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怀菊花种质资源玻璃化超低温保存技术研究

来源：花匠小妙招时间：2025-01-04 06:59

怀菊花种质资源玻璃化超低温保存技术研究

【摘要】： 怀菊花[Huaiqing chrysanthemum (Dendranthema morifolium)]是“四大怀药”之一,主产于河南温县、武陟、博爱(古为怀庆府所辖,故名),兼具观赏、药用、食补三大功能。但目前怀菊花种质资源仍采用大田种植保存的方法,方式单一,加上其自身的特点,菊花属于异花授粉,大田种植使其纯度不能保证,长期以来种质混杂,珍贵的种质资源流失严重。20世纪末发展起来的超低温保存技术,是目前长期稳定保存植物种质资源的唯一可行的好方法,它可以节省空间,避免继代、病虫害和气候等因素造成的种质丢失,并且设备简单,操作简便。基于此,我们开展了怀菊花玻璃化法超低温保存种质的技术研究。取得了如下研究结果:1.建立了怀菊花的快繁技术体系。怀菊花试管苗可通过腋生枝型和多芽体发生型两种途径进行繁殖,腋生枝型的最佳快繁培养基为MS+6-BA 0.2 mg·L~(-1) + NAA 0.2 mg·L~(-1);多芽体发生型(带芽茎段和叶片)最佳的培养基为MS+6-BA 1 mg·L~(-1)+NAA 2 mg·L~(-1);试管苗生根的最佳培养基为MS + PP333 0.5 mg·L~(-1)。2.建立了玻璃化法超低温保存怀菊花种质资源的技术体系。继代培养40 d的试管苗,于4℃低温下锻炼7 d,在无菌条件下切取0.5 cm左右的带芽茎段,采用MS培养基添加Glu 0.24 mol·L~(-1) + Gly 0.4 mol·L~(-1)作为预培养基,在4℃下恒定培养3 d,然后将材料用60% PVS2做装载液在室温下装载20 min,然后用改良的PVS2(Gly 30% + EG 15% + DMSO 10%)0℃下脱水60 min,迅速投入液氮保存;在液氮中至少保存1 d后,立即将材料放入40℃水浴中快速化冻1～3 min,化冻后以MS基本培养基添加1.0 mol·L~(-1)和1.2 mol·L~(-1)葡萄糖的梯度洗涤,每次10 min,洗涤后转入再生培养基(同快繁培养基)中,于暗处培养至15 d开始形成愈伤,30 d时转到光下培养,培养至7 d时愈伤开始转绿,至25 d～30 d时芽开始形成,60 d后可长成正常植株,成活率可达80%以上。3.对保存后的再生苗进行了稳定性分析。与常温苗相比,玻璃化超低温保存后的怀菊花再生苗的平均茎节长、株高和叶片数增加值均没有显著差异;叶片的可溶性糖、可溶性蛋白和叶绿素含量也均没有显著的差异;而再生苗叶片的相对电导率、超氧阴离子和丙二醛含量显著降低,SOD和POD活力增强,同工酶谱分析表明,二者的POD、SOD酶谱表现出高度的一致性,但个别谱带的宽窄及亮度存在差异。以上说明,所建立的怀菊花玻璃化超低温保存技术体系,不仅能保持其形态和生理及酶谱的稳定性,而且增强了其抗膜质过氧化的能力。

【学位授予单位】：河南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010