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特殊染色和组织化学技术的操作规范和质量控制.pdf

来源：花匠小妙招时间：2025-05-09 20:58

三、阳性对照问题免疫组化的影响因素很多，都解决起米也很难。但是，有一个简单的解决办法，几乎可以将所有的技术问题都解决，这就是：设立阳性对照。阳性对照染色成功，说明技术过程没有问题；反之，肯定有问题，需要找原因，进行改进。阳性对照组织可用：1、阑尾，2、多组织切片，3、组织芯片。特殊染色和组织化学技术的操作规范和质量控制梁英杰中山大学附属第一医院病理科中山医学院病理学教研室，广州 510080 特殊染色和组织化学染色是病理学研究的技术之一，也是临床病理诊断中常用的相关诊断技术。虽然随着免疫组织化学技术的发展和应用，逐步代替了许多特殊染色和组织化学技术，但是由于特殊染色具有简单、快速和成本低的特点而一直被应用，而且许多特殊染色是免疫组织化学技术不能代替的。如观察神经髓鞘是否变性和脱失，砂罗铬花青R染色法是一种简单而有效的特殊染色方法；苏丹染色法显示脂肪，常用于卵巢的卵泡膜细胞瘤和纤维瘤的鉴别诊断。在肾穿病理诊断中，M勰son三色、PAS、 PAMS是常规应用的特殊染色方法。一、特殊染色和组织化学染色的概念和机制特殊染色和组织化学染色常用于显示在常规肛染色中难以观察或观察不到的组织成分或组织细胞所含的某些物质，以了解这些物质在组织和细胞中的分布、含量和变化以研究组织细胞的生理和病理改变及其机制。特殊染色和组织化学染色是一个很复杂的过程，染色机制还不十分清楚。一般来说，被染色的物质是直接通过与染料结合而呈色的染色称为特殊染色，如M嬲son三色染色肌纤维被丽春红酸性品红染成红色，胶原纤维被苯胺蓝或亮绿染成蓝色或绿色。组织化学染色是通过生物化学反应或化学反应形成有色的不溶性的沉淀物，定位在组织细胞上，从而确定在组织细胞中存在某种物质。如用亚铁氰化钾染色法显示含铁血黄素的普鲁士蓝反应和各种酶的组织化学反应。二、特殊染色和组织化学染色的特点特殊染色和组织化学染色能够定性、定量和定位地检测出组织细胞中的某些成分和特殊物质，而一般的生化测定只能定性和定量却不能定位。如观察心肌组织的纤维化，应用Masson三色特殊染色方法，肌纤维被染成红色，胶原纤维被染成蓝色，既可以显示出组织的胶原纤维(阳性或阴性)及其胶原纤维含量的多少(颜色的深浅)，同时还可以观察到胶原纤维在心肌中的分布。在酶组化研究中，不仅可以检测出酶的性质，而且可以测定酶的含量(阳性反应强弱不同，酶的含量也就不同)，还可以确定各种酶的定位，如碱性磷酸酶定位在溶酶体内，琥珀酸脱氢酶位于线粒体内。三、特殊染色和组织化学染色的技术要求特殊染色和组织化学染色技术与常规的制片技术用许多相同之处，但在操作上也有许多特殊要求。 1．应用范围：用于特殊染色和组织化学染色的材料有组织冷冻切片、组织石蜡切片、细胞涂片、细胞冷冻切片和细胞石蜡切片。在冷冻切片中，组织细胞各种成分丢失最少，但形态结构差，可溶性物质弥散；’石蜡切片中组织细胞的许多特殊物质减少甚至丢失，酶活性降低甚至失去活性，但组织形态结构好，所需显示的物质定位清晰。因此需要根据所检测物质的性质及所采用的染色方法，来确定选用材料。 4 2．组织固定：无论用于冷冻切片还是石蜡切片的组织，取材越新鲜越好，以保持生物体的原状，使细胞内的化学成分尽可能保存下来。组织取材后应立即进行冷冻切片，切片可于．20℃或．80℃保存。若作石蜡切片，组织取材后即进行固定，根据被检测物质的不同选用相应的固定液及固定时间。最常用的固定方法是用固定液浸泡组织。固定液有多种，不同的固定液作用不同，．至今尚无一种固定液适用于所有染色的组织，最常用、用途最广的是甲醛液。因甲醛易被氧化成甲酸，因此多会偏酸性，某些物质容易被酸性固定液破坏。最理想的是配成中性甲醛液，可用中性缓冲液配制，也可在10％甲醛液内加入碳酸钙至饱和。许多用于特殊染色和组织化学染色的组织或细胞需要用特殊的固定液固定。使细胞内的化学物质在组织固定过程中不能溶解，定位准确。欲保存固定肝糖原则不能用甲醛固定液，需要用乙醇性固定液如Gendre或C锄cy氏固定液。用乙醇性固定液固定肝糖原，会将糖原颗粒推向细胞的一边，称为“极化现象”，属于一种人为改变，对定位有影响，观察时应注意。’ ．’ 3．试剂配制：特殊染色和组织化学染色需要有较高