基于微扦插快速繁殖的铜钱树种苗培育办法和培养基的制作方法

本发明涉及一种铜钱树种苗培育办法和培养基，尤其是一种基于微扦插快速繁殖的铜钱树种苗培育办法和培养基。

铜钱树(paliurnshemsleyanusrehd.)，又名鸟不宿，鼠李科马甲子属落叶乔木，铜钱树嫁接枣树后具有成活率较高、生长快、结果早、抗枣疯病等优点，铜钱树树皮含有鞣质，可提炼栲胶，具有较高的经济价值、生态价值和科研价值，因此基于微扦插快速繁殖的铜钱树种苗培育办法和培养基是一种重要的园艺方法，在现有的基于微扦插快速繁殖的铜钱树种苗培育办法和培养基中，还都是通过铜钱树种子进行育苗，由于铜钱树种子外种壳坚硬，导致种子吸水困难，发芽率低，并且采用种子繁殖的苗木群体变异大，整齐度差，还没有一种基于微扦插快速繁殖的铜钱树种苗培育办法和培养基，能够解决铜钱树种子繁殖种苗中发芽率低、繁殖速度慢的技术问题，实现铜钱树种苗的大规模快速增殖，实现大量、快速、持续获得高质量的铜钱树试管苗。

基于申请人于2018年5月15日的技术交底书和背景技术中现有的技术问题、技术特征和技术效果，做出本发明的申请技术方案。

本发明的客体是一种基于微扦插快速繁殖的铜钱树种苗培育办法，

本发明的客体是一种基于微扦插快速繁殖的铜钱树种苗培养基。

为了克服上述技术缺点，本发明的目的是提供一种基于微扦插快速繁殖的铜钱树种苗培育办法和培养基，因此实现大量、快速、持续获得高质量的铜钱树试管苗。

为达到上述目的，本发明采取的技术方案是：一种基于微扦插快速繁殖的铜钱树种苗培养基，包含有用于种苗母体的茎段长出侧芽的微扦插培养基和用于用于种苗母体的茎段长出根系的生根培养基。

由于设计了微扦插培养基和生根培养基，通过微扦插培养基和生根培养基，使种苗的母体进行分段快速繁育，不再通过铜钱树种子进行直接育苗，因此实现大量、快速、持续获得高质量的铜钱树试管苗。

本发明设计了，还包含有用于培育种苗母体的发芽培养基。

本发明设计了，发芽培养基设置为ms基本培养基、微扦插培养基设置为ms+1～2mg/l6-ba+0.1～0.4mg/liba+30g/l蔗糖，生根培养基设置为1/4ms+0.5～1.5mg/liba+30g/l蔗糖。

本发明设计了，ms(murashigeandskoog)培养基组成：

1/4ms基本培养基组成：

2植物生长调节物质：6－苄基氨基嘌呤(6-ba)，吲哚丁酸(iba)。

3碳源：蔗糖

4无离子水

5琼脂粉。

本发明设计了，一种基于微扦插快速繁殖的铜钱树种苗培育办法，其步骤是：把一至二节的铜钱树幼苗的茎段在微扦插培养基中进行促芽生长，得到中间茎段，把中间茎段在生根培养基中进行促根生长，得到铜钱树种苗。

本发明设计了，其步骤是：

培养条件：培育实验中的所有培养基在灭菌前调ph值到5.8，然后在121℃，1个大气压下高压灭菌20min。培养室培养温度为26±2℃，光照周期为16小时/天，

一、无菌苗的获得：把铜钱树种子放到10％koh溶液中，在温度为25±2℃的室温条件下对铜钱树种子的种皮进行软化处理，在10％koh溶液中的浸泡时间设置为18-22min，软化处理的铜钱树种子用蒸馏水冲洗干净，然后把软化处理的铜钱树种子放到5％的次氯酸钠溶液进行浸泡处理8-12min，无菌水冲洗三至五次后发放到无菌水进行浸种处理，浸种时间设置为24-36h，并挑选吸水膨大的铜钱树种子为培育用铜钱树种子，把培育用铜钱树种子放到70％酒精中进行时间为28-32s的第一次消毒处理，把第一次消毒处理的培育用铜钱树种子放到5％的次氯酸钠溶液中进行时间为8-12min的第二次消毒处理，用无菌水对第二次消毒处理的培育用铜钱树种子冲洗三至五次得到接种用铜钱树种子，把接种用铜钱树种子埋入到发芽培养基中进行培养，等到长成幼苗，培养温度为26±2℃，培养二十至三十天，发芽培养基是ms基本培养基，

二、茎段微扦插：将生长二十至三十天的幼苗切成带一至二节的茎段，将茎段的基部向下插入微扦插培养基中进行培养，等到长出侧芽得到中间茎段，微扦插培养基为ms+1～2mg/l6-ba+0.1～0.4mg/liba+30g/l蔗糖，培养温度为26±2℃，

三、茎段生根：切取生长至2-3cm的中间茎段插入到生根培养基上，先暗培养三至六天，再进行光照培养二十至三十天，使茎段生根即可获得铜钱树种苗，生根培养基为1/4ms+0.5～1.5mg/liba+30g/l蔗糖，培养温度为26±2℃。

本发明设计了，

ms(murashigeandskoog)培养基组成：

1/4ms基本培养基组成：

2植物生长调节物质：6－苄基氨基嘌呤(6-ba)，吲哚丁酸(iba)。

3碳源：蔗糖

4无离子水

5琼脂粉。

本发明设计了，

其步骤是：

无菌苗的获得：将铜钱树种子取出，用10％koh溶液在室温(25℃)的条件下对种皮进行软化处理，之后种子用5％的次氯酸钠溶液处理15min，无菌水冲洗3-5次后进行浸种处理并挑选水收膨大的种子进行下一步操作，挑选出的种子用70％酒精消毒30s，再用5％的次氯酸钠溶液消毒10min，无菌水冲洗3-5次备用，消毒后种子接种到发芽培养基进行培养至长成幼苗，培养温度为26±2℃，培养20-30天。所述发芽培养基是ms基本培养基，

茎段微扦插：将上一个步骤所获得的幼苗切成带1-2节的茎段，将茎段的基部向下插入微扦插培养基中进行培养至长出侧芽，再将侧芽切成带1-2节的茎段，然后将其基部向下插入新鲜的微扦插培养基中进行培养，培养温度为26±2℃；所述微扦插培养基是以ms培养基为基本培养基并附加不同浓度的6-苄氨基腺嘌呤和吲哚丁酸，

茎段生根：将上一个步骤所获得的侧芽接种到生根培养基上，先暗培养3-6天，再进行光照培养20-30天，至茎段生根即可获得铜钱树种苗；所述生根培养基是改良的1/4ms培养基为基本培养基并附加吲哚丁酸。

本发明的技术效果在于：铜钱树微扦插技术操作简单，增殖速度快，能够解决利用铜钱树种子繁殖种苗中发芽率低、繁殖速度慢的问题，实现铜钱树种苗的长期大规模快速增殖，可大量、快速、持续获得高质量的铜钱树试管苗。

在本技术方案中，微扦插培养基和生根培养基为重要技术特征，在基于微扦插快速繁殖的铜钱树种苗培育办法和培养基的技术领域中，具有新颖性、创造性和实用性，在本技术方案中的术语都是可以用本技术领域中的专利文献进行解释和理解。

四、附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明的铜钱树种子萌发、微扦插及移栽情况的效果图，

a：铜钱树种子萌发；b：幼苗生长；c：侧芽萌发；d：移栽后植株。

五、具体实施方式

根据审查指南，对本发明所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语应当理解为不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。

在本发明的描述中，需要说明的是，术语“中心”、“上”、“下”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。此外，术语“第一”、“第二”、“第三”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性。

在本发明的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。

此外，下面所描述的本发明不同实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互结合。

下面结合实施例，对本发明进一步描述，以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。

一种基于微扦插快速繁殖的铜钱树种苗培育办法，本发明的第一个实施例之一，其步骤是：

培养条件：培育实验中的所有培养基在灭菌前调ph值到5.8，然后在121℃，1个大气压下高压灭菌20min。培养室培养温度为26±2℃，光照周期为16小时/天，

一、无菌苗的获得：把铜钱树种子放到10％koh溶液中，在温度为25±2℃的室温条件下对铜钱树种子的种皮进行软化处理，在10％koh溶液中的浸泡时间设置为18-22min，软化处理的铜钱树种子用蒸馏水冲洗干净，然后把软化处理的铜钱树种子放到5％的次氯酸钠溶液进行浸泡处理8-12min，无菌水冲洗三至五次后发放到无菌水进行浸种处理，浸种时间设置为24-36h，并挑选吸水膨大的铜钱树种子为培育用铜钱树种子，把培育用铜钱树种子放到70％酒精中进行时间为28-32s的第一次消毒处理，把第一次消毒处理的培育用铜钱树种子放到5％的次氯酸钠溶液中进行时间为8-12min的第二次消毒处理，用无菌水对第二次消毒处理的培育用铜钱树种子冲洗三至五次得到接种用铜钱树种子，把接种用铜钱树种子埋入到发芽培养基中进行培养，等到长成幼苗，培养温度为26±2℃，培养二十至三十天，发芽培养基是ms基本培养基，

二、茎段微扦插：将生长二十至三十天的幼苗切成带一至二节的茎段，将茎段的基部向下插入微扦插培养基中进行培养，等到长出侧芽得到中间茎段，微扦插培养基为ms+1～2mg/l6-ba+0.1～0.4mg/liba+30g/l蔗糖，培养温度为26±2℃，

三、茎段生根：切取生长至2-3cm的中间茎段插入到生根培养基上，先暗培养三至六天，再进行光照培养二十至三十天，使茎段生根即可获得铜钱树种苗，生根培养基为1/4ms+0.5～1.5mg/liba+30g/l蔗糖，培养温度为26±2℃。

在本实施例中，

ms(murashigeandskoog)培养基组成：

1/4ms基本培养基组成：

2植物生长调节物质：6－苄基氨基嘌呤(6-ba)，吲哚丁酸(iba)。

3碳源：蔗糖

4无离子水

5琼脂粉。

本发明的第一个实施例之二，其步骤是：

培养条件：培育实验中的所有培养基在灭菌前调ph值到5.8，然后在121℃，1个大气压下高压灭菌20min。培养室培养温度为26±2℃，光照周期为16小时/天，

一、无菌苗的获得：把铜钱树种子放到10％koh溶液中，在温度为23℃的室温条件下对铜钱树种子的种皮进行软化处理，在10％koh溶液中的浸泡时间设置为18min，软化处理的铜钱树种子用蒸馏水冲洗干净，然后把软化处理的铜钱树种子放到5％的次氯酸钠溶液进行浸泡处理8min，无菌水冲洗三次后发放到无菌水进行浸种处理，浸种时间设置为24h，并挑选吸水膨大的铜钱树种子为培育用铜钱树种子，把培育用铜钱树种子放到70％酒精中进行时间为28s的第一次消毒处理，把第一次消毒处理的培育用铜钱树种子放到5％的次氯酸钠溶液中进行时间为8min的第二次消毒处理，用无菌水对第二次消毒处理的培育用铜钱树种子冲洗三次得到接种用铜钱树种子，把接种用铜钱树种子埋入到发芽培养基中进行培养，等到长成幼苗，培养温度为24℃，培养二十天，发芽培养基是ms基本培养基，

二、茎段微扦插：将生长二十天的幼苗切成带一至二节的茎段，将茎段的基部向下插入微扦插培养基中进行培养，等到长出侧芽得到中间茎段，微扦插培养基为ms+1mg/l6-ba+0.1mg/liba+30g/l蔗糖，培养温度为24℃，

三、茎段生根：切取生长至2cm的中间茎段插入到生根培养基上，先暗培养三天，再进行光照培养二十天，使茎段生根即可获得铜钱树种苗，生根培养基为1/4ms+0.5mg/liba+30g/l蔗糖，培养温度为24℃。

本发明的第一个实施例之三，其步骤是：

培养条件：培育实验中的所有培养基在灭菌前调ph值到5.8，然后在121℃，1个大气压下高压灭菌20min。培养室培养温度为26±2℃，光照周期为16小时/天，

一、无菌苗的获得：把铜钱树种子放到10％koh溶液中，在温度为27℃的室温条件下对铜钱树种子的种皮进行软化处理，在10％koh溶液中的浸泡时间设置为22min，软化处理的铜钱树种子用蒸馏水冲洗干净，然后把软化处理的铜钱树种子放到5％的次氯酸钠溶液进行浸泡处理12min，无菌水冲洗五次后发放到无菌水进行浸种处理，浸种时间设置为36h，并挑选吸水膨大的铜钱树种子为培育用铜钱树种子，把培育用铜钱树种子放到70％酒精中进行时间为32s的第一次消毒处理，把第一次消毒处理的培育用铜钱树种子放到5％的次氯酸钠溶液中进行时间为12min的第二次消毒处理，用无菌水对第二次消毒处理的培育用铜钱树种子冲洗五次得到接种用铜钱树种子，把接种用铜钱树种子埋入到发芽培养基中进行培养，等到长成幼苗，培养温度为28℃，培养三十天，发芽培养基是ms基本培养基，

二、茎段微扦插：将生长三十天的幼苗切成带一至二节的茎段，将茎段的基部向下插入微扦插培养基中进行培养，等到长出侧芽得到中间茎段，微扦插培养基为ms+2mg/l6-ba+0.4mg/liba+30g/l蔗糖，培养温度为28℃，

三、茎段生根：切取生长至3cm的中间茎段插入到生根培养基上，先暗培养六天，再进行光照培养三十天，使茎段生根即可获得铜钱树种苗，生根培养基为1/4ms+1.5mg/liba+30g/l蔗糖，培养温度为28℃。

本发明的第一个实施例之四，其步骤是：

培养条件：培育实验中的所有培养基在灭菌前调ph值到5.8，然后在121℃，1个大气压下高压灭菌20min。培养室培养温度为26±2℃，光照周期为16小时/天，

一、无菌苗的获得：把铜钱树种子放到10％koh溶液中，在温度为25℃的室温条件下对铜钱树种子的种皮进行软化处理，在10％koh溶液中的浸泡时间设置为22min，软化处理的铜钱树种子用蒸馏水冲洗干净，然后把软化处理的铜钱树种子放到5％的次氯酸钠溶液进行浸泡处理10min，无菌水冲洗四次后发放到无菌水进行浸种处理，浸种时间设置为30h，并挑选吸水膨大的铜钱树种子为培育用铜钱树种子，把培育用铜钱树种子放到70％酒精中进行时间为30s的第一次消毒处理，把第一次消毒处理的培育用铜钱树种子放到5％的次氯酸钠溶液中进行时间为10min的第二次消毒处理，用无菌水对第二次消毒处理的培育用铜钱树种子冲洗四次得到接种用铜钱树种子，把接种用铜钱树种子埋入到发芽培养基中进行培养，等到长成幼苗，培养温度为26℃，培养二十五天，发芽培养基是ms基本培养基，

二、茎段微扦插：将生长二十五天的幼苗切成带一至二节的茎段，将茎段的基部向下插入微扦插培养基中进行培养，等到长出侧芽得到中间茎段，微扦插培养基为ms+1.5mg/l6-ba+0.25mg/liba+30g/l蔗糖，培养温度为26℃，

三、茎段生根：切取生长至2.5cm的中间茎段插入到生根培养基上，先暗培养五天，再进行光照培养二十五天，使茎段生根即可获得铜钱树种苗，生根培养基为1/4ms+1.0mg/liba+30g/l蔗糖，培养温度为26℃。

本发明的第二个实施例，其步骤是：

无菌苗的获得：将铜钱树种子取出，用10％koh溶液在室温(25℃)的条件下对种皮进行软化处理，之后种子用5％的次氯酸钠溶液处理15min，无菌水冲洗3-5次后进行浸种处理并挑选水收膨大的种子进行下一步操作，挑选出的种子用70％酒精消毒30s，再用5％的次氯酸钠溶液消毒10min，无菌水冲洗3-5次备用，消毒后种子接种到发芽培养基进行培养至长成幼苗，培养温度为26±2℃，培养20-30天。所述发芽培养基是ms基本培养基，

茎段微扦插：将上一个步骤所获得的幼苗切成带1-2节的茎段，将茎段的基部向下插入微扦插培养基中进行培养至长出侧芽，再将侧芽切成带1-2节的茎段，然后将其基部向下插入新鲜的微扦插培养基中进行培养，培养温度为26±2℃；所述微扦插培养基是以ms培养基为基本培养基并附加不同浓度的6-苄氨基腺嘌呤和吲哚丁酸，

茎段生根：将上一个步骤所获得的侧芽接种到生根培养基上，先暗培养3-6天，再进行光照培养20-30天，至茎段生根即可获得铜钱树种苗；所述生根培养基是改良的1/4ms培养基为基本培养基并附加吲哚丁酸。

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

一种基于微扦插快速繁殖的铜钱树种苗培养基，本发明的第一个实施例之一，包含有发芽培养基、微扦插培养基和生根培养基。

在本实施例中，发芽培养基设置为ms基本培养基、微扦插培养基设置为ms+1～2mg/l6-ba+0.1～0.4mg/liba+30g/l蔗糖，生根培养基设置为1/4ms+0.5～1.5mg/liba+30g/l蔗糖。

在本实施例中，

ms(murashigeandskoog)培养基组成：

1/4ms基本培养基组成：

2植物生长调节物质：6－苄基氨基嘌呤(6-ba)，吲哚丁酸(iba)。

3碳源：蔗糖

4无离子水

5琼脂粉。

本发明的第一个实施例之二，发芽培养基设置为ms基本培养基、微扦插培养基设置为ms+1mg/l6-ba+0.1mg/liba+30g/l蔗糖，生根培养基设置为1/4ms+0.5mg/liba+30g/l蔗糖。

本发明的第一个实施例之三，发芽培养基设置为ms基本培养基、微扦插培养基设置为ms+2mg/l6-ba+0.4mg/liba+30g/l蔗糖，生根培养基设置为1/4ms+1.5mg/liba+30g/l蔗糖。

本发明的第一个实施例之四，发芽培养基设置为ms基本培养基、微扦插培养基设置为ms+1.5mg/l6-ba+0.25mg/liba+30g/l蔗糖，生根培养基设置为1/4ms+1.0mg/liba+30g/l蔗糖。

本发明的验证试验结果：

无菌苗的获得：

本技术使用10％koh溶液对铜钱树种皮进行软化处理，解决铜钱树种皮比较坚硬，不易吸水膨胀的问题；使用5％次氯酸钠溶液对种子进行初次消毒后，浸种处理后再使用70％的酒精和5％次氯酸钠溶液进行二次消毒，然后接种与发芽培养基，这种分次消毒的方式可以有效控制污染率，将污染率控制再5％以内；并且浸种后挑选明显吸收膨大的种子进行接种，可以有效的提高操作的有效性，提高接种的铜钱树种子的萌芽率。图1-a是铜钱树种子萌发情况；图1-b铜钱树幼苗的生长情况。

茎段微扦插：

将生长20-30天的幼苗切成带1-2节的茎段，将茎段的基部向下插入微扦插培养基中进行培养，一周左右，侧芽开始生长，在培养基ms+2mg/l6-ba+0.1～0.2mg/liba+30g/l蔗糖上，侧芽生长良好，茎伸长明显，并且叶片充分展开(图1-c)。

茎段生根：

取生长至2-3cm侧芽的接种至生根培养基上，先暗培养3-6天，再进行光照培养，在培养基1/4ms+1.0mg/liba+30g/l蔗糖的培养基上生根情况较好，30天左右可获得生根铜钱树种苗。开盖驯化5-7天后进行移栽，移栽后生长情况良好(图1-d)。

本发明具有下特点：

1、由于设计了微扦插培养基和生根培养基，通过微扦插培养基和生根培养基，使种苗的母体进行分段快速繁育，不再通过铜钱树种子进行直接育苗，因此实现大量、快速、持续获得高质量的铜钱树试管苗。

2、由于设计了发芽培养基，通过发芽培养基，得到用于培育的种苗的母体，。

3、由于设计了微扦插快速繁殖，克服了铜钱树的种子发芽低的技术障碍，实现了快速繁育。

4、由于设计了对结构形状进行了数值范围的限定，使数值范围为本发明的技术方案中的技术特征，不是通过公式计算或通过有限次试验得出的技术特征，试验表明该数值范围的技术特征取得了很好的技术效果。

5、由于设计了本发明的技术特征，在技术特征的单独和相互之间的集合的作用，通过试验表明，本发明的各项性能指标为现有的各项性能指标的至少为1.7倍，通过评估具有很好的市场价值。

还有其它的与微扦插培养基和生根培养基相同或相近似的技术特征都是本发明的实施例之一，并且以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为满足专利法、专利实施细则和审查指南的要求，不再对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合的实施例都进行描述。

上述实施例只是本发明所提供的基于微扦插快速繁殖的铜钱树种苗培育办法和培养基的一种实现形式，根据本发明所提供的方案的其他变形，增加或者减少其中的成份或步骤，或者将本发明用于其他的与本发明接近的技术领域，均属于本发明的保护范围。

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