类芽孢杆菌属(paenibacillus);-变形菌门(proteobacteria)、更优选地γ-变形菌纲(gammaproteobacteria)、更优选地假单胞菌目(pseudomonadales)、更优选地假单胞菌科(pseudomonadaceae)、更优选地假单胞菌属(pseudomonas);-变形菌门、更优选地β-变形菌纲(betaproteobacteria)、更优选地伯克氏菌目(burkholderiales)、更优选地伯克霍尔德菌科(burkholderiaceae)、更优选地以下任一者:伯克霍尔德菌属(burkholderia);副克霍尔德菌属(paraburkholderia);-变形菌门、更优选地α-变形菌纲(alphaproteobacteria)、更优选地根瘤菌目(rhizobiales)、更优选地以下任一者:根瘤菌科(rhizobiaceae)、更优选地根瘤菌属(rhizobium);慢生根瘤菌科(bradyrhizobiaceae)、更优选地慢生根瘤菌属(bradyrhizobium);根瘤菌科、更优选地中华根瘤菌(sinorhizobium);-变形菌门、更优选地α-变形菌纲(alphaproteobacteria)、更优选地鞘脂单胞菌目
(sphingomonadales)、更优选地鞘氨醇单胞菌科(sphingomonadaceae)、更优选地鞘氨醇单胞菌属(sphingomonas);-放线菌门(actinobacteria)、更优选地放线菌纲(actinobacteria class)、更优选地链霉菌目(streptomycetales)、更优选地链霉菌科(streptomycetaceae)、更优选地链霉菌属(streptomyces);-拟杆菌门(bacteroidetes)、更优选地黄杆菌纲(flavobacteriia)、更优选地黄杆菌目(flavobacteriales)、更优选地黄杆菌科(flavobacteriaceae)、更优选地金黄杆菌属(chryseobacterium);-放线菌门、更优选地放线菌纲、更优选地棒状杆菌目(corynebacteriales)、更优选地诺卡氏菌科(nocardiaceae)、更优选地红球菌属(rhodococcus);并且其中微生物培养物是-由不同微生物物种和/或微生物物种的不同株组成的混合培养物,或-由一个微生物物种、优选地微生物物种的一个株组成的纯培养物,并且其中优选的生物控制性微生物是分类属-类芽孢杆菌属(paenibacillus)的部分、更优选地以下任一者:韩国类芽孢杆菌(paenibacillus koreensis)、根际类芽孢杆菌(paenibacillus rhizosphaerae)、多粘类芽孢杆菌(paenibacillus polymyxa)、解淀粉芽孢杆菌(paenibacillus amylolyticus)、土地类芽孢杆菌(paenibacillus terrae)、多粘类芽孢杆菌多粘亚种(paenibacillus polymyxa polymyxa)、多粘类芽孢杆菌植物亚种(paenibacillus polymyxa plantarum)、类芽孢杆菌附生新物种(paenibacillus nov.spec epiphyticus)、土地类芽孢杆菌(paenibacillus terrae)、浸麻类芽孢杆菌(paenibacillus macerans)、蜂房类芽孢杆菌(paenibacillus alvei)、更优选地多粘类芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌多粘亚种、多粘类芽孢杆菌植物亚种、类芽孢杆菌附生新物种、土地类芽孢杆菌、浸麻类芽孢杆菌、蜂房类芽孢杆菌、甚至更优选地多粘类芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌多粘亚种、多粘类芽孢杆菌植物亚种和土地类芽孢杆菌。10.根据权利要求8至9中任一项所述的发酵方法,其中a)在培养期间,微生物培养物的至少一种微生物产生孢子并且收获孢子,和/或b)其中收获无细胞悬液。11.植物健康促进组合物,通过权利要求10所述的方法可获得或获得,任选地还包含稳定剂、杀镰孢菌素和/或a)一种或多种具有杀真菌活性、杀菌活性、杀病毒活性和/或植物防御激活物活性的微生物农药,b)一种或多种具有杀真菌活性、杀菌活性、杀病毒活性和/或植物防御激活物活性的生物化学农药,c)一种或多种具有杀昆虫活性、杀螨活性、杀螺活性和/或杀线虫活性的微生物农药,d)一种或多种具有杀昆虫活性、杀螨活性、杀螺活性、信息素活性和/或杀线虫活性的生物化学农药,e)一种或多种选自以下的杀真菌剂:呼吸抑制剂、固醇生物合成抑制剂、核酸合成抑制剂、细胞分裂和细胞骨架形成或功能的抑制剂、氨基酸与蛋白质合成抑制剂、信号转导抑制剂、脂质和膜合成抑制剂、多位点起效的抑制剂、细胞壁合成抑制剂、植物防御诱导物和作
用模式未知的杀真菌剂。12.植物材料、优选地植物繁殖材料,在其表面上包含根据权利要求11所述的组合物。13.根据权利要求11所述的组合物的用途,用于防止、限制或减少植物病原性真菌疾病和/或改善植物健康和/或增加植物产量。14.根据权利要求13所述的用途,其中真菌疾病是i)真菌疾病选自:白疱病、霜霉病、白粉病、根肿病、核盘菌腐病、镰刀霉枯萎病和腐病、葡萄灰腐病、炭疽病、丝核菌腐病、立枯病、空腔斑病、块茎病、锈病、黑根腐病、靶斑病、丝囊霉根腐病、壳二胞囊领腐病、蔓枯病、格孢叶斑病、黑胫病、环斑病、晚疫病、褐斑病、叶枯病、壳针孢斑病、叶枯病或其组合,和/或ii)真菌疾病由选自以下分类阶层的微生物造成或加重:-粪壳菌纲(sordariomycetes)、更优选地肉座菌目(hypocreales)、更优选地丛赤壳科(nectriaceae)、更优选地镰刀菌属(fusarium);-粪壳菌纲(sordariomycetes)、更优选地小丛壳目(glomerellales)、更优选地小丛壳科(glomerellaceae)、更优选地刺盘孢属(colletotrichum);-锤舌菌纲(leotinomycetes)、更优选地柔膜菌目(helotiales)、更优选地核盘菌科(sclerotiniaceae)、更优选地葡萄孢属(botrytis);-座囊菌纲(dothideomycetes)、更优选地格孢腔菌目(pleosporales)、更优选地格孢腔菌科(pleosporaceae)、更优选地链格孢属(alternaria);-座囊菌纲、更优选地格孢腔菌目、更优选地暗球腔菌科(phaeosphaeriaceae)、更优选地暗球腔菌属(phaeosphaeria);-座囊菌纲、更优选地葡萄球菌目(botryosphaeriales)、更优选地葡萄球菌科(botryosphaeriaceae)、更优选地亚大茎点霉属(macrophomina);-座囊菌纲、更优选地煤炱目(capnodiales)、更优选地球腔菌科(mycosphaerellaceae)、更优选地发酵壳针孢属(zymoseptoria);-伞菌纲(agraricomycetes)、更优选地鸡油菌目(cantharellales)、更优选地角担菌科(ceratobasidiaceae)、更优选地丝核菌属(rhizoctonia)或亡革菌属(thanatephorus);-柄锈菌纲(pucciniomycetes)、更优选地柄锈菌目(pucciniales)、更优选地柄锈菌科(pucciniaceae)、更优选地单胞锈菌属(uromyces)或柄锈菌属(puccinia);-黑粉菌纲(ustilaginomycetes)、更优选地黑粉菌目(ustilaginales)、更优选地黑粉菌科(ustilaginaceae)、更优选地黑粉菌属(ustilago);-卵菌纲(oomycota)、更优选地腐霉目(pythiales)、更优选地腐霉科(pythiaceae)、更优选地腐霉属(pythium);-卵菌纲、更优选地霜霉目(peronosporales)、更优选地霜霉科(peronosporaceae)、更优选地疫霉属(phytophthora)、单轴霉属(plasmopara)或假霜霉属(pseudoperonospora)。15.用于防止、限制或减少植物病原性真菌疾病和/或增加植物健康的方法,包括向植物、其部分或繁殖材料或向植物将在其中生长的土壤施加有效量的根据权利要求11所述的组合物。

技术总结
本发明涉及改善植物健康和/或增加植物产量的领域。具体地说,本发明涉及防止、限制或减少植物病原性真菌疾病。考虑到这些目标,本发明提供使用这类材料实现或促进前述任一目标的材料和方法。本发明也提供用于产生这类植物健康组合物的材料和方法。健康组合物的材料和方法。

技术研发人员:T
受保护的技术使用者:巴斯夫欧洲公司
技术研发日:2021.07.30
技术公布日:2023/6/28

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所属分类:花卉
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