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不同染色方法制作X染色质标本比较.doc 全文免费

来源：花匠小妙招时间：2025-01-26 15:36

不同染色方法制作X染色质标本比较

不同染色方法制作X染色质标本的比较　　摘要:采用女性口腔粘膜上皮细胞作为X染色质标本的制片材料,分别用姬姆萨染色法、甲苯胺蓝染色法、冰醋酸龙胆紫染色法、改良苯酚品红染色法进行染色,对实验结果进行比较发现姬姆萨染色法最为理想,其染色效果最清晰,且阳性率最高。　　关键词:X染色质姬姆萨染色法阳性率　　　　TheComparisonBetweenDifferentMethodsForMakingXChromatinSamples 　　LIU XingJI Ke-ping 　　Department of Cell Biology , Zunyi Medical College(Zhuhai Campus), Zhuhai 519041, China 　　Abstract : Using female oral mucosal epithelial cells to make X chromatin samples, four kinds of staining methods including Giemsa staining method, toluidine blue staining method, acetic acid crystal violet staining method and modified carbol fuchsin staining method were used to stain X chromatin samples,comparison of experimental results was found that Giemsa staining method is the best staining method.Dyeing effect of this approach is the most distinct and is the highest. 　　Key words: X chromatin ;Giemsa;The positive rate 　　　　X染色质是一呈异固缩状态、失去转录活性的X染色体[1],又称Barr小体,位于女性有丝分裂间期核膜边缘的浓染小体,直径约1～1.5um, 可呈平凸形、半圆形、圆形、扁平形或三角形等,是确定个体细胞中X染色体数目的相关指标[2]。制备X染色体的方法很多,作者以文献中的不同染色方法对女性口腔粘膜细胞进行染色,所得实验效果显示X染色质阳性率存在较大差异。实验结果显示各种染色方法都可以观察到X染色质,其中姬姆萨染色法的效果最佳。　　　　1 材料与方法　　　　1.1 配制各种染液　　1.1.1 姬姆萨染液的配制[3] 姬姆萨0.5g ,甘油33ml,甲醇33ml。先将姬姆萨粉溶于少量甘油中,用研钵充分研碎,直至看不见颗粒为止,再加入剩余的甘油,置于56℃温箱中2h,然后加入甲醇混匀,配成原液,于棕色瓶中密封保存备用。临用时加入pH为6.8的磷酸缓冲液(V:V=9:1)配成姬姆萨染色液。　　1.1.2 甲苯胺蓝的配制[4] 甲苯胺蓝0.2g,用少量丙酮溶液使之溶解,然后再加入双蒸水100ml即可。　　1.1.3 冰醋酸龙胆紫的配制[5] 取30ml冰醋酸放入三角瓶中,并在瓶口处加一棉塞,用酒精灯加热至微沸,加入龙胆紫1g使其溶解,冷却后加蒸馏水70ml,振荡后静置24h,过滤到棕色瓶中备用。染色液临时配用效果较好。　　1.1.4 改良苯酚品红的配制[6] 取碱性品红3g溶于100ml70%酒精中配成A液,取10mlA液加入90ml 5%苯酚水溶液中配成B液,量取45ml B液加入6ml冰醋酸和6ml 37%福尔马林配成C液,取10mlC液加入90ml 45%醋酸和1g山梨醇即可。　　1.2 实验方法　　1.2.1 获取实验材料　　健康女性4人,年龄20～22岁,清水漱口3～5次,用木质牙签在颊部内侧呈45度角刮取口腔粘膜上皮细胞,力度适中,每刮一次轻轻转动牙签后再刮取,直至肉眼可观察到白色粘状物,然后将材料分散平铺在洁净的载玻片上,自然干燥。　　1.2.2 实验步骤　　(1)固定将1.2.1制作好的片子置于临时配制的固定液(甲醇:冰醋酸=3:1)中固定10min,冲洗晾干。　　(2)染色　　姬姆萨染色[4]:将固定好的片子置于5mol/LHCL中水解20min,冲洗晾干,姬姆萨染色10min,冲洗晾干后镜检。　　甲苯胺蓝染色:将固定好的片子置于5mol/LHCL中水解20min,冲洗晾干,甲苯胺蓝染色10min,冲洗晾干后镜检。　　冰醋酸龙胆紫染色[5]:将固定好的片子置于冰醋酸龙胆紫中染色1~2min,冲洗晾干后镜检。　　改良苯酚品红染色:将