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土壤微生物的测定方法丨卡文思检测

来源：花匠小妙招时间：2025-01-04 12:40

土壤微生物测定不仅对于科学研究具有重要意义，而且对于农业生产、人类健康和生态环境保护也具有深远的影响‌，确保其测定方法的正确是必不可少的一环，下文简要介绍了几种测定方法。

1、传统方法

① 稀释平板法：是分离和测定土壤中微生物数量和种类比较常用的研究方法，又称平板记数法。它是基于一个基本的假设:即微生物能够在培养基中生长繁殖，而且一个微生物细胞只形成一个菌落。

② 直接显微镜计数法：将土壤悬浮液制成一定厚度的琼脂薄片，染色后在普通显微镜下记数，根据微生物个体大小、数量、密度及干物质含量，计算其生物量，并且根据其形态可以大致判断土壤中真菌和细菌生物量的比例，圆形一般视为细菌，而圆柱形主要是真菌，这个方法称为直接显微镜计数法。其最大的缺点在于计数的难度和费时费力，无法作为土壤微生物量的实验室常规测定方法。

2、熏蒸系列方法

① 熏蒸培养法(FI)：1976年Jenkinson & Powlson(1976)用氯仿熏蒸土壤后再进行培养时，引起CO2的释放量大幅度增加，比没有熏蒸的土壤要高得多，并且发现培养期间CO2的释放量与原来土壤中的微生物量存在着非常显著的相关性，从而通过测定一定培养时间内土壤CO2的释放量，就可以计算土壤微生物量，这就是著名的测定土壤微生物量的熏蒸培养法。熏蒸培养法目前仍广泛地应用于测定土壤微生物量(何振立，1994)。微生物量碳(Bc)用下面公式计算：

Bc=Fc/Kc

式中Fc为熏蒸与不熏蒸土壤在培养期间CO2的释放量的差值.Kc为熏蒸杀死的微生物量中的碳在培养过程中被分解并以CO2释放出来的比例，目前一般都采用 0.45。

② 熏蒸浸提法(FE)：Powlson & Jenkinson(1976)在1976年发现土壤氯仿熏蒸处理后，用0.5mol/L K2SO4浸提液可提取的碳大量增加，并与Fc值呈显著的正相关。Vance et al(1987)创造了直接测定K2SO4浸提液中的碳，并根据与熏蒸培养方法所测定的微生物量之间的关系，来计算土壤微生物量碳：

Bc=Ec/Kc

Ec 为熏蒸与不熏蒸土壤K2SO4提取碳的差值，Kc为熏蒸杀死的微生物量中的碳被K2SO4提取出来的比例，一般为0.38。熏蒸的土壤可提取的N、P、S量也大幅度地增加，通过测定熏蒸与不熏蒸土壤中可提取N、P、S的差值，可计算出土壤中微生物量N、微生物量P和微生物量 S熏蒸浸提方法的最大优点是能够测定酸性土壤、含有大量易分解有机物的土壤和渍水土壤的微生物量，并且可与同位素结合研究土壤的C、N、P、S的循环。

3、底物诱导系列方法

① 基质诱导呼吸方法(SIR)：一般认为土壤中的绝大多数微生物都能够利用葡萄糖，1978年Anderson & Domsch(1978)发现向土壤加入葡萄糖，并进行培养时，其CO2释放量迅速增加，并保持近4个小时不变化，此时的土壤呼吸量称为诱导呼吸量，以FI方法为标准，他们得出:Bc=40.04CO2。

② 精氨酸诱导氨化方法：Alef &Kleiner(1986)在1986年发现土壤中有50多种细菌能够利用精氨酸，作为其碳和氮的来源。当向土壤中加入精氨酸水溶液，并培养一段时间后，土壤中的NH4*-N大量增加，通过测定浸提液中NH4-N的含量，就可以估计土壤微生物量。浸提液中残留的精氨酸将干扰铵的比色分析，应尽量减少其用量，培养时间以2小时为宜。当土壤中含有大量易分解有机物质时，NH4-N产生量极少，多被微生物固定，故该方法不适于此类土壤。

4、生物化学和分子生物学方法

不同的生物体，其细胞壁和原生质的组成成分不一样，通过测定土壤中某些特有成分的含量，就有可能计算出土壤中微生物的生物量。目前用于估计土壤微生物生物量所测定的微生物细胞成分包括ATP、DNA、RNA、磷脂类、脂多糖、二氨基庚二酸、几丁质等。目前比较广泛应用的方法是测定土壤三磷酸腺苷(ATP)的含量，此方法灵敏度高，但受土壤含磷量等因素的影响。

5、比色法

280nm 比色法测定土壤微生物量是由Nunan等(1998)提出的,其基本过程：调节新鲜土样含水量至50%田间持水量,25℃下培养10d,氯仿熏蒸24h后,抽尽氯仿，然后用0.5mol/LK2SO4浸提振荡30min,其中液土比为4:1,而后过滤,滤液在280nm处比色测定。

此法可作为测定同类土壤微生物量的一种简便、快捷、费用低的测定方法。比色法要求浸提后立即进行比色,否则会出现沉淀,影响比色。比色法与土壤微生物量的转换系数需要大量的试验来确定。另外,比色法测得的吸光度可能会由于新鲜底物的加入而增大,因为新形成细胞吸收核酸比例较老细胞多。

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