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一种快速繁殖鸡蛋花种苗的方法.pdf

来源：花匠小妙招时间：2025-06-14 11:24

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610279094.X (22)申请日 2016.04.28 (71)申请人中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所地址 571737 海南省儋州市宝岛新村 (72)发明人李克烈李志英徐立符运柳黄碧兰 (74)专利代理机构海口翔翔专利事务有限公司 46001 代理人莫臻 (51)Int.Cl. A01H 4/00(2006.01) (54)发明名称一种快速繁殖鸡蛋花种苗的方法 (57)摘要本发明属植物栽培技术领域，涉及一种快速繁殖鸡蛋花种苗的方法。

2、，是取红花鸡蛋花带芽的、去叶的茎尖或茎段，切成小段经消毒灭菌后，利用改良的MS培养基进行不定芽的诱导、增殖培养、壮苗培养、生根培养，然后进行炼苗，移栽控温大棚培育。本发明以带芽的红花鸡蛋花茎段作为外植体，在不经愈伤组织阶段进行快速繁育，所得红花鸡蛋花种苗能够保持原品种的优良性状，遗传性状稳定，变异小，具有操作简单、成本低、生长速度快、周期短、繁殖率高等特点，是一种鸡蛋花以芽繁芽的无菌快繁体系，为鸡蛋花繁育和产业化生产奠定基础。权利要求书1页说明书5页 CN 105850742 A 2016.08.17 CN 105850742 A 。

3、1.一种快速繁殖鸡蛋花种苗的方法，其特征在于，其步骤如下： 1)外植体的取材与消毒：取红花鸡蛋花带芽的、去叶的茎尖或茎段，切成长11.5cm、带23个腋芽的小段作为外植体，消毒灭菌后得到无菌外植体； 2)诱导分化不定芽：将经消毒的外植体接种至诱导培养基中进行不定芽的诱导培养，培养条件：温度为2426，光照强度为15002500lx，光照时间为1012h/d；培养30天后，外植体分化出不定芽；所述诱导培养基是以MS培养基为基本培养基，并添加6-BA 0.5mg/L、 NAA0.02mg/L、蔗糖30g/L、卡拉胶6.5g/L， pH为5.8； 3)不定芽增殖。

4、培养：切取不定芽接种于增殖培养基中进行培养，培养条件：温度为24 26，光照强度为15002500lx，光照时间为1012h/d；培养30天后获得大量的丛生芽；所述增殖培养基是以MS培养基为基本培养基，并添加6-BA 23mg/L、 NAA0.20.5mg/L、蔗糖 30g/L、卡拉胶6.5g/L， pH为5.8； 4)壮苗培养：将丛生芽接种至壮苗培养基中进行壮苗培养，培养条件：温度为2426 ，光照强度为15002500lx，光照时间为1012h/d；所述壮苗培养基是以MS培养基为基本培养基，并添加蔗糖30g/L、卡拉胶6.5g/L， pH为5.8；。

5、5)试管苗生根培养：待经壮苗培养的不定芽生长到23cm时，将不定芽丛进行单株分离，接种到生根培养基上进行生根培养，培养条件：温度为2426，光照强度为1500 2500lx，光照时间为1012h/d；培养30天后形成良好根系，获得完整植株；所述生根培养基是以1/2MS培养基为基本培养基，并添加NAA 1.0mg/L、 IBA 0.5mg/L、蔗糖30g/L、卡拉胶 6.5g/L， pH为5.8； 6)试管苗炼苗移栽：将生根苗移至室外炼苗710天后取出，洗净小苗根部的培养基，并在0.1的高锰酸钾溶液中进行漂洗、消毒后，移至1： 1的椰糠和腐殖土的基质中，。

6、并放于大棚内进行培育。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述红花鸡蛋花外植体的消毒过程是：首先用自来水流水冲洗，然后用75酒精浸泡815s，再放入0.1HgCl2溶液消毒灭菌10 15min，消毒灭菌液中加入23滴吐温-20，最后用无菌水冲洗35次，得到无菌外植体。权利要求书 1/1 页 2 CN 105850742 A 2 一种快速繁殖鸡蛋花种苗的方法技术领域 0001 本发明属植物栽培技术领域，涉及一种鸡蛋花种苗的繁殖方法，具体是一种以鸡蛋花茎段作为外植体进行快速繁殖种苗的方法。背景技术 0002 鸡蛋花(Plumeria rubra L.。

7、cv.Acutifolia)，属夹竹桃科鸡蛋花属落叶灌林或乔木，喜湿热气候，原产于墨西哥等美洲热带地区，现广植于亚洲热带及亚热带地区，国内主产于福建、广东、广西、云南、海南等地。鸡蛋花树形优美，树冠半球形，叶似枇杷，大而青绿，花色素雅，芳香，且花型奇特，是优良的庭院树种，既可在庭园、草地栽植观赏，也可盆栽，鲜切花可用于插花或制作花束、花篮等。 0003 鸡蛋花干燥花朵为广东地区常用药材，是广东凉茶 “五花茶” 的主要原料之一，有清热解暑、利湿、止咳的功效，用于湿热下痢，肺热咳嗽等。鸡蛋花含有鸡蛋花酸(plumeric acid)。

8、、甙类及挥发油，气味芳香，可提取香精应用于日用化妆品行业。 0004 鸡蛋花的常规繁殖方法是利用种子繁殖，也有采用扦插、压条、嫁接等方式繁殖，但其繁殖速度慢、周期长，远远不能满足产业化的需求。目前，有相关研究人员尝试利用组培技术进行快速繁殖鸡蛋花的相关研究，如专利CN103444540A公开了一种组织培养快速繁育红花鸡蛋花的方法，其以红鸡蛋花叶片为外植体，在诱导形成愈伤组织后，再经愈伤组织分化、芽增殖和生根培养，形成完整植株小苗，最后进行炼苗和移栽。然而，其以叶片作为外植体，因叶片大多由已分化的细胞组成，其再生成植株通常需要经历从分化状态恢复。

9、到分生组织状态的脱分化过程，而经脱分化的细胞在一定条件下经愈伤组织阶段再分化出芽或胚状体而形成植株时，其后代易发生变异，导致获得的植株遗传学特性不稳定。发明内容 0005 本发明的目的提供一种快速繁殖鸡蛋花种苗的方法，以鸡蛋花茎段作为外植体进行组织培养，在不经过愈伤组织阶段实现种苗快速繁殖，且能保证其遗传学特性，减少玻璃化发生率，以满足城市绿化美化对鸡蛋花种苗的需求。 0006 本发明所采用的技术方案： 0007 一种快速繁殖鸡蛋花种苗的方法，其步骤如下： 0008 1)外植体的取材与消毒：取红花鸡蛋花带芽的、去叶的茎尖或茎段，切成长1 1.5cm、带23。

10、个腋芽的小段作为外植体，消毒灭菌后得到无菌外植体。 0009 所述红花鸡蛋花外植体的消毒过程是：首先用自来水流水冲洗，然后用75酒精浸泡815s，再放入0.1HgCl2溶液消毒灭菌1015min，消毒灭菌液中加入23滴吐温- 20，最后用无菌水冲洗35次，得到无菌外植体。 0010 2)诱导分化不定芽：将经消毒的外植体接种至诱导培养基中进行不定芽的诱导培养，培养条件：温度为2426，光照强度为15002500lx，光照时间为1012h/d；培养30 天后，外植体分化出不定芽。所述诱导培养基是以MS培养基为基本培养基，并添加6- 说明书 1/5 页 3 C。

11、N 105850742 A 3 BA0.5mg/L、 NAA 0.02mg/L、蔗糖30g/L、卡拉胶6.5g/L， pH为5.8。 0011 3)不定芽增殖培养：切取不定芽接种于增殖培养基中进行培养，培养条件：温度为 2426，光照强度为15002500lx，光照时间为1012h/d；培养30天后获得大量的丛生芽。所述增殖培养基是以MS培养基为基本培养基，并添加6-BA 23mg/L、 NAA0.20.5mg/ L、蔗糖30g/L、卡拉胶6.5g/L， pH为5.8。 0012 4)壮苗培养：将丛生芽接种至壮苗培养基中进行壮苗培养，培养条件：温度为24 26，。

12、光照强度为15002500lx，光照时间为1012h/d。所述壮苗培养基是以MS培养基为基本培养基，并添加蔗糖30g/L、卡拉胶6.5g/L， pH为5.8。 0013 5)试管苗生根培养：待经壮苗培养的不定芽生长到23cm时，将不定芽丛进行单株分离，接种到生根培养基上进行生根培养，培养条件：温度为24 26，光照强度为1500 2500lx，光照时间为1012h/d；培养30天后形成良好根系，获得完整植株。所述生根培养基是以1/2MS培养基为基本培养基，并添加NAA 1.0mg/L、 IBA 0.5mg/L、蔗糖30g/L、卡拉胶 6.5g/L， p。

13、H为5.8； 0014 6)试管苗炼苗移栽：将生根苗移至室外炼苗710天后取出，洗净小苗根部的培养基，并在0.1的高锰酸钾溶液中进行漂洗、消毒后，移至1： 1的椰糠和腐殖土的基质中，并放于控温大棚内进行培育。 0015 本发明以带芽的红花鸡蛋花茎段作为外植体，在不经愈伤组织阶段进行快速繁育，所得红花鸡蛋花种苗能够保持原品种的优良性状，遗传性状稳定，变异小，具有操作简单、成本低、生长速度快、周期短、繁殖率高等特点，是一种鸡蛋花以芽繁芽的无菌快繁体系，为鸡蛋花繁育和产业化生产奠定基础。具体实施方式 0016 下面结合实施例，对本发明的具体实施方式作进。

14、一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件,或按照制造厂商所建议的条件。 0017 一、红花鸡蛋花种苗繁殖 0018 实施例一 0019 1、外植体的取材与消毒：于2015年5月在中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所基地，选取处于生长旺盛时期的红花鸡蛋花植株，采集当年生、有饱满而未萌发的腋芽的嫩枝作为外植体。取带芽的、去叶的茎尖，切成长1.2cm、带23个腋芽的小段，一共切取100段作为外植体放在100ml三角瓶进行消毒：首先用自来水流水冲洗10min，用75酒精浸泡1。

15、0s，再放入0.1HgCl2溶液消毒灭菌12min，消毒灭菌液中加入2滴吐温-20，最后用无菌水冲洗3次，得到无菌外植体。 0020 2、诱导分化不定芽：将经消毒的外植体接种至诱导培养基(MS+6-BA 0.5mg/L+ NAA0.02mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶6.5g/L， pH为5.8)中进行不定芽的诱导培养，培养条件：温度为25，光照强度为1800lx，光照时间为10h/d；培养30天后，外植体分化出不定芽。 0021 3、不定芽增殖培养：将分化出不定芽的茎尖细切成含有2个不定芽的小段200段，接种于增殖培养基(MS+6-BA 2mg/L+NAA0。

16、.3mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶6.5g/L， pH为5.8)中进行培养，培养条件：温度为24，光照强度为1600lx，光照时间为12h/d；培养30天后获得大说明书 2/5 页 4 CN 105850742 A 4 量的丛生芽。 0022 4、壮苗培养：将丛生芽接种至壮苗培养基(MS+蔗糖30g/L+卡拉胶6.5g/L， pH为 5.8)中进行壮苗培养，培养条件：温度为25，光照强度为1800lx，光照时间为11h/d。 0023 5、试管苗生根培养：待经壮苗培养的不定芽生长到23cm时，单株切取400株，接种到生根培养基(1/2MS+NAA 1.。

17、0mg/L+IBA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶6.5g/L， pH为5.8) 上进行生根培养，培养条件：温度为25，光照强度为2000lx，光照时间为12h/d；培养30天后形成良好根系，获得完整植株。 0024 6、试管苗炼苗移栽：将300株根系完整的生根苗移至室外炼苗8天后取出，洗净小苗根部的培养基，并在0.1的高锰酸钾溶液中进行漂洗、消毒后，移至1： 1的椰糠和腐殖土的基质中，于控温大棚内进行培育。 0025 实施例二 0026 1、外植体的取材与消毒：于2015年6月中旬在中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所基地，选取处于生长旺盛。

18、时期的红花鸡蛋花植株，采集当年生、有饱满而未萌发的腋芽的嫩枝作为外植体。取带芽的、去叶的茎段，切成长1.5cm、带23个腋芽的小段，一共切取100段作为外植体放在100ml三角瓶进行消毒：首先用自来水流水冲洗10min，用75 酒精浸泡13s，再放入0.1HgCl2溶液消毒灭菌12min，消毒灭菌液中加入3滴吐温-20，最后用无菌水冲洗4次，得到无菌外植体。 0027 2、诱导分化不定芽：将经消毒的外植体接种至诱导培养基(MS+6-BA 0.5mg/L+ NAA0.02mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶6.5g/L， pH为5.8)中进行不定芽的诱导培养，培。

19、养条件：温度为26，光照强度为2200lx，光照时间为12h/d；培养30天后，外植体分化出不定芽。 0028 3、不定芽增殖培养：将分化出不定芽的茎段细切成含有2个不定芽的小段 200段，接种于增殖培养基(MS+6-BA 3mg/L+NAA0.3mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶6.5g/L， pH为5.8)中进行培养，培养条件：温度为24，光照强度为2100lx，光照时间为12h/d；培养30天后获得大量的丛生芽。 0029 4、壮苗培养：将丛生芽接种至壮苗培养基(MS+蔗糖30g/L+卡拉胶6.5g/L， pH为 5.8)中进行壮苗培养，培养条件：温。

20、度为24，光照强度为2500lx，光照时间为10h/d。 0030 5、试管苗生根培养：待经壮苗培养的不定芽生长到23cm时，单株切取400株，接种到生根培养基(1/2MS+NAA 1.0mg/L+IBA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶6.5g/L， pH为5.8) 上进行生根培养，培养条件：温度为26，光照强度为1800lx，光照时间为10h/d；培养30天后形成良好根系，获得完整植株。 0031 6、试管苗炼苗移栽：将300株根系完整的生根苗移至室外炼苗10天后取出，洗净小苗根部的培养基，并在0.1的高锰酸钾溶液中进行漂洗、消毒后，移至1：。

21、 1的椰糠和腐殖土的基质中，于控温大棚内进行培育。 0032 实施例三 0033 1、外植体的取材与消毒：于2015年7月中旬在中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所基地，选取处于生长旺盛时期的红花鸡蛋花植株，采集当年生、有饱满而未萌发的腋芽的嫩枝作为外植体。取带芽的、去叶的茎段，切成1.3cm长、带23个腋芽的小段，一共切取100段作为外植体放在100ml三角瓶进行消毒：首先用自来水流水冲洗10min，用75 酒精浸泡15s，再放入0.1HgCl2溶液消毒灭菌12min，消毒灭菌液中加入2滴吐温-20，最后说明书 3/5 页 5 CN 1058。

22、50742 A 5 用无菌水冲洗5次，得到无菌外植体。 0034 2、诱导分化不定芽：将经消毒的外植体接种至诱导培养基(MS+6-BA 0.5mg/L+ NAA0.02mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶6.5g/L， pH为5.8)中进行不定芽的诱导培养，培养条件：温度为25，光照强度为2400lx，光照时间为10h/d；培养30天后，外植体分化出不定芽。 0035 3、不定芽增殖培养：将分化出不定芽的茎段细切成含有2个不定芽的小段200段，接种于增殖培养基(MS+6-BA 2mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶6.5g/L， pH为5.8)中进行。

23、培养，培养条件：温度为26，光照强度为2400lx，光照时间为10h/d；培养30天后获得大量的丛生芽。 0036 4、壮苗培养：将丛生芽接种至壮苗培养基(MS+蔗糖30g/L+卡拉胶6.5g/L， pH为 5.8)中进行壮苗培养，培养条件：温度为26，光照强度为2100lx，光照时间为11h/d。 0037 5、试管苗生根培养：待经壮苗培养的不定芽生长到23cm时，单株切取400株，接种到生根培养基(1/2MS+NAA 1.0mg/L+IBA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶6.5g/L， pH为5.8) 上进行生根培养，培养条件：温度为25，光。

24、照强度为2400lx，光照时间为12h/d；培养30天后形成良好根系，获得完整植株。 0038 6、试管苗炼苗移栽：将300株根系完整的生根苗移至室外炼苗7天后取出，洗净小苗根部的培养基，并在0.1的高锰酸钾溶液中进行漂洗、消毒后，移至1： 1的椰糠和腐殖土的基质中，于控温大棚内进行培育。 0039 二、种苗繁殖效果鉴定 0040 1.红花鸡蛋花外植体不定芽诱导效果鉴定 0041 为鉴定红花鸡蛋花外植体的诱导效果，对上述实施例的不定芽诱导情况进行观察，统计不定芽诱导数，计算诱导率，结果见表1。 0042 表1红花鸡蛋花外植体诱导情况 0043 项目接种数。

25、诱导出不定芽的外植体数诱导率实施例一 100 83 83 实施例二 100 89 89 实施例三 100 82 82 0044 上述红花鸡蛋花外植体不定芽诱导效果表明，本发明以改良的MS培养基进行不定芽诱导，诱导率达80以上，具有较好的分化效果。 0045 2.红花鸡蛋花不定芽增殖效果鉴定 0046 为鉴定红花鸡蛋花不定芽的增殖效果，对上述实施例的不定芽的增殖情况进行观察，统计增殖数，计算增值系数，结果见表2。 0047 表2不定芽的增殖情况 0048 0049 0050 上述不定芽增殖效果表明，本发明以改良的MS培养基进行不定芽增殖，增殖系数达到5.0以上，增。

26、殖效果明显。说明书 4/5 页 6 CN 105850742 A 6 0051 3.不定芽生根效果鉴定 0052 为鉴定不定芽的生根效果，对上述实施例的不定芽生根情况进行观察，统计生根数，计算生根率，结果见表3。 0053 表3不定芽的生根情况 0054 项目不定芽数生根数生根率实施例一 400 376 94.0 实施例二 400 389 97.3 实施例三 400 381 95.3 0055 上述不定芽生根效果表明，本发明以改良的MS培养基对不定芽进行诱导生根，在短时间内(1个月左右)诱导出完整根系，生根率达90以上。 0056 4.生根苗苗圃移栽效果鉴定 0。

27、057 为鉴定生根苗的移栽成活效果，对上述实施例的生根苗苗圃移栽生长情况进行观察，统计成活数，计算生根率，结果见表4。 0058 表4生根苗的移栽生长情况 0059 项目生根苗数成活数生根率实施例一 300 283 94.3 实施例二 300 291 97.0 实施例三 300 276 92.0 0060 上述移栽效果表明，本发明以诱导出良好根系的生根苗进行苗圃移栽，以椰糠和腐殖土的混合物为栽培基质，具有较高的生根苗移栽成活率，达到90以上，可以满足批量种苗繁殖，为鸡蛋花繁育和产业化生产奠定基础。。 0061 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。说明书 5/5 页 7 CN 105850742 A 7 。