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一种鉴别金银花和山银花的方法

来源：花匠小妙招时间：2025-01-11 06:43

一种鉴别金银花和山银花的方法

本发明属于中药材来源品种鉴定，涉及一种鉴别金银花和山银花的方法。

背景技术：

1、金银花与山银花为忍冬科不同植物的干燥花蕾或带出开的花，两者形态相似，难以区分。1977版《中华人民共和国药典》将山银花纳入金银花项下。由于山银花含有较多的皂苷类成分，在用于生产中药注射剂时可能存在溶血等安全风险。在2005版《中华人民共和国药典》将两者分开记载，2010版药典更是将两者来源进行了明确的区分，仅有忍冬(lonicerajaponica thunb.)的干燥花蕾或带初开的花才可成为金银花，灰毡毛忍冬(lonicera macranthoides hand.-mazz.)、红腺忍冬(lonicera hypoglauca miq.)、华南忍冬(lonicera confusa dc.)或黄褐毛忍冬(lonicera fulvoto-mentosa hsu ets.c.cheng)均为山银花。尽管2015版、2020版药典也对两者进行了分列，但由于金银花市场需求大价格较贵，市场上经常出现山银花假冒金银花销售的情况。

2、目前，金银花和山银花的鉴别方法有以下几种：(1)外观形态鉴别法，该方法依赖经验、主观性大，尤其是对于市场上两者混合品或粉碎状态无法鉴别；(2)dna分子鉴定法，技术复杂、环境为万级实验，要求高，成本高，检验周期长，影响因素多导致重复性差；(3)采用高效液相色谱和液质联用色谱联用，对金银花和山银花中的有效成分为指标进行鉴定，但是该方法操作相对复杂，耗时相对较长，对于仪器设备要求相对较高，成本较高，普适性受限。因此，探寻一种高效准确的鉴别金银花和山银花的方法至关重要。

技术实现思路

1、针对现有技术中存在的问题，本发明提出了一种鉴别金银花和山银花的方法。

2、本发明所述的一种鉴别金银花和山银花的方法是采用气相色谱测定并计算待测物多糖中葡萄糖峰面积与半乳糖峰面积的比值；当比值大于1，待测物为金银花；当比值小于1，待测物为山银花。

3、将对照品衍生物溶液与待测物多糖衍生物溶液，注入气相色谱仪，得到葡萄糖峰面积与半乳糖峰面积的比值。

4、所述的气相色谱条件为：色谱柱：hp-55％phenyl methyl siloxane，30.0m×320μm×0.25μm；检测器：火焰离子化检测器fid；进样口温度：250℃；检测器温度：300℃；升温程序：初始温度140℃，保持3min，以1℃/min速度升温至170℃，保持3min，最后以2℃/min速度升温至210℃，保持1min，后运行温度250℃，保持5min；载气：氮气；氮气流量：1.2ml/min；氢气流量：40ml/min；空气流量：400ml/min；进样量：5.0μl；进样方式：分流进样；分流比：60:1。

5、待测物多糖的获得过程为：称取待测物，加入体积分数为80％乙醇回流脱脂，趁热抽滤，将滤渣连同滤纸，加入蒸馏水，回流提取，趁热抽滤，浓缩，醇沉，离心，真空干燥，得待测物多糖。

6、对照品衍生物溶液的制备过程为：取干燥至恒重的鼠李糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖各3mg，精密称定，加入25mg盐酸羟胺、2.4ml吡啶，90℃搅拌反应30min，取出后冷却至室温，加6.4ml乙酸酐，90℃下乙酰化反应30min，加入3mg肌醇六乙酸酯，过0.45μm滤膜，定容，即得。

7、待测物多糖衍生物溶液的制备过程为：取待测物多糖10mg，精密称定，加入6ml3mol/ltfa于110℃下水解5h，旋蒸除去tfa，真空干燥12h，加5mg盐酸羟胺、0.3ml吡啶，90℃石蜡浴搅拌反应30min，冷却后，加0.8ml乙酸酐，90℃反应30min，冷却后，加入0.6mg肌醇六乙酸酯，过0.45μm滤膜，定容，即得。

8、与现有技术相比，本发明采用的衍生物制备简便，大大缩短了实验准备时间，提高了工作效率；试剂易得，降低了实验成本，使得该技术更加普及和实用；可实现对五碳糖和六碳糖的较好检测，结果也更加准确可靠，为相关领域的研究提供了有力支持。

技术特征：

1.一种鉴别金银花和山银花的方法，其特征在于，采用气相色谱测定并计算待测物多糖中葡萄糖峰面积与半乳糖峰面积的比值；当比值大于1，待测物为金银花；当比值小于1，待测物为山银花。

2.根据权利要求1所述的一种鉴别金银花和山银花的方法，其特征在于，将对照品衍生物溶液与待测物多糖衍生物溶液，注入气相色谱仪，得到葡萄糖峰面积与半乳糖峰面积的比值。

3.根据权利要求1所述的一种鉴别金银花和山银花的方法，其特征在于，所述的气相色谱条件为：色谱柱：hp-55％phenyl methyl siloxane，30.0m×320μm×0.25μm；检测器：火焰离子化检测器fid；进样口温度：250℃；检测器温度：300℃；升温程序：初始温度140℃，保持3min，以1℃/min速度升温至170℃，保持3min，最后以2℃/min速度升温至210℃，保持1min，后运行温度250℃，保持5min；载气：氮气；氮气流量：1.2ml/min；氢气流量：40ml/min；空气流量：400ml/min；进样量：5.0μl；进样方式：分流进样；分流比：60:1。

4.根据权利要求1所述的一种鉴别金银花和山银花的方法，其特征在于，待测物多糖的获得过程为：称取待测物，加入体积分数为80％乙醇回流脱脂，趁热抽滤，将滤渣连同滤纸，加入蒸馏水，回流提取，趁热抽滤，浓缩，醇沉，离心，真空干燥，得待测物多糖。

5.根据权利要求1所述的一种鉴别金银花和山银花的方法，其特征在于，对照品衍生物溶液的制备过程为：取干燥至恒重的鼠李糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖各3mg，精密称定，加入25mg盐酸羟胺、2.4ml吡啶，90℃搅拌反应30min，取出后冷却至室温，加6.4ml乙酸酐，90℃下乙酰化反应30min，加入3mg肌醇六乙酸酯，过0.45μm滤膜，定容，即得。

6.根据权利要求1所述的一种鉴别金银花和山银花的方法，其特征在于，待测物多糖衍生物溶液的制备过程为：取待测物多糖10mg，精密称定，加入6ml 3mol/l tfa于110℃下水解5h，旋蒸除去tfa，真空干燥12h，加5mg盐酸羟胺、0.3ml吡啶，90℃石蜡浴搅拌反应30min，冷却后，加0.8ml乙酸酐，90℃反应30min，冷却后，加入0.6mg肌醇六乙酸酯，过0.45μm滤膜，定容，即得。

技术总结
本发明属于中药材来源品种鉴定技术领域，涉及一种鉴别金银花和山银花的方法。本发明采用气相色谱测定并计算待测物多糖中葡萄糖峰面积与半乳糖峰面积的比值；当比值大于1，待测物为金银花；当比值小于1，待测物为山银花。与现有技术相比，本发明采用的衍生物制备简便，大大缩短了实验准备时间，提高了工作效率；试剂易得，降低了实验成本，使得该技术更加普及和实用；可实现对五碳糖和六碳糖的较好检测，结果也更加准确可靠，为相关领域的研究提供了有力支持。

技术研发人员：刘玉红,张永清,丁洁,杨然,方忠莹,朱利豪,毛建,贾硕,周长坤
受保护的技术使用者：山东中医药大学
技术研发日：
技术公布日：2024/12/10