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以花茎为外植体的玉露离体快繁方法与流程

来源：花匠小妙招时间：2024-12-24 03:23

本发明涉及组培技术领域，特别涉及一种以花径为外植体的玉露离体快繁方法。

背景技术：

玉露，是百合科，十二卷属，多年生草本植物，叶片肉质，肥厚饱满。原产于南非，耐干旱，不耐寒，忌高温潮湿和烈日暴晒。玉露幼株多为单生，后逐渐呈群生状，肉质叶呈紧凑的莲座状排列。玉露外形玲珑小巧，种类丰富，叶色晶莹剔透，富于变化，深受国内外花卉爱好者的喜爱，具有十分高的市场需求和经济价值。玉露的传统繁殖方法，多采用播种繁殖，扦插繁殖和分株繁殖。其中，扦插繁殖和分株繁殖为无性繁殖，可以保持植株的性状稳定，但是繁殖周期长，产出效率较低，另外，播种繁殖为有性繁殖，容易使性状产生分离，丢失母本的优良性状，并且幼苗成活率低，以上因素都极大的影响了生产效率和产品质量。植物组织培养即植物离体培养技术，根据植物细胞的全能性，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等)、组织(如形成层、表皮、皮层、胚乳等)或细胞(如大孢子、小孢子、体细胞等)以及原生体，在无菌和适宜的人工培养基及光照、温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，形成完整的植株或产生具有经济价值的其它产品的技术。由植物组织培养所产生的再生植株除了极低的变异外，基本都能保持亲本(外植体来源植株)的优良性状。植株组织培养技术发明以来已经取得了很大的进展。利用植物组织培养技术离体快速繁殖玉露可以大规模产生株型齐整的植株，进一步满足市场需求。本发明提供一种以花径为外植体的玉露离体快繁方法。

技术实现要素：

本发明的目的是为克服传统玉露繁殖方法存在的繁殖速度慢，性状不稳定，成活率低等缺点，提供一种玉露的离体快速繁殖方法，使玉露在相对短的时间内产生大量遗传背景稳定，株型一致的再生植株。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：

以花径为外植体的玉露离体快繁方法，其特征在于包括步骤：

s1，外植体消毒：取玉露植株幼嫩花径的上部或中上部，于无菌环境，先用75％(体积/体积)酒精浸泡消毒30s，再用0.1％(质量/体积)的hgcl2溶液浸泡消毒7min,最后用2％(质量/体积)的次氯酸钠溶液浸泡消毒4min，每次浸泡消毒结束，均用无菌水洗涤；得到无菌外植体；

s2，愈伤组织诱导：将无菌外植体切成0.5cm的小段，接种在愈伤组织诱导培养基上，于黑暗、温度22-25℃条件下进行培养；所述愈伤组织诱导培养基以ms培养基为基础培养基，在每升培养基里面加0.2mgα-萘乙酸、1.5mg6-苄基氨基腺嘌呤、30g蔗糖、调ph至5.8；

s3，愈伤组织的分化：将愈伤组织切成小块后，转接到分化培养基，于温度22-25℃条件下培养30～45天，分化出不定芽；所述分化培养基以ms培养基为基础培养基，在每升培养基里面加0.5mg/l6-苄基氨基腺嘌呤、0.4mg/lα-萘乙酸、0.4mg/l激动素、30g蔗糖，调ph至5.8；

s4，瓶外生根：选择株高大于1.5cm的不定芽，于室温下打开瓶口炼苗2～4天后，取出不定芽用自来水冲去其基部的基质和其它杂质，在浓度为150mg/l的α-萘乙酸中速蘸，然后将不定芽移栽至移植基质内。

本发明的进一步设置为：在s4步骤中，将株高不大于的1.5cm的不定芽转接到壮苗培养基，在温度22-25℃条件下进行壮苗培养，壮苗结束后，重复s4步骤进行移栽；所述壮苗培养基以1/2ms培养基为基础培养基，在每升培养基内加入1mgα-萘乙酸、0.5mg吲哚丁酸、30g蔗糖，调ph至5.8。

本发明的进一步设置为：s4步骤中，所述移植基质为蛭石、椰砖、珍珠岩质量比1:3:1的混合物，含水40-50％。

综上所述，本发明具有以下有益效果：

其一、可在短的时间内产生大量遗传背景稳定，株型一致的再生植株。

其二、本发明使用瓶外生根的方法进行生根培养，生根后可直接进行花盆、大田移栽，大大的缩短了玉露组培苗硬化的时间。

具体实施方式

具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。

实施例，以花径为外植体的玉露离体快繁方法，包括以下步骤：s1，外植体消毒：取玉露植株幼嫩花径的上部或中上部，在超净工作台上，先用75％(体积/体积)酒精浸泡消毒30s，再用0.1％(质量/体积)的hgcl2溶液浸泡消毒7min,最后用2％(质量/体积)的次氯酸钠溶液浸泡消毒4min，每次浸泡消毒结束，均用无菌水洗涤5次；得到无菌外植体；

s2，愈伤组织诱导：将无菌外植体切成0.5cm的小段，接种在愈伤组织诱导培养基上，于黑暗、22-25℃条件下进行培养；所述愈伤组织诱导培养基以ms培养基为基础培养基，在每升培养基里面加0.2mgα-萘乙酸、1.5mg6-苄基氨基腺嘌呤、30g蔗糖，调ph至5.8；

s3，愈伤组织的分化：将愈伤组织切成小块后，转接到分化培养基,在22-25℃条件下培养30～45天，分化出不定芽；所述分化培养基以ms培养基为基础培养基，在每升培养基里面加0.5mg/l6-苄基氨基腺嘌呤、0.4mg/lα-萘乙酸、0.4mg/l激动素、30g蔗糖，调ph至5.8；

s4，瓶外生根：选择株高大于1.5cm的不定芽，于室温下打开瓶口炼苗2～4天后，取出不定芽用自来水冲去其基部的基质和其它杂质，在浓度为150mg/l的α-萘乙酸中速蘸，然后将不定芽移栽至蛭石、椰砖、珍珠岩质量比为1:3:1，含水40-50％的移植基质内；将株高不大于的1.5cm的不定芽转接到壮苗培养基，在22-25℃条件下进行壮苗培养，壮苗结束后，再进行速蘸、移栽；所述壮苗培养基以1/2ms培养基为基础培养基，在每升培养基内加入1mgα-萘乙酸、0.5mg吲哚丁酸、30g蔗糖，调ph至5.8。

技术特征：

技术总结
本发明公开了一种以花茎为外植体的玉露离体快繁方法，本方法以玉露花茎为外植体，外植体经酒精、氯化汞、次氯酸钠消毒以后接种于愈伤组织诱导培养基，获得愈伤组织；愈伤组织转接至分化培养基后得到不定芽，选择株高大于1.5cm的不定芽瓶外生根培养，对于株高不大于1.5cm的，转接到状苗培养基进行壮苗，壮苗结束后进行瓶外生根培养。本发明解决了现有玉露繁殖效率低下等问题，操作较为简单，适合于玉露的规模化生产。

技术研发人员：张青华;许彬;张应华;王薇;许春城
受保护的技术使用者：云南农业大学
技术研发日：2018.06.19
技术公布日：2018.11.06