首页分享一种蝉花孢子粉的人工培养方法.pdf

一种蝉花孢子粉的人工培养方法.pdf

来源：花匠小妙招时间：2025-05-01 14:54

《一种蝉花孢子粉的人工培养方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种蝉花孢子粉的人工培养方法.pdf（9页完整版）》请在专利查询网上搜索。

1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201510626733.0 (22)申请日 2015.09.28 A01G 1/04(2006.01) (71)申请人浙江泛亚生物医药股份有限公司地址 314200 浙江省嘉兴市平湖市经济开发区新群路 1938 号 (72)发明人陈奇超孙长胜桂海龙龚倩李成褚勤芳 (74)专利代理机构北京市浩天知识产权代理事务所 ( 普通合伙 ) 11276 代理人刘云贵 (54) 发明名称一种蝉花孢子粉的人工培养方法 (57) 摘要本发明涉及一种蝉花孢子粉的人工培养方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：步骤 1，。

2、将吸湿载体与液体培养得到的菌种种子液充分接触；步骤 2，将接触种子液的吸湿载体先进行暗培养，待布满菌丝体后转为光培养；步骤 3，对孢子粉进行采收。该方法以吸湿材料为载体培养孢子粉，工艺简单、周期短、产孢量高，且孢子粉质量高，相对于现有的固体培养具有明显的优势。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请权利要求书1页说明书6页附图1页 CN 106550763 A 2017.04.05 CN 106550763 A 1/1 页 2 1.一种蝉花孢子粉的人工培养方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：步骤。

3、1，将吸湿载体与液体培养得到的菌种种子液充分接触；步骤 2，将接触种子液的吸湿载体先进行暗培养，待布满菌丝体后转为光培养；和步骤 3，对孢子粉进行采收。 2.如权利要求 1 所述的方法，其特征在于，步骤 1 所述吸湿载体为纱布、棉布、无纺布、白坯布、土布中的任意一种。 3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1所述的接触方法为将吸湿载体直接浸润在种子液中，或将种子液均匀涂布于载体上。 4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1所述种子液中加入能够增加培养基粘性的成分。 5.如权利要求 4 所述的方法，其特征在于，所述能够增加培养基粘性的成。

4、分为麦麸、黄豆粉、玉米粉、小麦粉中的任意一种或几种。 6.如权利要求 5 所述的方法，其特征在于，所述能够增加培养基粘性的成分的加入量为 1 3。 7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2培养过程中将吸湿载体置于密封环境中。 8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2暗培养过程中将吸湿载体置于密封环境中，光培养过程中将吸湿载体置于开放的环境中。 9.如权利要求 1 所述的方法，其特征在于，步骤 2 暗培养条件为温度 20 24，相对湿度 80 90 ；光培养条件为温度 23 27，相对湿度 90 95。 10.如权利要求 1 所述的方法，其特。

5、征在于，步骤 3 在对孢子粉进行采收前调整相对湿度为 55 60。权利要求书 CN 106550763 A 2 1/6 页 3 一种蝉花孢子粉的人工培养方法技术领域 0001 本发明涉及一种蝉花孢子粉的的人工培养方法，具体涉及一种以吸湿材料为载体的培养蝉花孢子粉的的培养方法。背景技术 0002 蝉花 (Isaria cicadae Miquel) 属于真菌界 (FUNGI) 的子囊菌门 (Ascomycot)、盘菌亚门 (Pezizomycotina)、粪壳菌纲 (Sordariomycetes)、肉座菌目 (Hypocreales)、虫草科(Cordycipi。

6、taceae)、棒束孢属(Isaria)，是我国名贵的中药材，是寄生在蝉(俗称 “知了” ) 上的一种虫草菌。其药用已有 1000 多年历史，是我国传统的名贵药材之一，具有多方面的药用价值。主要成分有腺苷、虫草多糖、虫草酸 ( 甘露醇 )、虫草素、尿嘧啶、甾醇、生物碱、维生素、无机盐、矿物质元素等。蝉花具有独特而广泛的功效，如改善肾功能，抗肿瘤，调节免疫系统，滋补强壮，提高细胞能力、抗疲劳，降血压、血糖，解热、镇痛、改善睡眠，改善脂质代谢，促进造血，抗真菌，抗衰老等。 0003 蝉花孢子是蝉花的繁殖器官，孢子在孕育期，集。

7、中了蝉花培养物的全部营养，由此而生的蝉花孢子粉是一种优质、特效的高营养品。蝉花孢子纯粉中，蛋白质含量高达 41.6 克，占其营养素值的近 70，是典型的高蛋白食物。孢子粉属无胆固醇食物，饱和脂肪酸含量仅达 7.04 克，且不饱和脂肪酸含量是其 1.86 倍。同时膳食纤维高达 34.35 克，是其营养素值的 1.37 倍。这对于对于防治便泌、利于减肥、预防结肠和直肠癌、促进钙吸收、降低血脂、预防冠心病有重要的作用。在孢子粉中维生素 D 的含量奇高，高达 886 微克，是其营养素 NRV 含量的 177.2 倍，维生素 D 又称钙化醇、抗佝偻病维生素，。

8、是类固醇衍生物，含环戊烷多氢菲结构。维生素 D 的功能是维持正常的钙、磷代谢，因而对骨骼的正常发育有极重要的作用，缺乏时不仅会出现软骨症，阻碍生长，还会严重影响繁殖机能。孢子粉中矿物质元素钙、钾、镁、锰、铁、锌、锰含量较高。孢子粉中氨基酸总量达 23.8，必须氨基酸占总氨基酸含量33.7，在植物蛋白中是很高的，完全可以满足人们生活的需要。且在植物蛋白中常见的几种限制性氨基酸，如 Lys( 赖氨酸 ),Thr( 苏氨酸 ),Val( 缬氨酸 ),Met( 蛋氨酸 ) 含量较高。 0004 实验研究表明，金蝉花孢子粉醇提物 ( 金蝉花孢子粉 ) 和野。

9、生金蝉花粗多糖 ( 粗多糖 ) 对体外培养的人胃癌 HGC27、人白血病 K562、 PBL985/GPD、人横纹肌肉瘤 RD、人宫颈癌 Siha、 Hela、人胰腺癌 SW1990、人胶质瘤 LN229 及人回盲肠癌 ccl-244 细胞等 9 株肿瘤细胞的增殖有一定的抑制作用。 0005 关于孢子粉的培养，现有技术是在蝉花固体培养中，通过增加光照、提高培养温度、降低培养湿度等方法来提高培养物上孢子粉的产量。培养基都是用孢梗束培养的培养基。培养方法难度大且收率低，耗时长。发明内容 0006 本发明的目的在于提供一种蝉花孢子粉的人工培养方法，该方法以吸湿材料为。

10、载说明书 CN 106550763 A 3 2/6 页 4 体培养孢子粉，工艺简单、周期短、产孢量高，且孢子粉质量高，相对于现有的固体培养具有明显的优势。 0007 本发明的目的是通过如下技术方案实现的： 0008 一种蝉花孢子粉的人工培养方法，该方法包括如下步骤： 0009 步骤 1，将吸湿载体与液体培养得到的菌种种子液充分接触； 0010 步骤 2，将接触种子液的吸湿载体先进行暗培养，待布满菌丝体后转为光培养； 0011 步骤 3，对孢子粉进行采收。 0012 进一步，步骤 1 所述吸湿载体为对种子液具有吸附功能的材料，如纱布、棉布、无纺布、。

11、白坯布、土布等。 0013 进一步，步骤 1 所述的接触方法可以是将吸湿载体直接浸润在种子液中，也可以是将种子液均匀涂布于载体上。 0014 进一步，步骤 1 所述种子液中加入麦麸、黄豆粉、玉米粉、小麦粉等能够增加培养基粘性的成分；更进一步，其加入量为 1 3 (w/v)。 0015 进一步，步骤 2 培养过程中将吸湿载体置于密封环境中。 0016 进一步，步骤 2 暗培养过程中将吸湿载体置于密封环境中，光培养过程中将吸湿载体置于开放的环境中。 0017 进一步，步骤 2 培养过程中将吸湿载体置于培养架上，培养架层高 15 18cm。 0018 进一步，步。

12、骤 2 暗培养条件为温度 20 24，相对湿度 80 90；光培养条件为温度 23 27，相对湿度 90 95。 0019 进一步，步骤 3 在对孢子粉进行采收前调整相对湿度为 55 60。 0020 进一步，步骤 3 在孢子粉采收时将载体装入塑料袋中抖落孢子并收集，以防止孢子扩散继而污染环境。 0021 进一步，步骤 1 所述液体培养包括摇瓶培养、种子罐培养、发酵罐培养中的任一一种或几种方法；所述液体培养的培养基为蝉花培养过程中常用的液体培养基，如马铃薯 - 蔗糖 - 琼脂培养基 (PSA)、马铃薯 - 葡萄糖 - 琼脂培养基 (PDA)、马铃薯 - 葡萄。

13、糖 - 水培养基 (PSB)、酵母浸出粉 - 复合氨基酸 - 白砂糖培养基 (SAAY)、酵母浸出粉 - 白砂糖 - 大豆水解蛋白培养基等；优选酵母浸出粉 - 复合氨基酸 - 白砂糖培养基 (SAAY)。 0022 本发明中所述蝉花 (Isaria cicadae Miquel) 是广布种，广泛分布在我国秦岭 - 淮河以南的 18 个省、市、区。在我国长江以南的亚热带和热带地区，且多在低洼地带及滇藏高原的金沙江、怒江、澜沧江和雅鲁藏布江等河谷地带。只要在其生长季节，每年的 6-8 月，按照一般中药材的采集方法都可采到，是现有技术中已知菌种，并可以从商业途。

14、径购买获得。本发明实施例采用 CN102851353A 公开的蝉拟青霉菌株 Paecilomyces cicadae(Miq.)Samson，已于 2009 年 11 月 18 日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 ( 简称 CGMCC) 注册保藏，保藏号为 CGMCC No.3453。 0023 本发明的有益效果： 0024 1、工艺简单，节能、节材。关于孢子粉的培养，现有技术采用孢梗束培养的固体培养基，通过增加光照和提高培养温度来提高孢梗束上孢子粉的产量，该方法需要制备固体培养基，且需要增加光照和培养温度，工艺复杂，成品高，难度大。本发明方法将吸。

15、湿载体直接与种子液接触，无需制备固体培养基，无需增加光照和温度，工艺简单，大大减少了能耗。说明书 CN 106550763 A 4 3/6 页 5 0025 2、培养周期短。现有技术通过固体培养方法，在转为光培养后 20 天才能产生孢子，而本发明方法转为光培养后仅 3 5 天孢子就能布满吸湿载体，大大缩短了培养周期。 0026 3、产孢量高，孢子粉质量好。在单位时间和空间内，本发明方法的产孢量明显高于现有固体培养方法，且本发明方法不影响孢子粉质量，其有效成分含量与固体培养的孢子粉相当。 0027 实验例 1 本发明方法与常规固体培养方法比较 0028 。

16、取实施例 1 液体培养得到的种子液，分别按如下三种方法培养孢子粉，比较三种方法的产孢量、培养周期以及三种方法获得的孢子粉质量。 0029 方法一：取实施例 1 液体培养得到的种子液，加入 3黄豆粉，按实施例 8 的方法进行培养； 0030 方法二：取实施例 1 液体培养得到的种子液，加入 3麦麸煮汁，按实施例 11 的方法进行培养； 0031 方法三：取实施例 1 液体培养得到的种子液，按对照实施例的方法进行培养。 0032 结果见表 1。 0033 表 1 两种培养方法比较结果 0034 培养方法方法一方法二方法三产孢量 (g/m3)/20d44830。

17、1238 固体培养周期 ( 天 ) 5520 蛋白质 (g)45.3343.2041.6 膳食纤维 (g)36.0034.5734.35 维生素 D(g)890870886 氨基酸总量 ( )24.023.923.8 0035 方法一、二为本发明采用纱布培养，方法三为采用固体培养基进行培养，通过比较可以看出，在菌种来源和培养条件均相同的情况下： 0036 1、从培养周期看，方法一、二仅为 5 天，而方法三为 20 天，本发明方法相对于现有固体培养方法培养周期明显缩短； 0037 2、从产孢量看，在单位时间(20天)和单位空间(m3)内，方法一、二分别为448g。

18、和 301g，方法三为 238g，本发明方法明显高于现有固体培养方法； 0038 3、从孢子粉质量看，不同方法培养得到的孢子粉其蛋白质、膳食纤维、维生素 D 和氨基酸含量均无显著差异，说明本发明方法培养的孢子粉质量与现有固体培养方法相当。 0039 综上所述，本发明工艺简单、周期短、产孢量高，且孢子粉质量高，相对于现有的固体培养具有明显的优势。附图说明说明书 CN 106550763 A 5 4/6 页 6 0040 图 1 吸湿载体 0041 图 2 培养网 0042 图 3 于培养架上密封环境下暗培养 0043 图 4 于培养架上开放环境下光培养具体。

19、实施方式 0044 以下实例中，培养室地面喷洒 25新洁尔灭，臭氧消毒 30min。实验材料全部灭菌，包括无菌服，纱布，燕尾夹，不锈钢桶，塑料袋，培养网等。 0045 实施例 1 液体培养 0046 培养基配方：酵母粉浸出粉 0.5，复合氨基酸 1，白砂糖 3.5，余量补水至 100 ； 0047 培养方法：摇瓶培养；培养条件为温度22、 150转/分摇床中培养72h ；待培养液呈紫红色或出现小米粒状的小菌丝球时停止培养，得到种子液。 0048 实施例 2 液体培养 0049 培养基配方与培养方法同实施例 1，区别在于在培养得到的种子液中加入 3的。

20、麦麸煮汁。 0050 实施例 3 液体培养 0051 培养基配方与培养方法同实施例 1，区别在于在培养得到的种子液中加入 3黄豆粉。 0052 实施例 4 液体培养 0053 培养基配方与培养方法同实施例 1，区别在于在培养得到的种子液中加入 2的麦麸煮汁。 0054 实施例 5 液体培养 0055 培养基配方与培养方法同实施例 1，区别在于在培养得到的种子液中加入 1的麦麸煮汁，余量补水至 100 ； 0056 培养方法：同实施例 1。 0057 实施例 6 液体培养 0058 培养基配方与培养方法同实施例 1，区别在于在培养得到的种子液中加入 1的黄豆粉，余量补水至。

21、 100 ； 0059 培养方法：同实施例 1。 0060 实施例 7 液体培养 0061 培养基配方：酵母浸出粉 3，白砂糖 3，大豆水解蛋白 0.5余量补水至 100； 0062 培养方法：同实施例 1，在培养得到的种子液中加入 3的小麦粉。 0063 实施例 8 孢子粉培养方法 0064 步骤1，将实施例17任一的种子液倒入不锈钢桶，用三层纱布载体(如图1)充分浸润，稍作沥干，置于培养网上 ( 见图 2) ； 0065 步骤 2 ：暗培养：将培养网放置于塑料袋中，用燕尾夹封口，然后置于层高为 15cm 左右的培养架上 ( 每 1m 的高度可置放 6 。

22、层 )，于暗室中进行暗培养 ( 见图 3)，培养温度 22，湿度 85 ；待菌丝布满纱布载体时结束暗培养 (3-4 天 ) ；说明书 CN 106550763 A 6 5/6 页 7 0066 光培养：将培养网从塑料袋中移出，直接置于培养架上 ( 即载体上下两面均与空气接触 )，转为光培养 ( 见图 4)，培养温度 25，湿度 95 ；待孢子布满培养物时结束培养 (3-5 天 )。 0067 步骤 3，采收：在采收前一天将光培养湿度 95调至 60，以让其自然干燥；在百级层流罩下用小刷子收获孢子粉。 0068 实施例 9 孢子粉培养方法 0069 步。

23、骤 1、 3 同实施例 8，区别仅在于步骤 2 ： 0070 步骤 2 ：暗培养：将培养网放置于塑料袋中，用燕尾夹封口，置于暗室中进行暗培养，培养温度 22，湿度 85 ；待菌丝布满纱布载体时结束暗培养 (3-4 天 ) ； 0071 光培养：将培养网从塑料袋中移出置于培养盘中 ( 即仅载体上表面与空气接触 )，转为光培养，培养温度 25，湿度 95 ；待孢子布满培养物时结束培养 (3-5 天 )。 0072 实施例 10 孢子粉培养方法 0073 步骤 1、 3 同实施例 8，区别仅在于步骤 2 ： 0074 步骤 2，暗培养：将培养网放置于塑料袋中，。

24、用燕尾夹封口，置于暗室中进行暗培养，培养温度 22，湿度 85 ；待菌丝布满纱布载体时结束暗培养 (3-4 天 ) ； 0075 光培养：转为光培养，培养温度 25，湿度 95 ；待孢子布满培养物时结束培养 (3-5 天 )。 0076 实施例 11 孢子粉培养方法 0077 步骤 1、 3 同实施例 8，区别仅在于步骤 2 ： 0078 步骤 2，暗培养：将培养网置于暗室中进行暗培养，培养温度 22，湿度 85；待菌丝布满纱布载体时结束暗培养 (3-4 天 ) ； 0079 光培养：转为光培养，培养温度 25，湿度 95 ；待孢子布满培养物时结。

25、束培养 (3-5 天 )。 0080 实施例 12 孢子粉培养方法 0081 步骤 1 3 同实施例 8，区别仅在于将纱布替换为棉布。 0082 实施例 13 孢子粉培养方法 0083 步骤 1 3 同实施例 8，区别仅在于将纱布替换为无纺布。 0084 实施例 14 孢子粉培养方法 0085 步骤 1 3 同实施例 8，区别仅在于步骤 1 将种子液涂布于纱布上。 0086 对照实施例孢子粉培养方法 0087 液体培养基及培养方法均同实施例1。固体培养基为小麦，按照不同规格容器进行分装 ( 乐扣盒装 0.33 公斤，方盒装 0.5 公斤 )，加水量为 1 ： 1.2， 121。

26、灭菌 30 分钟，自然冷却。冷却后接种 ( 接入实施例 1 的种子液 )，接种量为 10，在 25，湿度 95左右的条件下光培养 20 天。待孢子成熟后干燥收获。 0088 不同培养方法的产孢量 0089 液体培养方法孢子粉培养方法产孢量 g/m3 实施例 1对照实施例238 说明书 CN 106550763 A 7 6/6 页 8 实施例 2对照实施例217 实施例 1实施例 11245 实施例 2实施例 11301 实施例 3实施例 11302 实施例 3实施例 10326 实施例 3实施例 9374 实施例 3实施例 8448 实施例 3实施例 12439 实施例 3实施例 13447 实施例 3实施例 14464 实施例 7实施例 14425 说明书 CN 106550763 A 8 1/1 页 9 图 1 图 2 图 3图 4 说明书附图 CN 106550763 A 9 。