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用高效液相色谱技术测定蕨类植物—翠云草花色素苷和叶绿素种类和含量，方案是否可行？

来源：花匠小妙招时间：2025-04-29 04:55

[求助] 用高效液相色谱技术测定蕨类植物—翠云草花色素苷和叶绿素种类和含量，方案是否可行？

花色素苷：采集翠云草叶片，用流水冲洗干净，真空冷冻干燥72小时研磨成粉备用。称取1.00 g 粉末，用体积分数为1%的甲醇盐酸（97.0 mL 甲醇+ 3.0 mL体积分数为36%的盐酸）萃取，定容至25.0 mL，完全遮光后放置在4 ℃冰箱冷藏室中萃取24 h，将上清转入新的容器中4℃遮光保存，再向残渣中加入25.0 mL甲醇盐酸，相同条件下萃取12 h，重复该操作2次，将3次萃取液的上清合并，旋转蒸发仪浓缩后用甲醇盐酸定容至25.0 mL。{吸取600.0 μL甲醇盐酸萃取液与750.0 μL 的2.0 mol·L－1 盐酸混匀，恒温（95 ℃）加热45 min。加热后迅速冰上冷却，加入370.0μL异戊醇剧烈震荡混匀，4 ℃下6 000 r min－1 离心5 min，待混合液分层后，将上相移至新的离心管中用于检测。}
注：括号内为水解过程
叶绿素：先称取0.50 g 粉末，再用体积分数为90%丙酮溶液［V（丙酮）∶V（乙醇）＝9∶1］萃取并定容至20.0 mL，然后放置于4℃冰箱冷藏室萃取48 h。
高效液相色谱—二级管阵列检测法（HPLC-DAD）：所用高效液相色谱仪（L-2000）选用L-2455 型二极管阵列检测器进行检测。仪器参数： C18 柱，柱温40℃，进样量10.0μL，流速0.50 mL·min－1，检测波长为280 nm， 520 nm， 535 nm， 540 nm。流动相参数： A 为体积分数为0.05%的甲酸水溶液， B为色谱级乙腈。梯度洗脱程序为： 0～40 min， A 95%～0， B 5%～100%； 40~60 min， A 0，B100%。