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一株深色有隔内生真菌菌株及其应用

来源：花匠小妙招时间：2025-05-19 14:29

一株深色有隔内生真菌菌株及其应用

本发明涉及微生物农药，具体涉及一株深色有隔内生真菌菌株及其应用。

背景技术：

1、植物寄生线虫每年对全球作物造成1570亿美元的损失(abad et al.,2008)，目前已成为仅次于真菌病害的第二大植物病害；植物寄生线虫的损失中约50％是由根结线虫造成的(kim et al.,2016)。根结线虫属(meloidogyne)目前已报道有103个种(sun et al.,2024)，根结线虫几乎能寄生所有的开花植物,包括所有的栽培作物在内(yimer et al.,2023)，特别是茄科、葫芦科、禾本科、十字花科、豆科、伞形科、百合科以及名贵中药材，造成作物减产20％以上，严重时甚至绝产。此外，在根结线虫侵染形成的伤口引起其他土传病原菌的感染，形成根结线虫复合病害，进一步加重对植物的破坏(wagner et al.,2022)。

2、使用化学农药是防治根结线虫的主要措施，目前能有效控制根结线虫的化学农药主要有阿维菌素、氟吡菌酰胺、噻唑膦、溴甲烷、呋喃丹、涕灭威、棉隆、威百亩、杀螟丹、灭线磷等(taylor,2003)。由于某些杀线化学农药具有高毒性问题，对人畜和生态环境造成负面影响，在当前减农药减化肥及生态保护的政策指导下，高毒高残杀线剂被限制或禁止在实际生产中应用和推广，生物农药迎来了发展的广阔空间(hu&liu,2024)。线虫生防菌通过捕食、寄生、产毒等方式致死线虫，是自然界中控制线虫种群的重要微生物类群，是开发生防制剂的重要资源(li et al.,2015)。对根结线虫的生物防治具有作用持久、生态友好等特点，发掘新的生防资源并开发高效生物杀线剂具有广阔的市场前景。

3、深色有隔内生真菌(dark septate endophytes,dse)是植物内生菌的主要类群，其特征是dse与植物根系共生后可形成颜色深且具有明显横隔的菌丝结构，能在植物细胞内及细胞间隙形成“微菌核”结构，dse定殖于健康植物根系的表皮、皮层，对寄主植物没有危害，且能增强宿主植物对病原菌的抗性以及对重金属胁迫的耐受性(罗其鑫&侯瑞,2024)。有研究表明dse在线虫防治中具有较好的应用价值；例如：ashrafi et al.(2018)报道polyphilus sieberi能寄生禾谷孢囊线虫(heterodera avenae)的卵，该真菌通过形成高度黑化的单孢子菌丝在线虫孢囊和卵上定殖，并产生黑化菌丝和暗隔内生菌典型的微核样结构。尽管如此，目利用dse防治线虫病害的研究和应用鲜报道，大量的生防资源有待发掘和利用。

4、目前，缺乏深色有隔内生真菌菌株在根结线虫防治中的应用。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一株深色有隔内生真菌菌株及其应用。

2、为了解决现有技术的问题，本发明提供了如下技术方案：第一方面，本申请提供一株深色有隔内生真菌菌株；

3、第二方面，本申请提供一株深色有隔内生真菌菌株制备的深色有隔内生真菌菌剂；

4、第三方面，本申请提供一种深色有隔内生真菌菌剂的制备方法；

5、第四方面，本申请提供一株深色有隔内生真菌菌株或深色有隔内生真菌菌剂在制备用于防治根结线虫病制剂中的应用。

6、本申请第一方面提供的一株深色有隔内生真菌菌株，该菌株为深色有隔内生真菌菌株ymf1.068，保藏名称为深色有隔内生真菌(paraphoma vinacea)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心cgmcc，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2024年5月20日；保藏编号：cgmcc no.41305。

7、进一步地，深色有隔内生真菌菌株的its基因序列为seq id no.1所示的核苷酸序列。

8、本申请第二方面提供的一株深色有隔内生真菌菌株制备的深色有隔内生真菌菌剂。

9、进一步地，其活性成分为如下(a)(b)(c)中的至少一种：

10、(a)深色有隔内生真菌的发酵培养物；

11、(b)所得深色有隔内生真菌的孢子悬浮液；

12、(c)所得深色有隔内生真菌细胞的超声裂解沉淀。

13、本申请第三方面提供的一种深色有隔内生真菌菌剂的制备方法，包括如下步骤：

14、(1)ymf1.068菌株试管斜面种子培养：将菌株接种到pda培养基斜面上，28℃下培养5天后获得斜面种子；

15、(2)ymf1.068菌株液体种子培养：将斜面种子接种到装有pdb培养基的三角瓶中，28℃，150rpm条件下摇床培养4天获得液体种子；

16、(3)ymf1.068菌株发酵罐大量培养：将液体种子按体积比为5％接入装有pdb培养基的发酵罐中，在1000升发酵罐中的培养条件控制在：温度28℃，搅拌速度120-180rpm，发酵时间72-96小时；

17、(4)ymf1.068菌剂制备：经发酵罐培养获得的微生物菌体及其代谢物与适量的硅藻土混合后在65℃以下烘干或晾干至水分含量小于5％，粉碎后，制得深色有隔内生真菌菌剂。

18、本申请第四方面提供的深色有隔内生真菌菌株或深色有隔内生真菌菌剂在制备用于防治根结线虫病制剂中的应用。

19、有益效果：本发明公开了一株深色有隔内生真菌paraphoma vinacea ymf1.068菌株，该菌株能有效防治根结线虫病，具有高致死活性，增强植物抗性，且对人畜安全、无残留，这意味着它对环境和人体健康的影响较小。利用该菌株制备的微生物菌剂，在番茄、黄瓜和烟草上的应用显示了68％以上的防效，与化学农药效果相当，展现了其作为生物农药的潜力和市场前景。

20、与现有技术相比，本发明具有以下优点：

21、(1)本发明筛选到一株dse菌株paraphoma vinacea ymf1.068，其对根结线虫二龄幼虫有较强的致死活性，利用ymf1.068菌株制备的菌剂对番茄、黄瓜、烟草根结线虫病的防效在68％以上，具有重要的应用价值，而该dse的杀线虫活性及其在根结线虫病中的应用未见报道。

22、(2)对人畜安全：由于ymf1.068菌剂是生物农药，对人畜和环境安全，因此它具有较好的应用前景，尤其是在当前减农药减化肥及生态保护的政策指导下。生态友好：ymf1.068菌剂作为一种生物农药，具有作用持久、生态友好的特点，这有助于减少化学农药对环境的负面影响。

23、(3)新的生防资源：本发明提供了一种新的生防资源，有助于减少对化学农药的依赖，并为开发高效生物杀线剂提供了新的可能性。增强植物抗性：深色有隔内生真菌(dse)定殖于健康植物根系的表皮、皮层，对寄主植物没有危害，且能增强宿主植物对病原菌的抗性以及对重金属胁迫的耐受性。市场前景广阔：发掘新的生防资源并开发高效生物杀线剂具有广阔的市场前景，这有助于推动农业可持续发展和生态保护。

技术特征：

1.一株深色有隔内生真菌菌株，其特征在于：该菌株为深色有隔内生真菌菌株ymf1.068，保藏名称为深色有隔内生真菌(paraphoma vinacea)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心cgmcc，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2024年5月20日；保藏编号：cgmcc no.41305。

2.根据权利要求1所述的深色有隔内生真菌菌株，其特征在于：所述深色有隔内生真菌菌株的its基因序列为seq id no.1所示的核苷酸序列。

3.权利要求1所述的深色有隔内生真菌菌株制备的深色有隔内生真菌菌剂。

4.根据权利要求3所述的深色有隔内生真菌菌剂，其活性成分为如下(a)(b)(c)中的至少一种：

5.权利要求1所述的深色有隔内生真菌菌剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

6.权利要求1所述的深色有隔内生真菌菌株或权利要求3所述的深色有隔内生真菌菌剂在制备用于防治根结线虫病制剂中的应用。

技术总结
本发明公开了一株深色有隔内生真菌菌株及其应用，该菌株为深色有隔内生真菌菌株YMF1.068，保藏名称为深色有隔内生真菌(Paraphoma vinacea)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2024年5月20日；保藏编号：CGMCC No.41305。该菌株能有效防治根结线虫病，具有高致死活性，增强植物抗性，且对人畜安全、无残留。利用该菌株制备的微生物菌剂，在番茄、黄瓜和烟草上的应用显示了68％以上的防效，与化学农药效果相当，展现了其作为生物农药的潜力和市场前景。

技术研发人员：杨金婷,陈佳清,刀凤兰,莫明和,黄英
受保护的技术使用者：云南大学
技术研发日：
技术公布日：2025/2/20