一种西瓜的快速繁殖的方法

一种西瓜的快速繁殖的方法
【专利摘要】本发明公开了一种西瓜的快速繁殖的方法，属于植物组织培养的技术领域。本发明要解决现有西瓜繁殖技术存在再生周期长、基因型限制大的技术问题。本发明方法如下：一、西瓜种子经消毒后浸泡，再播种于营养钵中，待子叶未展开前，去除顶顶芽及侧芽；二、将诱导液滴加两片子叶的连接处，然后培养至直到西瓜茎尖生长点分化处膨大出不定芽为止；三、暗培养；四，光照培养至不定芽丛长出后，转移到伸长培养基中；五、待不定芽伸长(2.5～3.5)cm，去除不定芽后插到生根培养基中培养，获得再生植株；六、驯化再生植株。本发明方法的基因型限制小，整个再生周期短，从植株播种到收获种子，只需3?4个月。
【专利说明】
一种西瓜的快速繁殖的方法
技术领域
[0001] 本发明属于植物组织培养的技术领域;具体涉及一种西瓜的快速繁殖的方法。
【背景技术】
[0002] 西瓜（学名：Citrullus lanatus(Thunb · )Matsum. et Nakai)-年生蔓生藤本;莖、 枝粗壮，具明显的棱沟。果实大型，近于球形或椭圆形，肉质，多汁，果皮光滑，色泽及纹饰各 式。种子多数，卵形，黑色、红色，两面平滑，基部钝圆，通常边缘稍拱起，花果期夏季。
[0003] 西瓜为夏季之水果，果肉味甜，能降温去暑;种子含油，可作消遣食品；果皮药用， 有清热、利尿、降血压之效。
[0004] 随着植物基因工程的发展，农杆菌介导的茎尖转基因方法的出现使得转基因技术 有了大突破。茎尖不定芽方法与组培方法相比较，要求环境低、周期短、效率高，可以在较短 时期内获得大量的植株，对植物功能基因组的研究意义重大。
[0005] 在西瓜遗传转化过程中，从外植体的选择，到染菌除菌、褐化、继代、筛选剂等各个 环节也都影响最终的转化效率等。与其他方法相比，茎尖不定芽转基因方法最大限度的保 持了甜瓜植株的完整性，依赖其自身植株的正常生长，考虑根对激素等敏感性问题，要注意 激素的配比情况，从而达到获得转化植株的目的，整个转化过程脱离了植物组织培养条件 下各种因素的限制。

【发明内容】

[0006] 本发明要解决现有西瓜繁殖技术存在再生周期长、基因型限制大的技术问题;而 提供了一种西瓜的快速繁殖的方法。
[0007] 为解决上述技术问题，本发明中一种西瓜的快速繁殖的方法是由下述步骤完成 的：
[0008] 步骤一、西瓜种子经消毒后浸泡，再播种于营养钵中，待子叶未展开前，去除顶顶 芽及侧芽；
[0009] 步骤二、将诱导液滴加两片子叶的连接处，然后培养至直到西瓜茎尖生长点分化 处膨大出不定芽为止；
[0010]步骤三、将步骤二获得幼苗进行暗培养1~2天；
[0011] 步骤四，然后光照培养至不定芽丛长出后，转移到伸长培养基中；
[0012] 步骤五、待不定芽伸长(2.5~3.5)cm，去除不定芽后插到生根培养基中培养，获得 再生植株；
[0013 ]步骤六、驯化再生植株，获得西瓜再生苗。
[0014] 步骤一中西瓜种子浸泡是将饱满的西瓜种子在（55~60) °C水中浸泡，并不断搅 拌，至水温为室温，室温下浸泡12~24h。
[0015] 步骤二中诱导液由l/2MS+0.5mg/L6-BA(6苄基腺嘌呤）+0.05%表面活性剂 5比耶1'-1^77，？!1值为5.7。
[0016] 步骤三暗黑培养是置于25~26°C、黑暗、湿度为80%~90%的条件下培养。
[0017] 步骤四中光照培养:25°C，光照16h/d，黑暗8h/d，光照强度为20001x。
[0018] 步骤四中所述伸长培养基的组成为:MS+0 · 05mg/LBA+0 · Olmg/IAA+7 · 5g/L琼脂+ 3(^/1鹿糖4田直5.8。
[0019] 步骤五中所述生根培养基的组成为:MS+0 · lmg/LIAA+7 · 5g/lJ京脂+30g/L蔗糖，pH 值5·8〇
[0020] 步骤六中将生根的西瓜苗取出，修剪后栽植到营养土中驯化;所述营养土是由蛭 石与草炭按1:1质量比混合而成的。
[0021] 本发明方法的基因型限制小，整个再生周期短，从植株播种到收获种子，只需3-4 个月。
【附图说明】
[0022] 图1是诱导剂滴加位置示意图，图1中箭头所指的是滴加位置，1表示子叶；
[0023]图2是【具体实施方式】一中步骤一处理后；
[0024]图3是【具体实施方式】一中去除胚子叶前端和胚根部分；
[0025]图4是【具体实施方式】一中步骤二培养后；
[0026]图5是对比例中1/2MS培养基中培养；
[0027]图6是对比例中组织培养；
[0028] 图7是【具体实施方式】一中再生植株的移载成活。
【具体实施方式】
【具体实施方式】 [0029] 一：本实施方式中一种西瓜的快速繁殖的方法是由下述步骤完成 的:步骤一、选取西瓜品系100粒饱满的种子Μ-2,在60°C水中浸泡，并不断搅拌，至水温为室 温，再在室温下浸泡12h，播种营养钵中，暗培养至50 %种子露白后光照培养5天，待子叶未 展开前，用刀片小心去除顶顶芽及侧芽(如图2);
[0030] 暗黑培养是置于25°C、黑暗、湿度为90 %的条件下培养;光照培养:25°C，光照16h/ d，黑暗8h/d，光照强度为20001x。
[0031] 步骤二、将诱导液滴加两片子叶的连接处(如图1所示），然后培养至直到西瓜茎尖 生长点分化处膨大出不定芽为止(图3);
[0032]诱导液由 l/2MS+1.0mg/L6-BA(6 苄基腺嘌呤）+0.05%表面活性剂310^1'-1^77，？!1 值为5.7。
[0033]步骤三、将步骤二获得幼苗进行暗培养1~2天；
[0034]暗黑培养是置于25°C、黑暗、湿度为90%的条件下培养。
[0035]步骤四，然后光照培养至不定芽丛长出后，转移到伸长培养基中（图4);
[0036] 光照培养:25°C，光照16h/d，黑暗8h/d，光照强度为20001x;所述伸长培养基的组 成为:MS+0 · 05mg/LBA+0 · 0 lmg/LIAA+7 · 5g/L 琼脂+30g/L 蔗糖，pH值5 · 8。
[0037]步骤五、待不定芽伸长3.0cm，去除不定芽后插到生根培养基中培养，获得再生植 株(图5);
[0038]所述生根培养基的组成为:MS+0· lmg/LIAA+7 · 5g/L琼脂+30g/L蔗糖，pH值5·8。
[0039] 步骤六、将生根的西瓜苗取出，修剪后栽植到营养土（以质量计，蛭石:草炭= 1:1) 中驯化，获得西瓜再生苗，2周后与实生苗长势相同（图7)。
[0040] 采用下述试验验证发明效果：
[0041] 试验一、不同西瓜品种不定芽诱导的影响
[0042] 诱导液由 l/2MS+1.0mg/L6-BA(6 苄基腺嘌呤）+0.05%表面活性剂310^1'-1^77，？!1 值为5.7。
[0043]处理方法:每个处理设3次重复，每次重复10个外植体。培养条件:温度25°C，光照 16h/d，黑暗8h/d，光照强度为20001x。每7~10d继代一次，30d后统计不定芽数目，计算再生 频率和每外植体再生芽数。
[0044] 结果如表1所示：
[0045] 表1不同基因型萌发率和分化率比较
[0046]
[0047] 由表1可知，本申请的诱导剂配方对不同品种的西瓜均有效果
[0048] 试验二、不同诱导剂不定芽诱导的影响
[0049] 采用不同诱导剂对西瓜W-1品种进行处理，处理方法同试验一，不同诱导剂的配方 如表2所述，结果见表3。
[0050] 表2不同诱导剂配方表
[0051]
[0052] 表3不同激素浓度产生不定芽数目的比较(W-1品种）
[0053]
[0054] 由表3可知，配方3诱导剂(即【具体实施方式】一所述的诱导剂)的效果最佳。
[0055] 试验三、不同繁殖方法子叶节组织培养试验
[0056]对比例：西瓜繁殖方法的步骤如下：
[0057] (1)取材灭菌，将西瓜种子剥去壳后。用70 %酒精灭菌30s，再用0.05 %升汞消毒10 分钟，在超净工作台上用灭菌水洗3 - 4次。每次泡1分钟，接种到1/2MS培养基中，获得多个 苗，5天后（图5)，获得无菌苗，然后用刀片去除胚子叶前端，接种到启动培养基中。
[0058] (2)启动培养，将灭菌后切好的胚块放在启动培养基中培养。首先在28 °C下暗培养 2d，然后至人工气候箱培养，培养条件为白天28°C，晚上25°C，黑暗8h/d，光照16h/d，光照强 度为2000Lx，光照条件，培养10天。培养基组成为1/8MS+BA1.5mg/L+IAA0. lmg/L，琼脂中（其 中每升含蔗糖30g、琼脂7.5g，pH值5.8)，培养时间为10d，获得启动培养胚块(图6)。
[0059] (3)不定芽培养，将步骤(2)所得的所得的启动培养胚块均匀切成四小块，并转移 到不定芽培养基中培养，培养条件为：白天28°C，晚上25°C，黑暗8h/d，光照16h/d，光照强度 为2000Lx，培养时间为20天，获得不定芽培养胚块；
[0060] 其中不定芽培养基组成为:MS基本培养基+BA1 · 0mg/L+IAA0 · lmg/L+7 · 5g/L琼脂+ 30g/L蔗糖，pH5.8，然后转移到MS+BA1.0mg/L+IAA0. lmg/L见有不定芽丛长出后，转移到伸 长培养基中MS+0.05mg/L ΒΑ+ΙΑΑ0. lmg/L。
[0061] (4)伸长培养，将启动培养获得的胚块均匀切成四小块，转移到伸长培养基中培养 (图5)。培养条件为：白天28°C，晚上25°C，黑暗8h/d，光照16h/d，光照强度为2000Lx，培养20 天，获得伸长培养胚块。
[0062] (5)去除步骤(4)所得伸长胚块中长于3cm的不定芽并移植到生根培养基中，培养 条件为：白天28°C，晚上25°C，黑暗8h/d，光照16h/d，光照强度为2000Lx光照条件，培养10 天，获得再生植株；
[0063]所述生根培养基，组成是:MS基本培养基+ΙΑΑ0 · lmg/L+7 · 5g/L琼脂+30g/L蔗糖， pH5.8〇
[0064] (6)再生植株驯化，将生根的西瓜苗取出，适当修剪，然后栽植到营养土蛭石:草炭 =1:1中，注意保温保湿，2周后与实生苗长势相同。
[0065] 对【具体实施方式】一和对比例所提供的方法的效果进行了测定。对西瓜再生植株培 育过程中，繁殖系数、再生频率、外植体再生芽数及培植周期进行了测定和统计，结果见表 1〇
[0066] 表1不同方法培植再生植株的效果
[0067]
[0068] 从表1可知，本发明所提供的方法在繁殖系数、再生频率及外植体再生芽数方面明 显优于对比例，而培植周期却比传统方法短13天。
【主权项】
1. 一种西瓜的快速繁殖的方法，其特征在于该繁殖方法是由下述步骤完成的： 步骤一、西瓜种子经消毒后浸泡，再播种于营养钵中，待子叶未展开前，去除顶顶芽及 侦U芽； 步骤二、将诱导液滴加两片子叶的连接处，然后培养至直到西瓜茎尖生长点分化处膨 大出不定芽为止； 步骤三、将步骤二获得幼苗进行暗培养1~2天； 步骤四，然后光照培养至不定芽丛长出后，转移到伸长培养基中； 步骤五、待不定芽伸长(2.5~3.5)cm，去除不定芽后插到生根培养基中培养，获得再生 植株； 步骤六、驯化再生植株，获得西瓜再生苗。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤一中西瓜种子浸泡是将饱满的西瓜种 子在(55~60)°C水中浸泡，并不断搅拌，至水温为室温，室温下浸泡12~24h。3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤二中诱导液由1/2MS+0.5mg/L6-BA+ 0.05 % 表面活性剂SILWET-L77，pH 值为5.7。4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤三暗黑培养是置于25~26°C、黑暗、湿 度为80 %~90 %的条件下培养。5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤四中光照培养:25°C，光照16h/d，黑暗 8h/d，光照强度为20001x。6. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤四中所述伸长培养基的组成为:MS+ 0 · 05mg/LBA+0 · Olmg/IAA+7 · 5g/L 琼脂+30g/L 蔗糖，pH值5 · 8。7. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤五中所述生根培养基的组成为:MS+ 0. lmg/LIAA+7.5g/L琼脂+30g/L蔗糖，pH值5.8。8. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤六中将生根的西瓜苗取出，修剪后栽植 到营养土中驯化。9. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于营养土是由蛭石与草炭按1:1质量比混合而 成的。
【文档编号】A01H4/00GK106035082SQ201610381713
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年5月27日
【发明人】张慧君, 宋运贤, 杜雪玲
【申请人】淮北师范大学

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