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一种鸟类新鲜粪便的快速采集方法与流程

来源：花匠小妙招时间：2024-12-25 16:35

一种鸟类新鲜粪便的快速采集方法与流程

本发明属于家禽养殖技术领域，具体涉及一种鸟类新鲜粪便的快速采集方法。

背景技术：

出于科学研究或实际养殖需要，现需要对包括禽类(如蛋鸡、蛋鸭等)在内的鸟类进行肠道微生物分析等工作。

如蛋鸡、蛋鸭等蛋禽养殖业中脂肪肝、腹部脂肪沉积、产蛋后期蛋壳质量较差和啄癖等问题比较突出。而大量研究表明肠道微生物群落是一个复杂且多样的生态系统，其在脂肪等营养物质代谢、动物行为及肠道与宿主健康等方面发挥着至关重要的作用。同时，生物节律对于维持宿主的健康也发挥着重要的作用，而鸟类对于光照比较敏感，具有较强的生物节律。正常的肠道微生态系统也维持一定的生物节律，而肠道微生态一旦紊乱将会影响宿主的生物节律和健康。因此，从肠道菌群的角度入手，寻求有效调控蛋禽肠道菌群与宿主节律的手段和策略，对于维持蛋鸡及肠道健康显得尤为重要。

目前，研究蛋禽肠道菌群生物节律需要至少在48h内设定8个时间点采集动物肠道内容物或粪便样本。多采用如下方法：

1、采用屠宰法，但其会增加试验成本，而且每个时间点的采样时间也会拉长，不能很好地反映宿主的生物节律；

2、直接收集排出的粪便，由于其排泄物为固液混合物，排放时间比较随机，极难收集到对应时间点的新鲜粪便样本。而只有对蛋禽(如蛋鸡)的新鲜粪便进行生物学研究才能保证其准确地反映菌群当时的状态及不同时间点的变化规律；

3、用无菌棉拭子从蛋禽泄殖腔黏膜上蘸取少量的粪便用于后续的检测，如在后期提取粪便中的dna用于宏基因组分析，但直接从泄殖腔黏膜上蘸取的样本量极少，无法满足dna分析等检测用量要求。

因此，如何促使鸟类配合采样时间点及时排出足够的新鲜粪便是亟待解决的问题。

技术实现要素：

针对上述技术问题，本发明提供了一种鸟类新鲜粪便的快速采集方法，其利用无菌棉拭子对鸟类泄殖腔产生刺激，促使鸟类及时排出足够的新鲜粪便，以解决在科学研究或生产实践中无法在特定时间点收集足够的鸟类新鲜粪便，以用于后续研究的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

提供了一种鸟类新鲜粪便的快速采集方法，其包括如下步骤：

s1、抓取鸟类；

s2、用手将鸟类翅膀和尾羽捏在一起，并上抬，以露出肛门部分；

s3、采用消毒试剂擦拭鸟类肛门处，以进行消毒；

以及s4、消毒结束后，取无菌棉拭子伸入鸟类肛门中，转动无菌棉拭子，使其斜向下插入泄殖腔内；然后向下按压无菌棉拭子，以通过无菌棉拭子刺激泄殖腔处的肌肉节律性收缩；按压完毕后，新鲜粪便在1-2min内即可迅速排出，实现粪便的快速采集，且同时无菌棉拭子随着新鲜粪便的排出被挤压，以从肛门脱落。

优选的，所述无菌棉拭子插入泄殖腔内约1-2cm处。

优选的，向下按压无菌棉拭子1-5次。

优选的，所述无菌棉拭子整体为杆状结构，包括拭子杆和拭子头。

优选的，通过无菌棉拭子的拭子头刺激泄殖腔处的肌肉节律性收缩。

优选的，所述鸟类新鲜粪便的快速采集方法还包括：s5、将排出的新鲜粪便装入采样容器内，并冷冻保存。

优选的，所述鸟类包括禽类。

优选的，所述禽类包括蛋禽类。

优选的，所述蛋禽类包括蛋鸡、蛋鸭、蛋鹅中的一种或几种。

优选的，所述消毒试剂包括酒精。

与现有技术相比，本发明利用无菌棉拭子对鸟类泄殖腔产生刺激，促使鸟类及时排出足够的新鲜粪便，以实现在特定时间点对鸟类新鲜粪便的快速采集，进而保证后续进行肠道菌群分析等生物学的研究结果的准确性。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明鸟类新鲜粪便的快速采集示意图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

如图1所示，本发明提供的鸟类新鲜粪便的快速采集方法包括如下步骤：

s1、从养殖笼等养殖装置中抓取鸟类，并放置于养殖笼等养殖装置外部或栖息架上；其中，所述鸟类包括禽类，优选包括蛋禽类，所述蛋禽类特别优选包括蛋鸡、蛋鸭、蛋鹅中的一种或几种；且抓取鸟类时动作要轻缓；

s2、通过抚摸等动作安抚鸟类，待其平静后，操作人员用手轻轻将鸟类翅膀和尾羽捏在一起，并上抬，以露出肛门部分；

s3、采用预备好的酒精棉蘸取酒精等消毒试剂，并轻轻擦拭鸟类肛门处，以进行消毒；

s4、消毒结束后，取预备好的无菌棉拭子1伸入鸟类肛门中，轻缓转动无菌棉拭子1，使其斜向下插入泄殖腔2内约1-2cm处，所述无菌棉拭子1整体为杆状结构，包括拭子杆11和拭子头12；然后轻轻向下按压无菌棉拭子11-5次(优选为3次),以通过无菌棉拭子1的拭子头12刺激泄殖腔2处的肌肉节律性收缩；按压完毕后，新鲜粪便在1-2min内即可迅速排出，实现粪便的快速采集，且同时无菌棉拭子1随着新鲜粪便的排出被挤压，以从肛门脱落；

s5、将排出的新鲜粪便装入采样容器(如无菌冻存管等)内，并冷冻保存；如将排出的新鲜粪便先接到一次性无菌培养皿中，再装入无菌冻存管内，迅速投入液氮，带回实验室后-80℃环境下保存待用，以用于后续研究，如进行dna、rna提取以及肠道菌群研究等。

由此，相对于用无菌棉拭子从蛋禽泄殖腔黏膜上蘸取少量粪便的采样方法(以下均为“蘸取法”)而言，本发明具有如下不同之处：

1、蘸取法是用无菌棉拭子在泄殖腔内擦拭，以采集泄殖腔内残留的内容物或少量粪便，其获取的样本量较少，只能用于菌体培养、16srrna等研究，而用于宏基因组或宏转录组研究时，蘸取法提取的粪便样本中很难提取足够量的dna或rna，因此无法满足实验需求；而本发明可随时根据采样需要，随时在特定的时间点通过按压刺激泄殖腔的肌肉，诱发鸟类直接排泄出新鲜粪便即可，且在体外收集到的粪便样本量无疑要远大于蘸取法获得样本量，由此可充分满足后续的各种研究(包括宏基因组或宏转录组研究)，扩大应用范围。

2、蘸取法采样时，样本会粘附在棉拭子上，后续提取dna/rna或用于其它试验时，首先必须要对棉拭子进行预处理，将样本与棉拭子分离才能进行下一步的提取等步骤，由此导致操作繁琐，且分离过程中会导致本来样本量就不够的粪便进一步损失(因为粪便不可避免的会粘附、缠绕在棉拭子上，无法百分百完全分离)，更加无法满足宏基因组或宏转录组研究等的实验需求；而本发明是促使鸟类直接将新鲜粪便排出体外，粪便不与无菌棉拭子1接触，因此无需进行预处理使样本与无菌棉拭子1分离，直接称取粪便用于dna/rna提取、肠道菌群分析等研究即可；

3、近年来组学手段的应用已经成为研究肠道菌群组成、功能和与宿主互作的主流手段，本发明提供的快速采集粪便的方法充分利用鸟类排粪的特点，创造性的通过无菌棉拭子1刺激泄殖腔，从而能够无创、快速、足量的采集到新鲜粪便，突破蘸取法等方法采集的样本无法用于多组学联用的瓶颈，以保证满足代谢组和宏蛋白组等研究所需。

综上所述，本发明利用无菌棉拭子对鸟类泄殖腔产生刺激，促使鸟类及时排出足够的新鲜粪便，以实现在特定时间点对鸟类新鲜粪便的快速采集，进而保证后续进行肠道菌群分析等生物学的研究结果的准确性。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，其描述较为具体和详细，应当理解为本发明并非局限于本文所披露的形式，不应当看作是对其他实施例的排除，而可作出若干的修改和改进，并能够在本文所述构想范文内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域的人员所进行的改动和变化不脱离本发明的范围，则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。