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一种观察花粉管萌发和生长的动态发育过程的方法

来源：花匠小妙招时间：2025-06-24 13:40

专利名称：一种观察花粉管萌发和生长的动态发育过程的方法
技术领域：
本发明涉及一种观察花粉管萌发和生长的动态发育过程的方法，属于生物技术领域。
背景技术：
花粉是高等植物的雄配子体。它在有性繁殖中传递着雄性亲本的遗传信息。花粉既是植物遗传、育种、进化、生殖等研究的重要对象，又是孢粉分析、蜂群培育、药物制造、医疗及生理试验等的重要材料。花粉萌发与花粉管生长是植物完成有性生殖的重要过程，因此观察花粉萌发和花粉管生长的发育过程就显得非常的重要。迄今为止，植物花粉管萌发及花粉管生长过程的观察，主要依靠固定标本染色技术获得，例如，醋酸洋红法，碘-碘化钾法，醋酸洋红-固绿法等。但是以上方法均不能直接显示花粉管萌发及花粉管生长的动态发育过程，只能根据实验需要在不同阶段分别染色固定进行观察。因此，直接进行花粉管萌发及花粉管生长的动态发育过程观察，无疑地可以从另一角度提供新的资料，有助于认识和控制受精过程中这一重要阶段。然而，不染色直接观察，花粉颜色较浅，尤其是花粉管呈透明状，非常不便于观察。

发明内容
针对上述现有技术的不足，本发明提供了一种快速、简便的观察花粉管萌发和生长的动态发育过程的方法为实现上述目的，本发明采用的技术方案是一种观察花粉管萌发和生长的动态发育过程的方法，具体步骤如下1)、花粉的采集采集当天开放的花粉。2)、花粉培养基的制备蔗糖5% -20%，琼脂0.3% -0. 6%，硼酸0.04%，其余加入水，配成溶液PH值= 5. 4-6. 4。3)、中性红染色液的配制用30%的酒精配制浓度范围为0. 01% -0. 15%的中性红染色液。4)、花粉培养室的制备选用培养皿作为花粉培养室，培养皿底盛2ml水，培养皿盖涂薄层培养基。5)、薄层培养基的制备培养基趁热取出，用移液枪吸取培养液，在培养皿盖内侧滴加Iml的培养基溶液，然后立刻用玻璃接种环将培养基溶液展开成薄层的培养基。6)、花粉的撒布将带有培养基的培养皿水平放置于实验台上，用镊子摘除花絮的花瓣，夹住花药下方花丝，取出花药，将花药轻轻在培养基表面上滑动，或将夹有花药的镊子轻轻的在培养皿边缘敲几下使花粉单层、均勻地散落分布在培养基表面上。7)、中性红染色液染色用移液枪在培养基上有花粉处滴加0. 5ml中性红染色液，将花粉染色30秒。将培养皿竖起，用吸水纸在培养基边缘将染液充分吸干。8)、花粉培养
将培养物置于恒温箱内，温度控制在22°C -2520分钟后开始观察花粉管萌发和花粉管生长的动态发育过程。9)、染色后鉴定指标a、花粉的萌发率b、花粉的群体效应C、花粉萌发和花粉管生长过程的观察效果所述的中性红浓度最好在0. 01% -0. 10%。本发明建立了快速、简便、稳定的中性红染色方法，可以非常清晰地观察到花粉管萌发和花粉管生长的动态发育过程，不影响花粉萌发率和花粉管的生长、花粉的群体效应的观察，观察效果极佳。
具体实施例方式实施例11)、花粉的采集采集当天开放的大花君子兰花粉。2)、花粉培养基的制备蔗糖5 %，琼脂0.5%，硼酸0. 04 %，其余加入水，配成溶液PH值=5. 8。3)、中性红染色液的配制用30%的酒精配制浓度为0. 05%中性红染色液。4)、花粉培养室的制备选用培养皿作为花粉培养室，培养皿底盛2ml水，培养皿盖涂薄层培养基。5)、薄层培养基的制备培养基趁热取出，用移液枪吸取培养液，在培养皿盖内侧滴加Iml的培养基溶液，然后立刻用玻璃接种环将培养基溶液展开成薄层的培养基。6)、花粉的撒布将带有培养基的培养皿水平放置于实验台上，用镊子摘除花絮的花瓣，夹住花药下方花丝，取出花药，将花药轻轻在培养基表面上滑动，或将夹有花药的镊子轻轻的在培养皿边缘敲几下使花粉单层、均勻地散落分布在培养基表面上。7)、中性红染色液染色用移液枪在培养基上有花粉处滴加0. 5ml中性红染色液，将花粉染色30秒。将培养皿竖起，用吸水纸在培养基边缘将染液充分吸干。8)、花粉培养将培养物置于恒温箱内，温度控制在23°C，20分钟后开始观察花粉管萌发和花粉管生长的动态发育过程。9)、染色后鉴定指标a、染色组花粉的萌发率与不染色对照组基本一致。b、染色组花粉仍然具有群体效应。C、染色组花粉萌发和花粉管生长过程的观察效果明显强于不染色对照组。实施例2
1)、花粉的采集采集当天开放百合的花粉。2)、花粉培养基的制备蔗糖10 %，琼脂0.6%，硼酸0.04%，其余加入水，配成溶液PH值=6.0。3)、中性红染色液的配制用30%的酒精配制浓度为0. 10%中性红染色液。4)、花粉培养室的制备选用培养皿作为花粉培养室，培养皿底盛2ml水，培养皿盖涂薄层培养基。5)、薄层培养基的制备培养基趁热取出，用移液枪吸取培养液，在培养皿盖内侧滴加Iml的培养基溶液，然后立刻用玻璃接种环将培养基溶液展开成薄层的培养基。6)、花粉的撒布将带有培养基的培养皿水平放置于实验台上，用镊子摘除花絮的花瓣，夹住花药下方花丝，取出花药，将花药轻轻在培养基表面上滑动，或将夹有花药的镊子轻轻的在培养皿边缘敲几下使花粉单层、均勻地散落分布在培养基表面上。7)、中性红染色液染色用移液枪在培养基上有花粉处滴加0. 5ml中性红染色液，将花粉染色30秒。将培养皿竖起，用吸水纸在培养基边缘将染液充分吸干。8)、花粉培养将培养物置于恒温箱内，温度控制在25°C，25分钟后开始观察花粉管萌发和花粉管生长的动态发育过程。9)、染色后鉴定指标a、染色组花粉的萌发率与不染色对照组基本一致。b、染色组花粉仍然具有群体效应。C、染色组花粉萌发和花粉管生长过程的观察效果明显强于不染色对照组。实施例31)、花粉的采集采集当天开放番茄的花粉。2)、花粉培养基的制备蔗糖12%，琼脂0.3%，硼酸0.04%，其余加入水，配成溶液PH值=5.4。3)、中性红染色液的配制用30%的酒精配制浓度为0. 08%的中性红染色液。4)、花粉培养室的制备选用培养皿作为花粉培养室，培养皿底盛2ml水，培养皿盖涂薄层培养基。5)、薄层培养基的制备培养基趁热取出，用移液枪吸取培养液，在培养皿盖内侧滴加Iml的培养基溶液，然后立刻用玻璃接种环将培养基溶液展开成薄层的培养基。6)、花粉的撒布将带有培养基的培养皿水平放置于实验台上，用镊子摘除花絮的花瓣，夹住花药下方花丝，取出花药，将花药轻轻在培养基表面上滑动，或将夹有花药的镊子轻轻的在培养皿边缘敲几下使花粉单层、均勻地散落分布在培养基表面上。7)、中性红染色液染色用移液枪在培养基上有花粉处滴加0. 5ml中性红染色液，将花粉染色30秒。将培养皿竖起，用吸水纸在培养基边缘将染液充分吸干。8)、花粉培养将培养物置于恒温箱内，温度控制在22°C -2520分钟后开始观察花粉管萌发和花粉管生长的动态发育过程。9)、染色后鉴定指标a、染色组花粉的萌发率与不染色对照组基本一致。b、染色组花粉仍然具有群体效应。C、染色组花粉萌发和花粉管生长过程的观察效果明显强于不染色对照组。
权利要求
1.一种观察花粉管萌发和生长的动态发育过程的方法，具体步骤如下1)、花粉的采集采集当天开放的花粉；2)、花粉培养基的制备取蔗糖5 % -20 %，琼脂0. 3 % -0. 6 %，硼酸0. 04 %，其余加入水，配成溶液PH值= 5. 4-6. 4 ；3)、中性红染色液的配制用30%的酒精配制浓度范围为0. 01% -0. 15%的中性红染色液；4)、花粉培养室的制备选用培养皿作为花粉培养室，培养皿底盛2ml水，培养皿盖涂薄层培养基；5)、薄层培养基的制备培养基趁热取出，用移液枪吸取培养液，在培养皿盖内侧滴加Iml的培养基溶液，然后立刻用玻璃接种环将培养基溶液展开成薄层的培养基；6)、花粉的撒布将带有培养基的培养皿水平放置于实验台上，用镊子摘除花絮的花瓣，夹住花药下方花丝，取出花药，将花药轻轻在培养基表面上滑动，或将夹有花药的镊子轻轻的在培养皿边缘敲几下使花粉单层、均勻地散落分布在培养基表面上；7)、中性红染色液染色用移液枪在培养基上有花粉处滴加0. 5ml中性红染色液，将花粉染色30秒，将培养皿竖起，用吸水纸在培养基边缘将染液充分吸干；8)、花粉培养将培养物置于恒温箱内，温度控制在22°C -2520分钟后开始观察花粉管萌发和花粉管生长的动态发育过程。
2.如权利要求1所述的一种观察花粉管萌发和生长的动态发育过程的方法，其特征在于所述的中性红染色液浓度在0. 01% -0. 10%之间。
3.如权利要求1所述的一种观察花粉管萌发和生长的动态发育过程的方法，其特征在于，其步骤为1)、花粉的采集采集当天开放的大花君子兰花粉；2)、花粉培养基的制备蔗糖5%，琼脂0.5%，硼酸0. 04%，其余加入水，配成溶液PH值=5.8 ；3)、中性红染色液的配制用30%的酒精配制浓度为0. 05%中性红染色液；4)、花粉培养室的制备选用培养皿作为花粉培养室，培养皿底盛2ml水，培养皿盖涂薄层培养基；5)、薄层培养基的制备培养基趁热取出，用移液枪吸取培养液，在培养皿盖内侧滴加Iml的培养基溶液，然后立刻用玻璃接种环将培养基溶液展开成薄层的培养基；6)、花粉的撒布将带有培养基的培养皿水平放置于实验台上，用镊子摘除花絮的花瓣，夹住花药下方花丝，取出花药，将花药轻轻在培养基表面上滑动，或将夹有花药的镊子轻轻的在培养皿边缘敲几下使花粉单层、均勻地散落分布在培养基表面上；7)、中性红染色液染色用移液枪在培养基上有花粉处滴加0. 5ml中性红染色液，将花粉染色30秒，将培养皿竖起，用吸水纸在培养基边缘将染液充分吸干；8)、花粉培养将培养物置于恒温箱内，温度控制在23°C，20分钟后开始观察花粉管萌发和花粉管生长的动态发育过程。
4.如权利要求1所述的一种观察花粉管萌发和生长的动态发育过程的方法，其特征在于，其步骤为1)、花粉的采集采集当天开放番茄的花粉；2)、花粉培养基的制备蔗糖12 %，琼脂0.3%，硼酸0. 04%，其余加入水，配成溶液PH值=5.4 ；3)、中性红染色液的配制用30%的酒精配制浓度为0. 08%的中性红染色液；4)、花粉培养室的制备选用培养皿作为花粉培养室，培养皿底盛2ml水，培养皿盖涂薄层培养基；5)、薄层培养基的制备培养基趁热取出，用移液枪吸取培养液，在培养皿盖内侧滴加Iml的培养基溶液，然后立刻用玻璃接种环将培养基溶液展开成薄层的培养基；6)、花粉的撒布将带有培养基的培养皿水平放置于实验台上，用镊子摘除花絮的花瓣，夹住花药下方花丝，取出花药，将花药轻轻在培养基表面上滑动，或将夹有花药的镊子轻轻的在培养皿边缘敲几下使花粉单层、均勻地散落分布在培养基表面上；7)、中性红染色液染色用移液枪在培养基上有花粉处滴加0. 5ml中性红染色液，将花粉染色30秒，将培养皿竖起，用吸水纸在培养基边缘将染液充分吸干；8)、花粉培养将培养物置于恒温箱内，温度控制在22°C -2520分钟后开始观察花粉管萌发和花粉管生长的动态发育过程。
5.如权利要求1所述的一种观察花粉管萌发和生长的动态发育过程的方法，其特征在于，其步骤为1)、花粉的采集采集当天开放百合的花粉；2)、花粉培养基的制备蔗糖10 %，琼脂0.6%，硼酸0. 04%，其余加入水，配成溶液PH值=6.0 ；3)、中性红染色液的配制用30%的酒精配制浓度为0. 10%中性红染色液；4)、花粉培养室的制备选用培养皿作为花粉培养室，培养皿底盛2ml水，培养皿盖涂薄层培养基；5)、薄层培养基的制备培养基趁热取出，用移液枪吸取培养液，在培养皿盖内侧滴加Iml的培养基溶液，然后立刻用玻璃接种环将培养基溶液展开成薄层的培养基；6)、花粉的撒布将带有培养基的培养皿水平放置于实验台上，用镊子摘除花絮的花瓣，夹住花药下方花丝，取出花药，将花药轻轻在培养基表面上滑动，或将夹有花药的镊子轻轻的在培养皿边缘敲几下使花粉单层、均勻地散落分布在培养基表面上；7)、中性红染色液染色用移液枪在培养基上有花粉处滴加0. 5ml中性红染色液，将花粉染色30秒，将培养皿竖起，用吸水纸在培养基边缘将染液充分吸干；8)、花粉培养将培养物置于恒温箱内，温度控制在25°C，25分钟后开始观察花粉管萌发和花粉管生长的动态发育过程。
全文摘要
一种观察花粉管萌发和生长的动态发育过程的方法，本发明选用中性红作为染色剂对植物花粉进行染色，通过采集花粉、配制培养基、中性红梯度染色液的配置、花粉培养小室的制备、花粉的撒布、花粉培养条件的控制及显微镜观察花粉管萌发和花粉管生长的动态发育过程。染色后花粉管的萌发率和花粉管生长与不染色对照组基本一致，花粉仍然具有群体效应。本发明具有快速、简便、稳定及观察效果好等特点，并可直接观察到花粉管的萌发和花粉管生长的动态发育过程。
文档编号C12N5/04GK102168060SQ20111000035
公开日2011年8月31日申请日期2011年1月4日优先权日2011年1月4日
发明者佟艳丰, 李国德, 李雪梅, 毕晓华, 王泽 , 陈强申请人:沈阳师范大学