牛C反应蛋白(CRP)酶联免疫试剂盒DM

牛C反应蛋白(CRP)酶联免疫试剂盒

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

产品货号：DM-Cat4588

产品规格：【48T/96T】

检测原理：

酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，简称ELISA）是一种基于抗原-抗体反应的生物化学分析技术，广泛应用于检测蛋白质、抗体、激素、药物等生物分子。其检测原理主要基于以下几个关键步骤：

1. 抗原-抗体特异性结合ELISA的核心是利用抗原与抗体之间的特异性结合。抗原和抗体之间通过互补的结构相互识别并结合，这种结合具有高度的特异性和亲和力。例如，如果要检测某种特定的蛋白质（抗原），就需要使用针对该抗原的特异性抗体。

2. 固相化技术ELISA实验中，抗原或抗体通常被固定在固相载体上（如塑料微孔板）。这种固相化过程使得抗原或抗体能够稳定地吸附在微孔板表面，便于后续的反应和检测。固相化的抗原或抗体被称为“捕获相”，而加入的样本中的抗原或抗体则被称为“检测相”。

3. 酶标记技术为了实现检测信号的放大和可视化，ELISA中通常使用酶标记的抗体或抗原。常用的酶包括辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）。酶标记的抗体或抗原与固相化的抗原或抗体结合后，酶会与底物反应，产生可检测的信号（如颜色变化或荧光信号）。

4. 底物反应与信号检测酶与底物反应后，会产生颜色变化或荧光信号。这种信号的强度与样本中目标分子的浓度成正比。例如，辣根过氧化物酶（HRP）可以催化过氧化氢分解，使无色的底物（如TMB）变为蓝色，加入酸终止反应后变为黄色，通过分光光度计测量吸光度即可定量分析目标分子的浓度。

5. 检测模式ELISA主要有以下几种检测模式：

直接ELISA：抗原固定在固相载体上，加入酶标记的抗体与抗原结合，通过底物反应检测信号。

间接ELISA：抗原固定在固相载体上，先加入未标记的特异性抗体，再加入酶标记的二抗（针对一抗的抗体），通过底物反应检测信号。

夹心ELISA：固相载体上固定捕获抗体，加入样本中的抗原，再加入酶标记的检测抗体，通过底物反应检测信号。夹心ELISA是检测蛋白质等大分子常用的方法。竞争ELISA：样本中的抗原与固相载体上的抗原竞争结合酶标记的抗体，通过检测酶标记抗体的结合量来推断样本中抗原的浓度。

6. 定量分析ELISA的检测结果可以通过标准曲线进行定量分析。标准曲线是通过一系列已知浓度的标准品进行检测，绘制吸光度（或荧光强度）与浓度的关系曲线。根据样本的吸光度或荧光强度，通过标准曲线可以计算出样本中目标分子的浓度。

样品收集、处理及保存方法

1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

操作注意事项

1. 试剂盒保存在2-8℃，使用室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶溶解后再使用。

2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，终结果乘以5才是样本实际浓度。

4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5. 所有液体组分使用充分摇匀

试剂盒组成

名称

96孔配置

48孔配置

备注

微孔酶标板

12孔×8条

12孔×4条

无

标准品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

无

样本稀释液

6mL

3mL

无

检测抗体-HRP

10mL

5mL

无

20×洗涤缓冲液

25mL

15mL

按说明书进行稀释

底物A

6mL

3mL

无

底物B

6mL

3mL

无

终止液

6mL

3mL

无

封板膜

2张

2张

无

说明书

1份

1份

无

自封袋

1个

1个

无

试剂的准备

20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

洗板方法

1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。

2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步骤

试剂盒性能

1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。

2. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

3. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

4. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

5. 有效期：6个月

免责声明

1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。

2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

上海笃玛生物科技有限公司

关键词：稳定性好  灵敏度高  特异性强  

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