植物组织培养外植体的选择与消毒及消毒过程中注意事项

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植物组织培养技术，又称植物组培，是一种利用植物细胞的全能性，通过无菌操作将植物体的某一部分（外植体）接种在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整植株的现代化生物技术。这一技术广泛应用于植物学研究、遗传育种、植物生理、生化以及农业生产等多个领域。然而，植物组培的成功与否，很大程度上取决于外植体的选择和消毒处理。本文将详细探讨植物组培外植体的选择和消毒方法，以及消毒过程中需要注意的事项。

一、植物组培外植体的选择

1、外植体的定义与重要性

外植体是指从植物体上切割下来的、用于植物组织培养的器官或组织片段。它是植物组织培养工作的第一步，也是整个培养过程中最为关键的环节之一。外植体的选择直接影响到后续培养的成功率、培养周期以及培养出的植株的品质。

外植体的采集原则

（1）明确种性特征：

选择具有明确种性特征、种质纯度高、无杂合现象的植株作为取材植株。这是确保培养出的植株具有优良性状的基础。

（2）观察遗传稳定性：

在选择外植体时，需要观察其遗传稳定性、花色、果型、长势等性状表现，以确保培养出的植株能够保持母株的优良性状。

（3）选择健壮无病虫害的植株：

应在长势健壮且无病虫害的植株上选择正常发育的器官或组织作为外植体材料。这些器官或组织的代谢旺盛，再生能力强，接种后更容易培养成功。

2、外植体的采集部位

（1）茎尖部位：

茎尖不仅生长速度快，繁殖率高，不容易发生变异，而且茎尖培养是获得脱毒苗木的有效途径。因此，茎尖是植物组织培养中常用的外植体之一。

（2）节间部位：

大部分果树和花卉等植物的新梢节间部是组织培养的较好材料。新梢节间部位不仅消毒容易，而且脱分化和再分化能力较强，因此也是常用组织培养材料。

（3）叶和叶柄：

叶片和叶柄取材容易，新出的叶片杂菌较少，实验操作方便，是植物组织培养中常用的材料。尤其是近年在植物的遗传转化中，以叶片为试验材料的报道很多。

（4）鳞片：

水仙、百合、风信子等鳞茎类植物常以鳞片为材料。鳞片具有再生能力强、易于消毒等特点，因此也是植物组织培养中常用的外植体之一。

3、外植体的采集时间

一般情况下认为幼年组织比老年组织具有较高的形态发生能力。因此，在采集外植体时，应尽量选择生长旺盛期的植株和部位。同时，还需要根据植物的生长周期和季节变化来确定最佳的采集时间。

例如，花药培养应在花粉发育到单核靠边期取材，这时比较容易形成愈伤组织；

而百合在春夏季采集的鳞茎片，在不加生长素的培养基中可自由地生长、分化，其他季节则不能。

二、植物组培外植体的消毒

1、消毒的目的与意义

外植体消毒是植物组织培养过程中不可或缺的一步。其目的在于去除外植体表面的微生物污染，包括细菌、真菌、病毒等，以确保培养过程中的无菌环境。消毒的彻底与否直接影响到后续培养的成功率和培养出的植株的品质。因此，外植体消毒是植物组织培养技术中的关键环节之一。

2、消毒前的预处理

在进行消毒前，需要对外植体进行预处理。首先，使用流动的自来水或无菌水对外植体进行初步清洗，去除表面的泥土、肥料等杂质。然后，根据外植体的种类和大小，选择合适的洗涤剂（如洗衣粉、洗洁精等）进行浸泡和刷洗，以去除附着在外植体表面的油脂、蜡质等难以清洗的物质。

最后，将清洗后的外植体用无菌水冲洗干净，并晾干备用。

3、消毒方法

（1）酒精消毒：

将外植体浸泡在70%-75%的酒精溶液中，时间通常为30秒至1分钟。酒精能够迅速杀灭大部分细菌和真菌，但需要注意浸泡时间不宜过长，以免对外植体造成损伤。消毒后，用无菌水冲洗外植体2-3次，以去除残留的酒精。

（2）升汞消毒：

对于某些难以消毒的外植体，可以使用0.1%的升汞（氯化汞）溶液进行消毒。但需要注意的是，升汞具有毒性，使用时需严格控制浓度和时间，并在消毒后立即用无菌水冲洗干净。消毒时间一般为5-10分钟，具体根据外植体的种类和大小而定。

（3）次氯酸钠消毒：

次氯酸钠是另一种常用的消毒剂，可以使用0.5%-1%的次氯酸钠溶液浸泡外植体进行消毒。消毒时间根据外植体的种类和大小而定，一般为10-15分钟。次氯酸钠能够迅速杀灭细菌、真菌和病毒等微生物，但需要注意控制消毒时间和浓度，以避免对外植体造成损伤。

（4）紫外线消毒：

紫外线消毒是一种物理消毒方法，可以通过照射紫外线来杀灭外植体表面的微生物。将外植体放置在紫外线灯下照射一定时间（一般为15-30分钟），即可达到消毒的目的。但需要注意的是，紫外线对人体有一定的伤害作用，因此在进行紫外线消毒时需要做好个人防护。

4、消毒后的处理

消毒后的外植体需要立即进行后续处理。首先，用无菌水对外植体进行反复冲洗，以去除残留的消毒剂。冲洗次数一般为3-5次，每次冲洗时间不少于30秒。然后，将冲洗后的外植体放置在无菌滤纸上晾干或用无菌风扇吹干。

在晾干过程中，需要避免外植体长时间暴露在空气中，以减少污染的风险。

最后，将消毒并晾干后的外植体及时接种到培养基上，进行后续的培养操作。

三、植物组培外植体消毒注意事项

1、消毒剂的选择

在选择消毒剂时，需要根据外植体的种类、大小和污染程度来选择合适的消毒剂。不同的消毒剂具有不同的杀菌效果和适用范围。例如，酒精适用于杀灭大部分细菌和真菌；升汞适用于对难以消毒的外植体进行消毒；次氯酸钠则适用于杀灭细菌、真菌和病毒等多种微生物。因此，在选择消毒剂时需要根据实际情况进行综合考虑。

2、消毒时间的控制

消毒时间是影响消毒效果的重要因素之一。消毒时间过短可能导致消毒不彻底，而消毒时间过长则可能对外植体造成损伤。因此，在进行消毒时需要严格控制消毒时间。具体的消毒时间应根据外植体的种类、大小和污染程度来确定。一般来说，消毒时间不宜过长，以免对外植体造成不必要的损伤。

3、消毒过程中的无菌操作

在进行消毒过程中，需要保持操作环境的清洁和无菌。操作人员需要佩戴无菌手套、口罩和帽子等防护用品，以防止交叉污染。同时，在操作过程中需要使用无菌器械和无菌容器等物品，以确保整个消毒过程的无菌性。

4、消毒后的无菌检查

消毒后的外植体需要进行无菌检查，以验证消毒效果。无菌检查可以通过将消毒后的外植体放置在无菌环境中培养一段时间（一般为数天至一周），观察是否有微生物生长来进行。如果发现有微生物生长，则说明消毒不彻底，需要重新进行消毒处理。

5、消毒剂的回收与处理

对于使用过的消毒剂，需要进行回收和处理。特别是对于一些有毒的消毒剂（如升汞），需要严格按照相关规定进行回收和处理，以防止对环境造成污染和对人体造成伤害。

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奥克泰士作为一种创新的消毒解决方案，以其高效广谱的杀菌效果、生态环保、安全无害的特点以及便捷的使用方法，为植物组织培养实验的成功提供了有力保障。

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且使用后不需要对废液复杂处理再进行排放。

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（2）土壤/基质消毒；

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（4）灌溉系统清洗消毒；

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