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真菌学检验.ppt

来源：花匠小妙招时间：2025-05-06 23:59

1、真菌学检验 1 病原真菌学概论 4 真菌门接合菌亚门毛霉根霉子囊菌亚门酵母担子菌亚门鹅膏菌半知菌亚门表皮癣菌隐球菌一真菌的分类 5 二真菌与人类的关系在自然界中分布广泛约二十余万种对人致病的约150种 6 对人致病性的真菌分为病原性真菌条件致病性真菌产毒真菌致癌真菌 7 真菌是医院感染常见微生物院内感染的 7 5 15 血液感染的第四位肿瘤病人发病率为8 严重创伤烧伤病人高达16 病死率达55 70 条件致病菌感染呈上升趋势为继发性感染呼吸道皮肤消化道粘膜损伤 8 真菌 fungus 属真菌界真核细胞型微生物典型的细胞结构无根茎叶不含叶绿素腐

2、生或寄生方式摄取营养细胞壁含几丁质 chitin 纤维素有性和或无性繁殖三真菌的基本特性 9 真菌的形态特性真菌单细胞酵母型 yeast 类酵母型 yeast like 圆卵圆出芽方式繁殖新生隐球菌白假丝酵母菌多细胞霉菌型 mold 菌丝 hypha 孢子 spore 交织成团称丝状菌癣菌霉菌 10 出芽生长 11 单细胞真菌呈圆形以出芽方式繁殖芽生孢子成熟后脱落成独立个体二相性真菌 dimorphicfungus 某些真菌可因环境条件改变由一种形态转变成另一种形态在体内或含动物蛋白的培养基上37 培养时呈酵母型在普通培养基上25 28 培养时呈霉

3、菌型如球孢子菌组织胞浆菌及芽生菌 12 13 菌丝按结构可分为有隔菌丝与无隔菌丝 1 有隔菌丝大部分真菌的菌丝在一定间距见有横隔称隔膜将菌丝分成一连串的细胞菌丝中无横隔将其分段整条菌丝就是一个细胞在一个细胞内含有许多核是一种多核单细胞 2 无隔菌丝 16 孢子 spore 孢子是真菌的繁殖器官一条菌丝上可长出多个孢子在环境条件适宜时孢子又可发芽生出芽管发育成菌丝体孢子分有性孢子和无性孢子两大类有性孢子由同一菌体或不同菌体上的两个细胞融合而成无性孢子由菌丝上的细胞分化生成并不发生细胞融合包括分生孢子叶状孢子和孢子囊孢子 19 1 分生孢子 condi

4、um 由生殖菌丝末端细胞分裂或收缩形成也可在菌丝侧面出芽形成有两种大分生孢子 macrocondium 多细胞组成梭状棍棒状小分生孢子 microcondium 单细胞组成 2 叶状孢子 thallospore 芽生孢子出芽形成厚膜孢子胞浆浓缩胞壁增厚而成关节孢子菌丝胞壁增厚形成链状排列的长方形节段芽生孢子关节孢子厚膜孢子 3 孢子囊孢子 sporangiospore 菌丝末端膨大成囊状内含许多孢子 23 真菌菌落特性酵母型菌落单细胞真菌的菌落较大光滑湿润柔软边缘整齐霉菌型菌落多细胞真菌的菌落棉絮状绒毛状粉末状产生色素如皮肤癣菌 2

5、4 25 真菌感染的实验诊断 26 1 临床标本的采集临床标本的类别皮肤的角质性物质各种分泌物和排泄物血液和体液脓汁及渗出物 27 采集标本注意事项 1 采集的标本要适宜不同真菌感染应采取不同的临床标本 2 用药前采集标本 3 采集的标本量要足血液和脑脊液5ml 胸腔液20ml4 严格无菌操作 5 采集的标本立即送检 28 二真菌学检验直接镜检形态学检查是重要依据抗原的检测分离培养与鉴定核酸检测毒素检测 29 真菌标本直接检查 1 直接镜检方法简便快速 10 KOH 微加热低倍高倍镜检查有无菌丝孢子角质标本皮肤癣菌直接观察染色后观察 30 标本直接检查

6、 31 32 33 直接镜检评价阳性结果意义1 有诊断意义 2 代表组织相确定某些致病性真菌属或种 3 判断某些真菌种的致病性等 34 直接镜检局限性 1 阴性结果不能排除真菌感染 2 有假阳性结果 35 采用免疫学方法检测真菌抗原常用的方法有胶乳凝集试验 ELISA 半定量放射免疫测定法 2 抗原检测 36 3 分离培养真菌培养是目前鉴定真菌的唯一方法培养成功与否与采集的标本是否适当是否新鲜培养基的选择培养温度与时间等有关二相性真菌培养 37 常用培养基及用途 38 平皿培养只能培养生长繁殖较快的真菌大试管培养用于皮肤癣菌的培养和真菌菌种的保存玻片培养微量小培养

7、可用于真菌菌种的鉴定 39 观察菌落形态应注意 1 菌落的性质酵母菌还是霉菌 2 菌落的大小病原性真菌菌落小条件致病性真菌则大 3 菌落颜色病原性真菌色淡污染性真菌色深 4 致病性真菌菌落下沉有时使培养基开裂污染性真菌菌落不下沉很少引起培养基开裂 40 真菌鉴定全面生化反应分子生物学鉴定必要时将菌种送有关单位鉴定检验真菌常用的生化反应有糖醇类发酵试验同化碳源试验同化氮源试验或利用硝酸钾试验牛乳分解试验酚氧化酶试验明胶液化试验和脲酶试验等试验方法同细菌试验主要用于检验深部感染真菌如假丝酵母菌隐球菌等 41 分类根据侵犯的部位不同分为浅部感染真菌深部

8、感染真菌 42 浅部感染真菌 43 定义侵犯皮肤毛发指甲等角化组织分类皮肤癣真菌临床最多见表皮感染真菌皮下组织感染真菌 44 侵犯皮肤毛发指甲等角蛋白组织引起癣症发癣体癣甲癣等分三属约45种皮肤癣真菌 45 47 毛癣菌属 48 菌落蜡状开始为白色继续培养呈灰黄或深褐色皱折有大小分生孢子厚孢子表皮癣菌属 49 菌落棕黄色扁平至放射状皱折粉状或绒状反面黄褐色棒状壁光滑大分生孢子陈培养中厚孢子增多小孢子菌属 50 生长快菌落浅黄褐色粉末或绒毛状反面黄橙色梭形厚壁大分生孢子皮肤癣真菌引起癣症的特点接触传染同种皮肤癣菌可在不同部位引起病

9、变相同部位的病变也可由不同的皮肤癣菌引起如灰指甲可由毛癣菌或表皮癣菌引起 51 红色毛癣菌 52 53 甲癣 54 微生物学检验 1 标本采集 70 乙醇消毒 55 2 直接镜检 10 KOH 皮屑 25 KOH或NaOH 5 甘油指甲透明有隔有分支的菌丝及成链的关节孢子发外型感染或发内型感染 56 57 断发毛癣菌引起的发内型感染的头发疣状毛癣菌感染的大孢子发外型感染的头发犬小孢子菌引起的小孢子发外型感染的头发 58 3 分离培养与鉴定标本处理及培养皮屑甲屑和病发标本用70 乙醇处理接种在沙氏琼脂斜面 25 培养直至第四周挑菌落镜检菌丝和孢子鉴定试验如毛发穿孔

10、试验脲酶试验等 59 被石膏样毛癣菌穿孔的毛发 60 花斑癣其它浅部真菌 61 糠秕马拉色菌着色真菌 62 花瓶型分生孢子孢子丝菌 63 64 孢子丝菌深部感染真菌 65 定义能侵袭深部组织和内脏及全身的真菌主要致病菌假丝酵母菌隐球菌曲霉菌毛霉菌组织胞浆菌卡氏肺孢菌 66 一假丝酵母 Candida 俗称念珠菌有81种 11种对人致病引起女性的假丝酵母菌性阴道炎外阴炎男性念珠菌龟头炎包皮炎体弱婴儿鹅口疮假丝酵母菌性肠炎肺炎等 AIDS最常见并发症之一白假丝酵母菌皮肤黏膜感染鹅口疮 67 微生物特性圆形或卵园形出芽方式繁殖在组织内可见芽生孢子假菌丝

11、68 假菌丝 pseudohypha 指酵母菌菌种进行一连串的芽殖后长大的子细胞仍不脱落分离并继续出芽细胞成串排列在分隔处缢缩这种菌丝状的细胞串就称为假菌丝微生物特性在玉米粉培养基中可产生假菌丝和厚膜孢子 70 厚膜孢子形成试验微生物检验 1 标本直接检查 a 直接显微镜检查 G b 抗原检测 ELISA 免疫印迹c 核酸检测 PCR扩增其DNA后以分子探针检测 71 2 分离培养与鉴定沙氏培养基 25 或37 培养1 4d 可见奶油色菌落镜检可见假菌丝和芽生孢子 72 2 分离培养与鉴定芽管形成试验细菌接种在0 2 0 5ml人或动物血清 37 1 5 4h可见芽管设立

12、阴性对照 73 产色培养基 74 3 药物敏感试验对二性霉素B 5 FC敏感但对后者易耐药 4 抗体检测 ELISA 免疫酶斑点试验测抗原或用乳胶凝集对流免疫电泳试验测抗体 5 动物试验 1ml菌悬液注射兔耳静脉或0 2ml菌悬液注射鼠尾静脉观察5 7d 剖检脏器多种小脓肿即为白假丝酵母菌感染 75 二隐球菌隐球菌属 17个种 7个变种广泛分布于自然界也可存在于人的体表口腔和肠道外源性感染经呼吸道侵入侵犯肺脑脑膜也可侵犯皮肤骨和关节在国外是AIDS的最常见并发症之一是AIDS死亡的首要原因在我国已被列为乙类传染病致病物质为荚膜 76 电镜下新生隐球菌

13、的荚膜 77 微生物特性圆或卵圆形 4 6 m 有荚膜较菌体大1 3倍 78 微生物学检验 1 标本直接检查 1 直接镜检墨汁负染 PAS染色 2 抗原检测乳胶凝集试验 ELISA 单克隆抗体法 3 核酸检测 PCR探针 DNA探针 79 新生隐球菌的酵母被一个很宽的荚膜包围脑脊液的印度墨汁染色标本 80 2 分离培养与鉴定 1 分离培养沙氏培养基25 和37 2 5d观察非致病性隐球菌在37 不生长 2 鉴定 A 酚氧化酶试验棕黑色菌落B 脲酶试验培养基由黄转粉红色C 糖同化及发酵试验同化葡萄糖半乳糖蔗糖和肌醇但不发酵糖类不同化硝酸盐非致病性隐球菌不同化肌醇 81 新生隐球菌菌落粘液样新型隐球菌在血琼脂上生长发亮的表面是由于酵母形成而产生大量的荚膜多糖 82 小结 1 真菌的分类微生物学特征 2 真菌的微生物学检查主要有标本直接涂片镜检分离培养和鉴定 3 浅部感染真菌直接镜检的标本处理方法 4 深部感染真菌 1 白假丝酵母菌芽管形成试验厚膜孢子形成试验 2 隐球菌印度墨汁负染色镜检 83 思考题 1 常见致病性真菌的有哪些种类 2 常见致病性真菌的基本生物学性状及鉴别要点 3 二相性真菌芽管形成试验厚膜孢子形成试验概念 84 ThankYou