红掌组织培养技术体系的建立

　　为提高红掌种苗质量和繁殖效率，以其幼嫩叶片为外植体材料，比较不同灭菌处理对外植体的灭菌效果，筛选诱导叶片愈伤组织和不定芽萌发及增殖的最佳激素配比，建立红掌组织培养技术体系。

　　红掌，又名安祖花、火鹤、花烛，属天南星科花烛属多年生附生常绿草本花卉，叶大，卵形，叶基常为心形，茎可长达1m左右，节间短，具肉质气生根，原产于南美洲热带雨林.其佛焰苞及肉穗造型独特、色彩丰富、叶宽大亮绿，主要用于室内盆花栽培，花期可长达4-6个月，是花卉市场上的高档花卉之一，深受人们的青睐。

　　我国于1994年开始从国外引种红掌品种，受种源的控制，而且繁育周期长，所以种苗的价格十分昂贵。通过组织培养快速繁殖技术，不仅解决了红掌种苗繁育的技术问题，同时为今后红掌的规模化生产提供了技术保障。

　　本文以红掌幼嫩叶片为外植体，通过不同灭菌处理方法，不同激素种类、梯度水平对诱导愈伤组织、不定芽萌发、增殖以及生根进行了研究，旨在建立红掌组织培养快速繁殖技术体系，为红掌的规模化生产提供技术支持。

　　探究红掌的灭菌方法

　　本次实验的材料是红掌品种“粉冠军”幼嫩叶片。通过自来水对其冲洗一小时，沥干水分，移至超净工作台上，对其进行灭菌处理。

　　外植体灭菌

　　外植体灭菌采用6种处理方法。

　　首先，用75%酒精浸泡30s，无菌水冲洗3次，用10%次氯酸钠溶液浸泡10min，无菌水冲洗5次；

　　第二种方法是用75%酒精浸泡30s，无菌水冲洗3次，用10%次氯酸钠溶液浸泡15min，无菌水冲洗5次；

　　第三种则是采用75%酒精浸泡30s，无菌水冲洗3次，用10%次氯酸钠溶液浸泡 20min，无菌水冲洗5次；

　　第四种是用75%酒精浸泡 15s，无菌水冲洗2次，用0.1%升汞溶液浸泡4min，无菌水冲洗4次；

　　第五种方法则采用75%酒精浸泡 15s，无菌水冲洗2次，用0.1%升汞溶液浸泡6min，无菌水冲洗4次；

　　最后一种方法用75%酒精浸泡 15s，无菌水冲洗2次，用0.1%升汞溶液浸泡8min，无菌水冲洗4次。

　　愈伤组织诱导

　　以MS为基本培养基，设置激素2,4-D与TDZ不同浓度组合对叶片进行诱导愈伤组织实验。

　　不定芽诱导及增殖

　　以MS为基本培养基，设置激素6-BA与NAA 不同浓度组合对愈伤组织进行不定芽诱导。一共8个处理，每个处理接种30瓶，每瓶接种5个愈伤组织，光照培养45天，统计不定芽萌发数。

　　生根培养

　　设置3种生根培养处理，将高度大于2cm的分化苗接种在生根培养基中。每个处理20瓶，每瓶15株，三次重复，光照培养30d 后统计生根情况。

　　不同灭菌处理对外植体的影响

　　本实验选择红掌品种“粉冠军”刚展开 1~3d的幼嫩叶片作为外植体，采用6种消毒方法进行灭菌。研究结果表明（见表1），处理②和⑤灭菌效果最好，成活率分别达到了 82.7%和83.3%；综合成本和对环境污染的分析，红掌叶片灭菌可用处理②（用75%酒精浸泡30s，无菌水冲洗3次，用10%次氯酸钠溶液浸泡 15min，无菌水冲洗5次）进行。

　　● 外植体愈伤组织的诱导

　　取灭菌后的叶片，切成1.0cm×1.0cm大小，接种在不同激素种类、不同梯度水平的诱导培养基上，培养30d后，相同培养基转接1次，培养至60d 时观察结果。

　　实验结果表明（见表2），采用 2,4-D 与 TDZ 组合的诱导效果均好于 2,4-D单独作用，当1.0mg/L2,4-D与0.5mg/L TDZ共同作用时，诱导效果最佳，诱导率达 92.24%。

　　将外植体诱导获得的愈伤组织切块，接种到不定芽诱导培养基中。

　　表3表明，细胞分裂素 6-BA 是诱导不定芽的关键因素，6-BA 浓度较高时不定芽数较多，处理6和7的萌发率分别为96.0%和96.7%,平均萌发芽数分别为6.1和5.9个，但芽生长较细弱。

　　当1.0 mg/L 6-BA 和0.2 mg/L NAA 共同作用时，不定芽萌发率为95.8%,平均萌发芽数为5.6个，芽生长健壮，是红掌叶片愈伤组织诱导不定芽及增殖的最佳激素配比。

　　● 生根培养

　　红掌组培苗生根较容易。选取苗高大于2cm的分化苗接种到生根培养基中进行生根诱导实验。接种10d后，小苗的基部形成白色突起，并逐渐伸长，形成明显幼根，培养至30d时记录生根情况。实验结果见表4。

　　从实验结果可以看出，处理②(1/2MS+NAA0.2mg/L+AC0.1%)诱导根效果最佳，生根率达99.0%,平均根数4.3条，平均根长2.2cm，根系较粗壮、苗生长好、叶色绿。

　　红掌幼嫩叶片的灭菌的实验总结

　　红掌幼嫩叶片的灭菌用75%酒精浸泡30s，无菌水冲洗3次，再用10%次氯酸钠溶液浸泡15min，无菌水冲洗5次，灭菌效果最好，外植体成活率为82.7%。

　　诱导叶片愈伤组织的最佳培养基为MS+2,4-D 1.0mg/L+TDZ 0.5 mg/L，诱导率达 92.24%。

　　诱导不定芽的最佳培养基为 MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L，萌发率为95.8%，平均萌发芽数为5.6个，芽生长健壮。

　　红掌组培苗生根较容易。诱导根的最佳培养基为1/2MS+NAA 0.2mg/L+AC0.1%，生根率达99.0%，平均根数4.3条，平均根长2.2cm，根系较粗壮，叶色绿，苗生长好。

文/刘克林 岳涵 贺国鑫 王瑛 方志军

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