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5种野生百合与2个杂种系百合品种远缘杂交的鉴定.docx

来源：花匠小妙招时间：2025-07-01 02:49

5种野生百合与2个杂种系百合品种远缘杂交的鉴定随着国际花卉贸易的不断扩大，百合类植物的产量也显著提高，促进了新品种的创造和普及。种内与种间杂交是百合育种最重要的途径,可人为将有利的遗传性状自由组合,在田间得到表现后即可获得新品种。但百合杂交具有明显的不亲和性,主要表现为受精前与受精后障碍,常使杂种胚早期败育,致使在田间很难得到杂种种子并加以繁殖,即使获得杂交种子也可能是由于假杂交所致。鉴于育种中杂种胚和胚乳的不亲和导致的杂种胚败育,可采用胚挽救技术来解决,但在培养过程中,外植体所携带母体组织也可能诱导成苗。因此,克服杂交障碍获得杂交种并对其真实性进行鉴定对于百合育种工作具有非常重要的意义。对于克服百合杂交障碍的研究,目前主要集中在柱头涂抹激素、KCl处理柱头使其变性、柱头嫁接、花粉蒙导和切割花柱授粉等,其中以切割花柱授粉方法简单、易操作、无严格技术要求,并且对克服百合杂交障碍具有一定效果。基于PCR基础上的RAPD标记分析技术可在DNA水平上鉴定体细胞杂种,其速度快,稳定性好,准确性高。李富生等用染色体和RAPD技术在幼苗期鉴定了甘蔗杂交种;马鸿翔等用GISH和RAPD检测黄毛草莓×凤梨草莓种间杂种;Abe等在研究亚洲百合杂种系花色素苷形成的基因分析中,利用17个10bp、37个15bp、14个20bp的随机引物和33个ISSR引物,绘制出遗传图谱,这些引物在百合染色体上得到锚定,有确切位点,可以作为百合RAPD分析的基础;Persson等和Wen等用RAPD标记分析了星叶百合和麝香百合居群内和居群间的遗传变异,研究表明,RAPD分子标记在杂种鉴定领域已得到成熟的发展与应用。花色、香气和抗性品种的获得一直是百合育种的热点,本试验以不同花色、香气与抗性的百合为亲本,采用切割花柱授粉进行远缘杂交,结合形态学与RAPD分子标记对杂交种真实性进行综合鉴定,旨在获得花色丰富、花香淡雅,同时具有一定抗性的百合新种质,为百合资源创新提供基础。 1 材料和方法 1.1 百合属ty、条叶百合ty、细叶百合sq、雪无砂表面活性剂以5种野生百合与2个杂种系百合品种为试验材料。分别为原生种麝香百合(Lilium longiflorum)(Ty)、条叶百合(Lilium callosum)(T)、王百合(Lilium regale)(W)、细叶百合(Lilium pumilum)(Xh-黑龙江种源与Xc-承德种源)、雪皇后(Lilium longiflorum,‘Snow Queen’)(‘SQ’)、西伯利亚(‘S’)。 1.2 测试方法 1.2.1 细叶百合经验设计麝香百合×条叶百合、条叶百合×王百合、条叶百合×雪皇后、细叶百合(黑龙江种源)×雪皇后、细叶百合(黑龙江种源)×西伯利亚与细叶百合(承德种源)×西伯利亚6个杂交组合进行杂交,开花前3d对母本进行去雄、套袋,开花当天9:00-10:00时采用切割柱头授粉,授粉后继续套袋。授粉后20d左右,部分雌蕊用来作为子房培养,部分留在植株上直到其完全成熟或干枯,作为田间对照试验。 1.2.2 种子的制备授粉后20d左右切取膨大子房,首先用70%乙醇消毒1min,0.1%HgCl2灭菌8min,无菌水冲洗5次。将子房切成0.3cm厚度圆形切片,再沿直径方向切为半圆形,接入子房培养基(MS+0.01mg/L NAA)中培养,蔗糖浓度为3.0%(W/V),用0.65%(W/V)琼脂粉固化。接种子房在温度25℃,光照16h/d,光照强度2000lx条件下培养。20~30d后,将其含有发育膨大胚珠的切片剖开,剥离出膨大胚珠,在MS培养基上进行培养。田间获得种子经消毒后于MS培养基上进行培养。最终在快繁培养基(MS+0.5mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA)进行快繁培养,当幼苗长至约5cm时转入生根培养基(1/2MS+0.25mg/L NAA)中培养。 1.2.3 计算方法坐果率(%)=坐果数/授粉花朵数×100%;有胚种子率(%)=有胚种子数/胚珠数×100%;成苗率(%)=成苗数/接种数×100%。 1.2.4 百合组培苗形态特征对获得的百合杂种及部分亲本幼苗在同等温度与光照条件下进行组培快繁,部分亲本采用种子快繁。将快繁后的大量幼苗转入生根培养基,25d后对百合组培苗进行形态学指标观察与统计并照相,分析杂交种及亲本株高、叶形、根数、根长、生根率等形态学指标参数,每形态指标观察统计200棵幼苗。分别观察50个视野统计叶片气孔密度。 1.2.5 rapd扩增和pcr扩增供试材料总DNA提取采用改良CTAB法。用0.8%琼脂糖凝胶电泳检测样品DNA的有无和分子量的大小。用紫外/可见分光光度计检测DNA浓度和纯度:取5μl样品,加1995μl重蒸馏水,分别测定260nm和280nm处的吸光