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一种帝萝花‘璀璨明珠’的茎段高效繁殖方法与流程

来源：花匠小妙招时间：2025-01-04 07:20

本发明属于植物组织培育领域，涉及帝萝花‘璀璨明珠’的茎段离体高效繁殖方法。

背景技术：

帝萝花‘璀璨明珠’是山龙眼科(proteaceae)帝萝花属(telopea)多年生名贵木本观赏植物,其花形独特，花色紫红，花期长，即可用作切花，亦可应用于园林美化。目前，‘璀璨明珠’种苗和切花产品主要依靠进口，价格居高不下，主要原因是繁殖效率低，种苗还没有实现自主生产。

由于‘璀璨明珠’的种子种壳坚硬、具有休眠特性，且种子繁殖后代性状易发生分离；扦插生根率低，所需时间长，使得常规的种子和扦插繁殖方法难以满足产业对种源的需求。组织培养是植物高效生产种苗的一条途径，目前虽然已经有‘璀璨明珠’组织培养相关的研究，但由于常规茎段作为外植体，消毒困难，茎段发芽率低，造成其再生体系建立困难、效率低，故大多以种子为外植体进行组织培养，这样又不可避免会出现后代性状分离的情况。针对一个优良单株，种子繁殖难以保证该单株优良性状的稳定遗传，故有必要发明一种以营养器官为外植体的高效繁殖方法，以实现其组培种苗商业化应用。

技术实现要素：

本发明要解决的技术问题是帝萝花‘璀璨明珠’组培种苗生产中以种子为外植体，使得生产的种苗难以保证母本优良性状的稳定性的问题，目的是提供一种帝萝花‘璀璨明珠’的离体茎段高效繁殖方法及。

为解决以上技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种帝萝花‘璀璨明珠’的茎段高效繁殖方法，具体包括以下步骤：

s1、外植体的选取和消毒，每年春季3～5月间，切取‘璀璨明珠’正在开放的花序上长出的嫩枝，去除叶片、保留叶柄，清洗表面污垢后，剪成长度约为3cm的茎段，每个茎段具2～3个叶柄，流水冲洗并在超净工作台消毒，之后无菌水清洗，随后晾干表面水分；

s2、侧芽诱导培养，茎段消毒完成并充分晾干表面水分后，接种至侧芽诱导培养基ms+6-ba1mg/l+naa0.1mg/l上；

s3、增殖培养，待侧芽长至2～4cm长，将其切下接种在增殖培养基上，进行增殖培养；

s4、生根培养，增殖培养40～50天后，将株高3厘米左右的增殖苗分棵切开，接种到生根培养基。

进一步的，步骤s1中清洗表面污垢具体为用洗衣粉水清洗表面污垢。

进一步的，步骤s1中流水冲洗需要20min。

进一步的，步骤s1中消毒用0.1％的氯化汞溶液浸泡12min，再用无菌水清洗5遍。

进一步的，步骤s3中所述增殖培养基为ms+6-ba0.4mg/l+naa0.05mg/l。

进一步的，步骤s4中所述生根培养基为ms+iba0.75mg/l+naa1mg/l。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明示例的帝萝花‘璀璨明珠’茎段高效繁殖方法，以‘璀璨明珠’花序上长出的嫩枝为外植体，保障了组织培养方法生产的种苗，能够较好保持其母株所具有的优良性状，同时取得了较高的外植体消毒成功率和侧芽萌发率，配以专用的培养基，实现帝萝花‘璀璨明珠’茎段高效繁殖，为产业发展提供种源，摆脱种苗依靠进口的困境。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明的技术方案进行详细阐述：

实施例1

一种帝萝花‘璀璨明珠’茎段高效繁殖方法，包括如下步骤：

s1、外植体的选取和消毒

每年春季3～5月间，切取‘璀璨明珠’正在开放的花序上长出的嫩枝，去除叶片、保留叶柄，用洗衣粉水清洗表面污垢后，剪成长度约为3cm的茎段，每个茎段具2～3个叶柄，流水冲洗20min，在超净工作台消毒。消毒用0.1％的升汞溶液浸泡12min，之后无菌水冲洗5遍。已消毒茎段在超净工作台上晾干表面水分后，进行侧芽诱导培养。

s2、侧芽诱导培养

茎段消毒完成并充分晾干表面水分后，接种至侧芽诱导培养基ms+6-ba(6苄基腺嘌呤)1mg/l+naa(萘乙酸)0.1mg/l上，外植体污染率为21.5％，侧芽萌发率为73％，见表1。

s3、增殖培养

待侧芽长至2～4cm长，将其切下接种在增殖培养基上，进行增殖培养；

其中，增殖培养基包含ms+6-ba(6苄基腺嘌呤)0.4mg/l+naa(萘乙酸)0.05mg/l，其增殖率达663％，平均株高4.32cm，且增殖苗叶色及枝叶生长正常。

s4、生根培养

增殖培养40～50天后，将株高3厘米左右的增殖苗分棵切开，接种到生根培养基。其中，生根培养基为ms+iba(引哚丁酸)0.75mg/l+naa(萘乙酸)1mg/l，生根率70％。

实施例2

外植体消毒验证试验

通过采用s1中的外植体消毒方法及s2的侧芽诱导培养方法，试验不同外植体消毒时间，通过实施例1的外植体消毒方法，及对照组1-3，对照组设置时与实施例1的消毒液浓度及培养基完全相同，只是消毒时间分别设置为10min、14min、16min，验证本发明所采用的外植体消毒方法效果最好。

不同外植体消毒方法的效果如表1所示：

表1

实施例3

基本培养基验证试验

通过采用s3中的增殖培养方法，通过选用不同的基本培养基，通过实施例1的基本培养基，及对照组1-2验证本发明所采用的基本培养基为最优培养基，其中实施例1的培养基为ms+6-ba0.4

mg/l+naa0.05mg/l，对照组1培养基为1/2ms+6-ba0.4mg/l+naa0.05mg/l，对照组2的培养基为wpm+6-ba0.4mg/l+naa0.05mg/l。

不同基本培养基中‘璀璨明珠’的长势效果如表2所示：

表2

其中，spad值是一个反映植株叶绿素含量的指标，spad值与单位叶面积叶绿素含量显著正相关，叶绿素的相对含量可以反映植株叶片的生理状况，spad值越大表明植株生理状况越好。

实施例4

增殖培养基验证试验

通过采用s3中的增殖培养方法，通过选用不同浓度植物激素的培养基，通过实施例1的增殖养基，及对照组1-3验证本发明所采用的增殖培养基为最优培养基，其中实施1所用培养基为ms+6-ba

0.4mg/l+naa0.05mg/l，对照组1所用培养基为ms+6-ba0.8mg/l+naa0.05mg/l，对照组2所用培养基为ms+6-ba1.2mg/l+naa0.05mg/l，对照组3所用培养基为ms+6-ba1.6mg/l+naa0.05mg/l。不同培养基中‘璀璨明珠’的增殖率和株高如表3所示：

表3

实施例5

生根培养基验证试验

通过采用s4中的生根培养方法，选用不同浓度植物激素的培养基，通过实施例1的生根养基，及对照组1-4验证本发明所采用的生根培养基为最优培养基，其中，实施例1的生根培养基为ms+iba

0.75mg/l+naa1mg/l，对照组1的生根培养基为ms+iba0.4mg/l+naa0.5mg/l，对照组2的生根培养基为ms+iba0.8mg/l，对照组3的生根培养基为ms+iba0.2mg/l+naa0.2mg/l，对照组3的生根培养基为ms+naa0.8mg/l。不同生根培养基中‘璀璨明珠’的生根效果如表4所示：

表4

实验结论：‘璀璨明珠’幼嫩枝芽的消毒方法是0.1％的升汞溶液浸泡12min，污染率为21.5％，外植体在ms+6-ba1mg﹒l-1+naa0.1mg﹒l-1培养基上，侧芽萌发率最高为73％，增殖芽生长合适的基本培养基是ms，且增殖的最佳培养基为ms+6-ba0.4mg﹒l-1+

naa0.05mg﹒l-1，增殖率663％；生根的适宜培养基为ms+iba0.75mg﹒l-1+naa1mg﹒l-1，生根率70％。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何不经过创造性劳动想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书所限定的保护范围为准。