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利用西瓜种子检测黄瓜绿斑驳花叶病毒

来源：花匠小妙招时间：2025-05-09 09:48

利用西瓜种子检测黄瓜绿斑驳花叶病毒
肖璐李玲唐炎英戴思慧王军辉刘泽发孙小武摘要:以疑似感染黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)的西瓜植株上收取的种泳,用凝胶成像系统检测拍照。
检测结果的确定
为进一步确定扩增条带是否为黄瓜绿斑驳花叶病毒CP基因某一片断,将PCR目的电泳条带进行回收,操作过程参照试剂盒说明书。回收的PCR产物与PMD18-T连接,连接产物转化大肠杆菌,用Amp抗性培养基法进行蓝白斑筛选,阳性克隆经菌落PCR确认后将菌液送交上海生工测序,对测定的序列提交genebank进行blast比较。
2 结果与分析
疑似感病植株症状观察
疑似感病植株种植于大棚内,整个大棚内的植株均有相同症状发生(图1)。其症状表现为:全株性或系统性特征,叶片产生轻微的浅黄色斑纹,果实成熟后剖开观察病果呈暗花红色水瓤样。与其他没有症状大棚的植株比较,疑似感病植株明显
较矮。
材料带毒检测及确定
从疑似感毒植株收获100粒种子进行RT-PCR病毒检测,以没有感病症状的西瓜植株采集的种子作阴性对照。检测结果显示,疑似感病西瓜种子均能扩增出接近500 bp大小的目标条带,而阴性对照没有扩增出条带(图2)。随机选取10个阳性进行目标条带回收及测序,将测序结果提交genebank进行blast比较。结果表明,随机选取的10个样品的目标条带测序结果相同且为黄瓜绿斑驳花叶病毒CP基因中的一个片段,因此可以确定RT-PCR可成功检测西瓜种子是否带毒。 3 结论与讨论
CGMMV是种传病毒且极易通过汁液摩擦、叶片接触、嫁接、农事操作等非介体传播[7],因此加强种子检验检疫规程制定和监管,杜绝一切带毒种子出现在田间是防止CGMMV扩散的第一道屏障。
本文研究了利用RT-PCR方法检测疑似感染CGMMV植株的种子带毒情况,在有限样本量的情况下检测种子带毒率为100%。为进一步验证此方法的准确性和实用性,应增加检测的样本量及确定能检测出单粒种子带毒的最大种子量。相比较其他检测方式,无论是从经济效益还是准确可靠性考虑,RT-PCR检测方法所具有的检测灵敏度高、简便快速及花费少等优点都使其在对CGMMV的检验检疫中具有较大的应用价值。因此,规范及标准化整个检测流程,对种子生产企业的种子安全生产具有极大的意义。
参考文献
[1] 孙小武,,确保西瓜甜瓜生产安全 [J].中国瓜菜,2011,24(1):58-59.
[2] 陈红运,赵文军,程毅,[J].植物病理学报,2006,36(4):306-309.
[3] 周玲玲,吴元华,赵秀香,[J].沈阳农业大学学报,2008, 39(4):417-422.
[4] Lee K Y, Lee B C, Park H C. Occurrence of cucumber green mottle mosaic virus disease of watermelon in Korea[J]. Korea

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