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一种白花杜鹃组织培养的方法.pdf

来源：花匠小妙招时间：2025-01-07 18:06

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1、10申请公布号CN104054577A43申请公布日20140924CN104054577A21申请号201410323719922申请日20140704A01H4/0020060171申请人芜湖欧标农业发展有限公司地址241000安徽省芜湖市弋江区火龙岗农业高新技术开发区72发明人戴勤王冬梅李慧珍74专利代理机构北京科亿知识产权代理事务所普通合伙11350代理人汤东凤54发明名称一种白花杜鹃组织培养的方法57摘要本发明涉及一种白花杜鹃的组织培养方法，所述的方法包括1外植体的选取，2外植体消毒，3初始诱导培养，4增殖培养，5生根培养，6炼苗和移栽。采用本方法繁育白花杜鹃，可以降低生产成本，提高。

2、繁殖速度和成活率。51INTCL权利要求书2页说明书4页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书4页10申请公布号CN104054577ACN104054577A1/2页21一种白花杜鹃组织培养的方法，其特征在于所述的方法包括以下步骤1外植体的选取取当年生直径25MM的白花杜鹃枝条为外植体，剪去叶片后剪成23CM的茎段；2外植体消毒将上述茎段放入盛有自来水的20KHZ超声波清洗机中保持温度3035处理3045MIN，然后以自来水冲洗1020MIN；随后在超净工作台上以7075的酒精消毒2535秒，01升汞溶液中处理57分钟，然后以无菌水冲洗45遍，置于无菌培养皿备用。

3、；3初始诱导培养将灭菌后外植体茎段各剪去23MM，茎段按末端向下插入初始诱导培养基中培养，培养条件为光强25003000LX、光周期1014H/D,温度252；培养68D后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养1218D至新芽长出；所述的初始诱导培养基组成为MS6BA0306MG/LNAA0103MG/L；4增殖培养将步骤3新芽剪下并转接到新芽伸长和增殖培养基中，培养条件为光强25003000LX、光周期10H/D,温度252；培养20D后，至新芽长出并伸长到1CM以上；所述的培养基组成MS6BA0406MG/LNAA0205MG/LIBA0812MG/LKT0812M。

4、G/L。5生根培养将步骤4的新芽剪下，转接到生根培养基中，培养条件为光强25003000LX、光周期12H/D,温度252；培养15D后，生出新根；生根培养基的配方为1/2MSIBA0205MG/LPVP510MG/L；6炼苗和移栽将有生根的白花杜鹃幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗35D后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽装有河沙基质的苗床上，保持温度2025，湿度7080，适当遮荫即可；所述的MS培养基配方为大量元素硝酸钾KNO31900MG/L，硝酸铵NH4NO31650MG/L，磷酸二氢钾KH2PO3170MG/L，硫酸镁MGSO47H2O370MG/L；钙盐氯化钙CACL22H2O440。

5、MG/L；微量元素碘化钾KI083MG/L，硼酸H3BO362MG/L，硫酸锰MNSO44H2O223MG/L，硫酸锌ZNSO47H2O86MG/L，钼酸钠NA2MOO42H2O025MG/L，硫酸铜CUSO45H2O0025MG/L，氯化钴COCL26H2O0025MG/L；铁盐乙二胺四乙酸二钠NA2EDTA3725MG/L,硫酸亚铁FESO47H2O2785MG/L；有机酸肌醇100MG/L，甘氨酸2MG/L，盐酸硫胺素05MG/L，盐酸吡哆醇05MG/L，烟酸05MG/L；蔗糖30G/L，琼脂粉7G/L，PH为57；所述的1/2MS培养基配方为大量元素硝酸钾KNO3950MG/L，硝酸铵。

6、NH4NO3825MG/L，磷酸二氢钾KH2PO385MG/L，硫酸镁MGSO47H2O185MG/L；余同上述MS培养基；所述的6BA为6苄氨基嘌呤；所述的NAA为萘乙酸；所述的IBA为吲哚3丁酸；所述的KT为激动素；所述的PVP为聚乙烯吡咯烷酮。2根据权利要求1所述一种白花杜鹃组织培养的方法，其特征在于所述步骤3中初始诱导培养基组成为MS6BA05MG/LNAA02MG/L。3根据权利要求1所述一种白花杜鹃组织培养的方法，其特征在于所述步骤4中增殖培养用培养基为MS6BA05MG/LNAA03MG/LIBA10MG/LKT10MG/L。4根据权利权利要求书CN104054577A2/2页3。

7、要求1所述一种白花杜鹃组织培养的方法，其特征在于所述步骤6中生根用培养基为1/2MSIBA04MG/LPVP8MG/L。权利要求书CN104054577A1/4页4一种白花杜鹃组织培养的方法技术领域0001本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其是白花杜鹃组织培养技术领域。背景技术0002白花杜鹃RHODODENDRONMUCRONATUMBLGDON，为杜鹃花科植物，半常绿灌木，高13米；幼枝开展，分枝密，密被灰褐色开展的长柔毛，混生少数腺毛。幼枝、叶、花柄，子房被褐色粗伏毛或有腺毛。叶二型，叶椭圆形至椭圆状披针形，长35厘米，宽12厘米，顶端钝而有小而短尖头，基部楔形；叶上表面深绿色，疏被灰褐。

8、色贴生长糙伏毛，混生短腺毛，中脉、侧脉及细脉在上面凹陷，在下面凸出或明显可见；叶柄长24毫米，密被灰褐色扁平长糙伏毛和短腺毛。花13朵，顶生，有芳香；萼片披针形，长约15厘米，有腺毛，宿存；花冠纯白色，有时有淡蔷薇色或有条纹，宽钟状或宽漏斗形，长355厘米，5裂，裂片卵状椭圆形；雄蕊10，有时8，近基部有腺毛。蒴果长约L厘米，短于花萼。花期45月。0003本种分布于华东及日本，在日本经长期栽培后已部分引入中国；半常绿灌木。暖地为常绿。0004白花杜鹃枝干优美，花期长，为优良的园林绿化植物。0005白花杜鹃还具有较大的经济价值，常常被作为药物使用。0006目前，白花杜鹃多采用嫁接繁育来进行生产栽。

9、培，这繁育技术提高品种的纯度，保持了品种特性，但成活率较低及繁殖速度较慢，制约了白花杜鹃产业的发展。而组织培养育苗技术既可以保持种的纯度和特性，也可以降低生产成本，提高繁殖速度和成活率。0007现有技术中，尚无白花杜鹃的组织培养方法的报道。发明内容0008本发明所要解决的技术问题是提供一种白花杜鹃组织培养的方法，可实现白花杜鹃快速大量繁殖。0009为了解决上述技术问题，本发明提出下列技术方案0010一种白花杜鹃组织培养的方法，其特征在于所述的方法包括以下步骤00111外植体的选取取当年生直径25MM的白花杜鹃枝条为外植体，剪去叶片后剪成23CM的茎段；00122外植体消毒将上述茎段放入盛有自来。

10、水的20KHZ超声波清洗机中保持温度3035处理3045MIN，然后以自来水冲洗1020MIN；随后在超净工作台上以7075的酒精消毒2535秒，01升汞溶液中处理57分钟，然后以无菌水冲洗45遍，置于无菌培养皿备用；00133初始诱导培养将灭菌后外植体茎段各剪去23MM，茎段按末端向下插入初始诱导培养基中培养，培养条件为光强25003000LX、光周期1014H/D,温度252；培养68D后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养1218D至新芽长出；所述的初始诱导培养基组成为MS6BA0306MG/LNAA0103MG/L；说明书CN104054577A2/4页500。

11、144增殖培养将步骤3新芽剪下并转接到新芽伸长和增殖培养基中，培养条件为光强25003000LX、光周期10H/D,温度252；培养20D后，至新芽长出并伸长到1CM以上；所述的培养基组成MS6BA0406MG/LNAA0205MG/LIBA0812MG/LKT0812MG/L。00155生根培养将步骤4的新芽剪下，转接到生根培养基中，培养条件为光强25003000LX、光周期12H/D,温度252；培养15D后，生出新根；生根培养基的配方为1/2MSIBA0205MG/LPVP510MG/L；00166炼苗和移栽将有生根的白花杜鹃幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗35D后，取出幼苗，洗去根部培。

12、养基，移栽装有河沙基质的苗床上，保持温度2025，湿度7080，适当遮荫即可；0017所述的MS培养基配方为大量元素硝酸钾KNO31900MG/L，硝酸铵NH4NO31650MG/L，磷酸二氢钾KH2PO3170MG/L，硫酸镁MGSO47H2O370MG/L；钙盐氯化钙CACL22H2O440MG/L；微量元素碘化钾KI083MG/L，硼酸H3BO362MG/L，硫酸锰MNSO44H2O223MG/L，硫酸锌ZNSO47H2O86MG/L，钼酸钠NA2MOO42H2O025MG/L，硫酸铜CUSO45H2O0025MG/L，氯化钴COCL26H2O0025MG/L；铁盐乙二胺四乙酸二钠NA2。

13、EDTA3725MG/L,硫酸亚铁FESO47H2O2785MG/L；有机酸肌醇100MG/L，甘氨酸2MG/L，盐酸硫胺素05MG/L，盐酸吡哆醇05MG/L，烟酸05MG/L；蔗糖30G/L，琼脂粉7G/L，PH为57；0018所述的1/2MS培养基配方为大量元素硝酸钾KNO3950MG/L，硝酸铵NH4NO3825MG/L，磷酸二氢钾KH2PO385MG/L，硫酸镁MGSO47H2O185MG/L；余同上述MS培养基；0019所述的6BA为6苄氨基嘌呤；0020所述的NAA为萘乙酸；0021所述的IBA为吲哚3丁酸；0022所述的KT为激动素；0023所述的PVP为聚乙烯吡咯烷酮。002。

14、4优选的，所述步骤3中初始诱导培养基组成为MS6BA05MG/LNAA02MG/L。0025优选的，所述步骤4中分化和增殖培养用培养基为MS6BA05MG/LNAA03MG/LIBA10MG/LKT10MG/L。0026优选的，所述步骤6中生根用培养基为1/2MSIBA04MG/LPVP8MG/L。0027采用本发明繁殖白花杜鹃，可实现白花杜鹃组培苗的大量组织培养，为白花杜鹃生产栽培和品种改良奠定基础。0028为了更好的阐述技术方案，下面结合具体实施方式对本发明作进一步的说明，但本发明所要求的保护范围不限于下列实施例。具体实施方式0029实施例100301外植体的选取取当年生直径25MM的白花。

15、杜鹃枝条为外植体，剪去叶片后剪成23CM的茎段；00312外植体消毒将上述茎段放入盛有自来水的20KHZ超声波清洗中保持温度30处理30MIN，然后以自来水冲洗10MIN；随后在超净工作台上以70的酒精消毒25秒，说明书CN104054577A3/4页601升汞溶液中处理5分钟，然后以无菌水冲洗4遍，置于无菌培养皿备用；00323初始诱导培养将灭菌后外植体茎段各剪去23MM，茎段按末端向下插入初始诱导培养基中培养，培养条件为光强25003000LX、光周期1014H/D,温度252；培养8D后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养18D至新芽长出；所述的初始诱导培养基组。

16、成为MS6BA03MG/LNAA01MG/L；00334增殖培养将步骤3新芽剪下并转接到新芽伸长和增殖培养基中，培养条件为光强25003000LX、光周期10H/D,温度252；培养20D后，至新芽长出并伸长到1CM以上；所述的培养基组成MS6BA04MG/LNAA02MG/LIBA08MG/LKT08MG/L。00345生根培养将步骤4的新芽剪下，转接到生根培养基中，培养条件为光强25003000LX、光周期12H/D,温度252；培养15D后，生出新根；生根培养基的配方为1/2MSIBA02MG/LPVP5MG/L；00356炼苗和移栽将有生根的白花杜鹃幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗3D。

17、后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽装有河沙基质的苗床上，保持温度2025，湿度7080，适当遮荫即可。0036经试验，采用本实施例所育试管苗的苗床移栽成活率为823。0037实施例200381外植体的选取取当年生直径25MM的白花杜鹃枝条为外植体，剪去叶片后剪成23CM的茎段；00392外植体消毒将上述茎段放入盛有自来水的20KHZ超声波清洗中保持温度35处理45MIN，然后以自来水冲洗20MIN；随后在超净工作台上以75的酒精消毒35秒，01升汞溶液中处理7分钟，然后以无菌水冲洗5遍，置于无菌培养皿备用；00403初始诱导培养将灭菌后外植体茎段各剪去23MM，茎段按末端向下插入初始诱导培养基。

18、中培养，培养条件为光强25003000LX、光周期1014H/D,温度252；培养6D后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养12D至新芽长出；所述的初始诱导培养基组成为MS6BA06MG/LNAA03MG/L；00414增殖培养将步骤3新芽剪下并转接到新芽伸长和增殖培养基中，培养条件为光强25003000LX、光周期10H/D,温度252；培养20D后，至新芽长出并伸长到1CM以上；所述的培养基组成MS6BA06MG/LNAA05MG/LIBA12MG/LKT12MG/L。00425生根培养将步骤4的新芽剪下，转接到生根培养基中，培养条件为光强25003000LX、光。

19、周期12H/D,温度252；培养15D后，生出新根；生根培养基的配方为1/2MSIBA05MG/LPVP10MG/L；00436炼苗和移栽将有生根的白花杜鹃幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗5D后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽装有河沙基质的苗床上，保持温度2025，湿度7080，适当遮荫即可。0044经试验，采用本实施例所育试管苗的苗床移栽成活率为816。0045实施例300461外植体的选取取当年生直径25MM的白花杜鹃枝条为外植体，剪去叶片后剪成23CM的茎段；00472外植体消毒将上述茎段放入盛有自来水的20KHZ超声波清洗中保持温度说明书CN104054577A4/4页735处理35M。

20、IN，然后以自来水冲洗15MIN；随后在超净工作台上以75的酒精消毒35秒，01升汞溶液中处理7分钟，然后以无菌水冲洗5遍，置于无菌培养皿备用；00483初始诱导培养将灭菌后外植体茎段各剪去23MM，茎段按末端向下插入初始诱导培养基中培养，培养条件为光强25003000LX、光周期1014H/D,温度252；培养7D后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养15D至新芽长出；所述的初始诱导培养基组成为MS6BA05MG/LNAA02MG/L；00494增殖培养将步骤3新芽剪下并转接到新芽伸长和增殖培养基中，培养条件为光强25003000LX、光周期10H/D,温度252；。

21、培养20D后，至新芽长出并伸长到1CM以上；所述的培养基组成MS6BA05MG/LNAA03MG/LIBA10MG/LKT10MG/L。00505生根培养将步骤4的新芽剪下，转接到生根培养基中，培养条件为光强25003000LX、光周期12H/D,温度252；培养15D后，生出新根；生根培养基的配方为1/2MSIBA04MG/LPVP8MG/L；00516炼苗和移栽将有生根的白花杜鹃幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗5D后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽装有河沙基质的苗床上，保持温度2025，湿度7080，适当遮荫即可。0052经试验，采用本实施例所育试管苗的苗床移栽成活率为853。说明书CN104054577A。