一种多花黄精幼胚培养的微块茎繁殖方法与流程

本发明属于药用植物育种领域，具体涉及一种多花黄精幼胚培养的微块茎繁殖方法。

技术背景

多花黄精是药食两用中药材，具补气养阴、健脾、润肺、益肾之功效，市场需求量大，自然生长的多花黄精已远不能满足社会需求，人工栽培的多花黄精已成为市场供应的主体。多黄精繁殖方式主要有种子繁殖和根茎繁殖两种方式，因其种子成熟后具较长的休眠期，种子萌芽生长缓慢、自然发芽率低、育苗和成苗时间长，不易管理，且种子萌发只生长成单个小植株，收获单个小根茎，扩繁速度慢，耗时，在生产上应用较少；人工栽培多采用其根状茎进行无性繁殖，该方法虽然成苗快，但繁殖系数低，种苗参差不齐，种根茎用量大，既不经济，又限制育苗生产规模，且长期进行无性繁殖，易造成种质退化。因此，多花黄精种苗快速繁育成为解决该药材大面积种植的关键环节。

多花黄精幼胚培养，是从多花黄精未成熟果实中获取未成熟种子，将幼小胚从种子中上分离出来，放在人工培养基上进行无菌离体诱导培养，促使其生长发育形成大量小苗。

技术实现要素：

本发明提供了一种多花黄精幼胚培养的微块茎繁殖方法，可工厂化、规模化快速繁育多花黄精种苗，解决多花黄精人工栽培需要迅速繁育大量种源的问题。

本发明是通过如下技术方案实现的：

多花黄精幼胚培养的微块茎繁殖方法，包括如下步骤：

（1）多花黄精优良单株的选择：选择生长健壮、抗病性强、根茎大、品质好优良农艺性状的多花黄精单株，观察其开花结果情况，在果实成熟前1-2个月，采收优良单株未成熟的果实。

（2）未成熟种子幼胚的剥取：将多花黄精优良单株未成熟果实，按照常规组培外殖体消毒程序进行消毒处理，在无菌的环境中，打开果实，取出种子，剥取种子中幼嫩完整的种胚。

（3）幼胚的诱导培养：将无菌剥取的幼嫩种胚接入诱导生长培养基ms+2.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa，暗培养15-20天，再进行1000lux弱光培养15-20天，幼胚膨大形成细胞团块。

（4）微块茎的诱导形成：将幼胚形成的细胞团块接入诱导分化培养基ms+6.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa，常规光照培养30-45天，细胞团块表面形成许多凸起的小芽点，继续光照培养30-45天，诱导形成微块茎；

（5）微块茎的扩繁增殖；将微块茎进行切割分块，接入诱导分化培养基ms+4.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa培养45-60天，小块的微球茎生长膨大成为大块的微块茎，重复前面的切割分块培、扩繁增殖、循环培养，形成大量的微块茎。

（6）微块茎的直接移栽培养成苗：将扩繁增殖产生的大量微块茎，取出清洗，去除叶片，分割为小块，每个小块1-3个芽点，晾干切口，直接播种移栽到苗床或繁殖地培养，常规管理，生长成苗。

本发明与现有的多花黄精种苗繁殖技术（种子繁殖、根茎繁殖、常规组培）相比，本发明具有以下突出优点和效果：（1）选择多花黄精农艺性状优良单株种子的胚进行培养繁殖，是融合了多花黄精种子繁殖（有性繁殖）和常规组培繁殖（无性繁殖）的优点而开展的一种创新性的繁殖方式；（2）幼嫩的种胚生命力旺盛，细胞分裂生长迅速、培养速度快；（3）种胚培养形成的细胞团块分化能力强，形成的微块茎周身都是凸起的小芽，组培效率高；（4）微块茎切割分块、循环培养，扩繁增殖系数大，生产效率高；（5）微块茎直接移栽，生长成苗，管理便捷，成活率高，省去了常规组培的生根壮苗、炼苗驯化过程，既节约生产成本，又提高育苗效率；（6）微块茎无根无叶，移栽方便，不易失水，耐存储、耐运输。

具体实施方式

实施例1

多花黄精幼胚培养的微块茎繁殖方法，包括如下步骤：

（1）多花黄精优良单株的选择：选择生长健壮、抗病性强、根茎大、品质好的优良农艺性状的多花黄精单株，观察其开花结果情况，在果实成熟前1个月，采收优良单株未成熟的果实。

（2）未成熟种子幼胚的剥取：将多花黄精优良单株未成熟果实，按照常规组培外殖体消毒程序进行消毒处理，在无菌的环境中，打开果实，取出种子，剥取种子中幼嫩完整的种胚。

（3）幼胚的诱导培养：将无菌剥取的幼嫩种胚接入诱导生长培养基ms+2.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa，暗培养17天，再进行1000lux弱光培养17天，幼胚膨大形成细胞团块。

（4）微块茎的诱导形成：将幼胚形成的细胞团块接入诱导分化培养基ms+6.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa，常规光照培养40天，细胞团块表面形成许多凸起的小芽点，继续光照培养40天，诱导形成微块茎；

（5）微块茎的扩繁增殖；将微块茎进行切割分块，接入诱导分化培养基ms+4.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa培养55天，小块的微球茎生长膨大成为大块的微块茎，重复前面的切割分块培、扩繁增殖、循环培养，形成大量的微块茎。

（6）微块茎的直接移栽培养成苗：将扩繁增殖产生的大量微块茎，取出清洗，去除叶片，分割为小块，每个小块2个芽点，晾干切口，直接播种移栽到苗床或繁殖地培养，常规管理，生长成苗。

微块茎直接移栽，生长成苗，成活率高达100%，且成苗的质量优于常规品种培育的。省去了常规组培的生根壮苗、炼苗驯化过程，既节约生产成本，又提高育苗效率。

实施例2

多花黄精幼胚培养的微块茎繁殖方法，包括如下步骤：

（1）多花黄精优良单株的选择：选择生长健壮、抗病性强、根茎大、品质好的优良农艺性状的多花黄精单株，观察其开花结果情况，在果实成熟前2个月，采收优良单株未成熟的果实。

（2）未成熟种子幼胚的剥取：将多花黄精优良单株未成熟果实，按照常规组培外殖体消毒程序进行消毒处理，在无菌的环境中，打开果实，取出种子，剥取种子中幼嫩完整的种胚。

（3）幼胚的诱导培养：将无菌剥取的幼嫩种胚接入诱导生长培养基ms+2.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa，暗培养15天，再进行1000lux弱光培养15天，幼胚膨大形成细胞团块。

（4）微块茎的诱导形成：将幼胚形成的细胞团块接入诱导分化培养基ms+6.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa，常规光照培养30天，细胞团块表面形成许多凸起的小芽点，继续光照培养30天，诱导形成微块茎；

（5）微块茎的扩繁增殖；将微块茎进行切割分块，接入诱导分化培养基ms+4.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa培养45天，小块的微球茎生长膨大成为大块的微块茎，重复前面的切割分块培、扩繁增殖、循环培养，形成大量的微块茎。

（6）微块茎的直接移栽培养成苗：将扩繁增殖产生的大量微块茎，取出清洗，去除叶片，分割为小块，每个小块1个芽点，晾干切口，直接播种移栽到苗床或繁殖地培养，常规管理，生长成苗。

微块茎直接移栽，生长成苗，成活率高达98%，且成苗的质量优于常规品种培育的。省去了常规组培的生根壮苗、炼苗驯化过程，既节约生产成本，又提高育苗效率。

实施例3

多花黄精幼胚培养的微块茎繁殖方法，包括如下步骤：

（1）多花黄精优良单株的选择：选择生长健壮、抗病性强、根茎大、品质好的优良农艺性状的多花黄精单株，观察其开花结果情况，在果实成熟前1个月，采收优良单株未成熟的果实。

（2）未成熟种子幼胚的剥取：将多花黄精优良单株未成熟果实，按照常规组培外殖体消毒程序进行消毒处理，在无菌的环境中，打开果实，取出种子，剥取种子中幼嫩完整的种胚。

（3）幼胚的诱导培养：将无菌剥取的幼嫩种胚接入诱导生长培养基ms+2.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa，暗培养20天，再进行1000lux弱光培养20天，幼胚膨大形成细胞团块。

（4）微块茎的诱导形成：将幼胚形成的细胞团块接入诱导分化培养基ms+6.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa，常规光照培养45天，细胞团块表面形成许多凸起的小芽点，继续光照培养45天，诱导形成微块茎；

（5）微块茎的扩繁增殖；将微块茎进行切割分块，接入诱导分化培养基ms+4.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa培养60天，小块的微球茎生长膨大成为大块的微块茎，重复前面的切割分块培、扩繁增殖、循环培养，形成大量的微块茎。

（6）微块茎的直接移栽培养成苗：将扩繁增殖产生的大量微块茎，取出清洗，去除叶片，分割为小块，每个小块3个芽点，晾干切口，直接播种移栽到苗床或繁殖地培养，常规管理，生长成苗。

微块茎直接移栽，生长成苗，成活率高达100%，且成苗的质量优于常规品种培育的。省去了常规组培的生根壮苗、炼苗驯化过程，既节约生产成本，又提高育苗效率。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

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