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用同工酶检测西瓜甜瓜种子纯度.pdf

来源：花匠小妙招时间：2025-05-09 09:47

本发明涉及一种检测西瓜甜瓜杂交种真实性与纯度的方法。

目前利用杂种优势来提高作物的产量、品质和抗性已在许多农作物上得到证实，其中西瓜和甜瓜的杂种优势极为明显，因此，近年来，在西瓜种植上绝大多数都是使用的杂种一代;甜瓜杂种一代的利用也在逐年迅速增加。随着经济的发展，不少奸商把一些低劣的西瓜和甜瓜种子冒充优良的杂交种推销给瓜农，使瓜农蒙受很大的经济损失。目前检测种子纯度的方法是：一般把秋天采收的杂交种带到海南岛去，利用当地气温条件通过实地种植来验证、对比杂交种子的真实性和纯度，另外，可在当地种植视测后，待隔年种植。这种方法检测浪费人工和资金，而且时间长，给瓜农带来诸多不便，影响杂交种的利用。

本发明的目的在于克服上述现有技术中地缺点，而提供一种可在实验室对西瓜甜瓜杂交种的真伪检测法。

本发明是在聚丙烯酰胺凝胶电泳技术中发现西瓜、甜瓜杂交种有杂种酶带的存在，而且在相同的生育期和相同的组织（或部位）的酶谱因品种不同而存在差异，本检验方法就是利用西瓜、甜瓜杂交种的杂种酶带的有无和酶谱的差异来辩认、对比杂交种的真实性与纯度，从而可实现在实验室检测取代在田间实地种植的检测。

本发明相比上述现有技术有如下效果：

由于可在实验室进行杂交种的检测，从播种到取样检测完毕约15-20（天），是原来时间的四分之一;可在温室完成幼苗培育，不受季节限制，随时随地都可进行育苗检测，节约了去南方实地种植的费用、人力;同时采用本法检测准确率高。

图1是本发明工艺流程图;

图2是子一代西瓜的标准酶谱图片;

图3是子一代甜瓜的标准酶谱图片;

下面将对本发明进行详述：

由工艺流图所示，以西瓜、甜瓜纯父本、母本和子一代种子（第一代杂交种）分别种植生出真叶为检验体，利用聚丙烯酰胺凝胶作电泳，经染色子一代的过氧化物酶同工酶酶谱带有偏（亲）父带和偏母带，并以该子一代的酶谱带作检测同父本、母本的杂交种酶谱带的标准。

上述纯父本、母本和子一代可在15-20℃温室里分别种植，甜瓜播种15天左右，西瓜20天左右可生出第一片真叶，以此时的幼苗为最佳取样期;将样苗洗净吸干在0-4℃下加2倍苗重的提取缓冲液研成匀浆，经2-8层药用纱布过滤，滤液在离心机上（3500-4000r/min）离心10-15min后入瓶置在冰箱中作检验体液。电泳槽上的凝胶模子，可采用市场上的标准凹型玻璃板与配套的玻璃板、有机玻璃条，可在凹型玻璃（除凹型边）一面三边上涂凡士林，粘上有机玻璃条后再粘上配套玻璃板，制成厚度为0.4-0.9mm夹层模子。模子里要注入模子高度的三分之二分离胶和3-5mm隔绝水层;其分离胶可用[A液：iNHCle（盐酸）48ml+TEMED（四甲基乙二胺）0.23ml+Tris（三羟甲基胺基甲烷）6.6g+水定溶至100ml配成PH＝8.9的溶液]∶[C液：Acr（丙烯酰胺）30.0g+Bis（甲叉双丙烯酰胺）0.8g]∶水∶E液：Per（过硫酸铵）0.56+水定溶至100ml]＝1∶2∶4∶1的容积比例配制，浓度为7.5%;其具体配制过程是将前三种按比例混合后，置抽气瓶中脱气未有气泡时止，立即加入适量per混匀后注入上述模子里聚合1h（小时）左右;聚合后除去胶面的水层再注入浓缩胶至模子口部加配套样梳，40W日光灯下光聚合30min后取出样梳。其浓缩胶可用[B液：1NHC148ml+TEMED0.46ml+Tris5.98g+水定溶至100ml配成PH＝6.7的溶液]∶[（D液：Acr10.0g+Bis2.5g+水定溶至100ml]∶水∶[F液：Ribofl（核黄素）4.0mg+水定溶至100ml]＝1∶2∶4∶1的容积比例配制，浓度为2.8%;其具体配制过程是将前三种按比例混匀脱气后加Ribofl。上述提取缓冲液可用0.3M蔗糖102.6g+0.1M氯化钾0.746g+0.05M磷酸二氢钠2.184g+0.05M磷酸氢＝钠12.89g+水定溶至1000ml来制备。

去掉样梳后，要在所形成的样孔上依次从（左）一端点1-2孔纯母本，1-3孔纯父本，余孔点纯一代（F1）的检验体液，每孔剂量点入约10-100μl，每点完一孔后要用蒸馏水冲净点样器，再点下一孔;点完后可撤去凝胶模子底边的有机玻璃条形成电泳通路，装到电泳槽上，将上、下电泳槽注满电泳液后接到电泳仪上，上槽接负极，下槽接正级，电压200-300v，电流30-40mA，电泳时间4-5h（小时）。电泳后取下凝胶模子，去掉封条，用镊子小心撬开玻璃板，将凝胶板经水冲洗下来后置染色液里5-10min（分钟），待其上酶谱带显示后，经水冲洗多次，谱带由兰色变棕色;以纯2孔母本、1-3孔父本和多孔子一代的检验体液作成的谱带为标准样谱带，鉴别种的谱带可与同父本、母本的子一代标准样谱带作对比，经分析可鉴别真伪。

电泳液可用Tris5.5g+Gly（甘氨酸）30.0g+水定溶至1000ml，同时再稀释10倍。用2g联苯胺溶于18ml冰醋酸中加水72ml，取醋酸联苯胺溶液5ml再加3%的过氧化氢2ml再加水93ml可配成本发明所用染色液。

采用本法鉴别西瓜、甜瓜杂交种的真伪，因品种多，鉴别前必须作出该品种纯父本、母本和子一代（杂交种）的酶谱带，以该子一代的酶谱带作标准谱带;因子一代的酶谱带具有父本、母本的酶谱带的特征，即具有偏父本和偏母本的子一代酶的谱带;其它鉴别种子的酶谱带与同父本、母本的子一代标准谱带作比较，经过分析，根据两种谱带是相同、近似还是有差异，经过多粒鉴别种子的酶谱带比较分析、可定出真伪。