首页分享爪哇根结线虫Mj

爪哇根结线虫Mj

来源：花匠小妙招时间：2025-01-05 14:51

【摘要】： 爪哇根结线虫(Meloidogyne javanica)是我国最常见的根结线虫之一,可以侵染2000多种植物,在我国南方地区广泛分布,对作物造成了严重的产量损失。爪哇根结线虫在寄生过程中会向寄主植物分泌多种效应蛋白,分离和鉴定这些效应蛋白、明确它们的功能,有助于研究爪哇根结线虫致病的分子机理,为爪哇根结线虫的防治提供理论基础。本文利用同源克隆和SMART RACE的方法,从爪哇根结线虫中成功克隆了两个TTL基因,获得了它们的cDNA和DNA序列,并通过原位杂交、龄期表达和酵母双杂交的方法,初步分析了它们的功能。主要研究结果如下:1.克隆了两个爪哇根结线虫类转甲状腺素蛋白(Transthyretin-like protein,TTL)基因Mj-TTL6和Mj-TTL8。Mj-TTL6 ORF长444 bp,DNA全长1184bp,有2个内含子,预测编码含有148个氨基酸残基的蛋白。在NCBI的EST库中进行比对,与南方根结线虫(M.incognita)EST同源性最高,达97%;BLASTx比对显示与犬弓蛔虫(Toxocara canis)TTL蛋白同源性最高,为58.7%。Mj-TTL8 ORF长423 bp,DNA全长907 bp,有2个内含子,预测编码含有141个氨基酸残基的蛋白。在NCBI的EST库中进行比对,与花生根结线虫(M.areanaria)EST同源性最高,高达98%;BLASTx比对显示与盘尾丝虫(Onchocerca volvulus)TTL蛋白同源性最高,为59.6%。用SignalP4.1 Server分析显示这两个蛋白均具有一个N端信号肽,BLASTx显示它们都含有TTL保守结构域,即TTR-52。TMHMM Server分析显示这两个蛋白均不含有跨膜结构。2.利用贝叶斯方法构建了TTL蛋白的进化树,结果显示不同的TTL蛋白分别以高置信度形成单系分支,其中Mj-TTL6与来自南方根结线虫和花生根结的TTL6蛋白以高置信度(100%)聚在一个分支,Mj-TTL8与另外来自5个根结线虫的TTL8蛋白以高置信度(100%)聚成一个分支,结果表明不同的TTL蛋白可能具有不同的功能。3.原位杂交表明Mj-TTL6在爪哇根结线虫侵染前2龄幼虫的背食道腺特异性表达,Mj-TTL8在爪哇根结线虫侵染前2龄幼虫的亚腹食道腺特异性表达。4.龄期表达结果显示,Mj-TTL6的表达量在爪哇根结线虫卵期很低,在侵染前2龄幼虫阶段明显增加,侵染后显著下降,之后稳步升高,在成熟雌虫阶段达到最大值,表明Mj-TTL6在侵染前J2和雌虫阶段具有特异性作用;Mj-TTL8在卵和幼虫阶段的表达量都较低,侵染后逐步增加,在雌虫阶段达到最大值,表明Mj-TTL8在寄生后期具有特异性作用。5.通过酵母双杂交实验发现,Mj-TTL6可以与拟南芥(Arabidopsis thaliana)叶绿体基因编码的蛋白和糖苷水解酶第二家族蛋白互作,推测其功能可能是通过调节寄主植物的发育或免疫系统来促进寄生;Mj-TTL8可以与拟南芥FK506结合蛋白12互作,推测其功能可能是通过调节植物细胞的DNA含量,进而促进线虫寄生。综上所述,Mj-TTL6和Mj-TTL8是爪哇根结线虫新的分泌效应子,Mj-TTL6在侵染前2龄幼虫和寄生后期阶段发挥作用,Mj-TTL8在寄生后期发挥作用。

【学位授予单位】：华南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018