基因替换

基因替换指，根据研究需要，将小鼠的基因替换为其它物种的基因。可以将基因的部分功能区，或者全基因进行替换。1 kb以下的小片段替换，可以采用CRISPR/Cas9策略。对于大片段的基因替换，需要使用ES，或者EPS制备策略才能成功。

图1. 制作基因替换小鼠示意图

1. 技术流程：

打靶载体设计→ 载体构建→ 显微注射(EPS打靶)→ 小鼠鉴定

2. 技术优势：

-CRISPR用于小片段的基因替换。

-ES/EPS用于大片段基因替换。

3. 成功案例：

案例一：C57和BALb/c背景小鼠PD1免疫检查点人源化小鼠的制备

图2. hPD-1小鼠制作策略 蓝框：小鼠的序列；绿框：人的序列

图3. hPD-1小鼠的药效评价

阳性药物Keytruda在人源化PD-1小鼠上表现出明显的抑瘤效果，而且不存在性别差异（雌性和雄性PD-1人源化小鼠），均为理想的体内药效试验模型。

案例二：hLAG3免疫检查点人源化小鼠的制备

图4. hLAG3小鼠hLAG3基因替换策略

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