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一种毛棉杜鹃的繁殖方法

来源：花匠小妙招时间：2024-12-23 17:58

一种毛棉杜鹃的繁殖方法

本发明属于农艺学和植物生物，具体涉及一种毛棉杜鹃的繁殖方法。

背景技术：

1、毛棉杜鹃是常绿高山杜鹃，其花朵较大、颜色艳丽、树形优美，具有较高的观赏价值和调节生态环境的作用。但由于毛棉杜鹃生长周期较长，对生长环境条件要求严苛，导致自然更新能力较弱。因此，开发毛棉杜鹃快繁体系，对于提高毛棉杜鹃成苗率、提高苗株品质具有重要意义。

2、目前，对于毛棉杜鹃的快速繁殖主要依赖于种子繁殖和嫩茎繁殖。关于种子繁殖，专利cn104885932a公开一种毛棉杜鹃的组培快繁方法，其包括如下步骤：a.无菌苗的获得：选取饱满种子包在纱布中，先置于自来水下冲洗2h，用75％酒精浸泡2min，无菌水冲洗5遍，再用0.1％升汞加吐温2滴消毒90s，无菌水冲洗5次，用灭菌滤纸吸干种子表面的残留水分，接种于仅添加了0.6％琼脂、25％蔗糖，ph为5.8的基本培养基中；b.增殖培养：将外植体丛生芽接种于以read培养基为基本培养基的增殖培养基中培养，每60d继代一次；c.生根培养：将增殖培养得到的健壮幼苗切段，接种于以1/2wpm培养基为基本培养基的生根培养基中培养诱导生根。对于种子繁殖方法，毛棉杜鹃通过异株异花授粉，每年只能结一次种子，自我繁殖能力差，且种子储存后，存在发芽率受到影响的问题。关于嫩茎繁殖，专利cn105475138a公开一种毛棉杜鹃的快速繁殖方法，其包括以下步骤：(1)外植体采集与消毒：采集毛棉杜鹃嫩茎，洗净并消毒，剪去变黑部分，放入装入滤纸的无菌培养皿中吸干表面水分，得到无菌外植体；(2)初代培养：将外植体接种至外植体初代诱导培养基中，控制培养条件为：25±1℃、光照8#12h/d、光照强度为1500#2500lx，培养至得到不定芽；(3)增殖培养：将不定芽转移至丛生芽增殖培养基中，培养条件同步骤(2)，培养至得到丛生芽团；(4)丛生芽伸长培养：将丛生芽团切成小块，接种至丛生芽伸长培养基中，培养条件同步骤(2)，进行丛生芽伸长生长；(5)壮苗生根培养：将伸长的丛生芽接种至壮苗生根培养基中，培养条件同步骤(2)，得到生根小苗；(5)炼苗与移栽：将生根小苗开口炼苗，再定植于基质中，浇透水，覆盖农用膜保湿，培养条件同步骤(2)，得到组培苗。对于嫩茎作为外植体进行繁殖，嫩茎的选择具有较为严格的要求，若未及时采集幼嫩的嫩茎，会大大提高褐化的概率。

3、因此，开发一种毛棉杜鹃的繁殖方法，以克服传统的毛棉杜鹃繁殖方法如种子繁殖、扦插等存在自然繁殖率低、植株生长缓慢、对自然环境条件要求高的问题，嫩茎繁殖存在外植体挑选较为严苛，褐化严重的问题，具有重要意义。

技术实现思路

1、为了解决现有技术中的不足，本发明旨在提供一种毛棉杜鹃的繁殖方法，通过毛棉杜鹃离体叶片高效再生的方法，实现毛棉杜鹃叶片组织的快速增殖和分化，提高成苗率。

2、本发明具体技术方案如下：

3、本发明提供一种毛棉杜鹃的繁殖方法，包括如下步骤：

4、(1)外植体的采集与消毒：采集毛棉杜鹃上部展开的嫩叶为外植体，洗净并消毒，使用无菌滤纸吸干叶片表面水分；

5、(2)愈伤诱导：将嫩叶接种于愈伤诱导培养基中，进行愈伤诱导，得到诱导出愈伤的叶片；

6、愈伤诱导培养基包含如下组分：wpm 2.14g/l+庶糖30g/l+抑菌剂ppm 1ml/l+植物凝胶ⅱ型2.6g/l+tdz 0.5mg/l+iba 0.8mg/l，ph＝5.2；

7、(3)愈伤增殖：将诱导出愈伤的叶片置于愈伤增殖培养基中，进行愈伤增值，得到增殖后的包含愈伤的叶片；

8、愈伤增殖培养基包含如下组分：wpm 2.14g/l+庶糖30g/l+抑菌剂ppm 750ml/l+植物凝胶ⅱ型2.6g/l+tdz 0.1mg/l+iba 0.5mg/l；

9、(4)不定芽诱导：将增殖后的包含愈伤的叶片转入丛芽诱导培养基中，进行不定芽诱导，培养至获得丛生芽团；

10、丛芽诱导培养基包含如下组分：wpm 2.14g/l+tdz 0.1mg/l+iba 0.8mg/l+庶糖30g/l+植物凝胶ⅱ型2.6g/l；

11、(5)丛芽伸长：将获得的丛生芽团切割后，接种到丛芽伸长培养基中培养，待丛芽待长至1cm，剥离附近的丛生芽，并重新转接至丛芽伸长培养基中培养，获得壮苗；

12、丛芽伸长培养基包含如下组分：wpm 2.14g/l+庶糖30g/l+植物凝胶ⅱ型2.6g/l+zt 0.5mg/l+ga32 mg/l。

13、进一步地，步骤(1)中外植体叶片的采集与消毒步骤包括：取生长健壮、无病害的毛棉杜鹃实生苗顶部展开的嫩叶为外植体，用自来水冲洗，使用体积分数为75％的乙醇溶液消毒15-25s，期间不停摇动，使嫩叶与乙醇溶液充分接触，然后用无菌水冲洗4-6次，再用质量浓度为3％的次氯酸钠溶液浸泡10-20min，期间放入摇床设置23℃、200rpm、10-20min使嫩叶与次氯酸钠溶液充分接触，然后用无菌水冲洗4-6次，最后用无菌滤纸吸干叶片表面水分。

14、进一步地，步骤(2)中将嫩叶剪成1cm×1cm大小，且四周露出叶片组织，叶片背面与愈伤诱导培养基接触。

15、进一步地，步骤(2)中愈伤诱导的条件：温度为26℃，光照时间为16h/d，光照强度为2000lx。

16、进一步地，步骤(3)中愈伤增殖的条件：温度为26℃，光照时间为16h/d，光照强度为2000lx。

17、进一步地，步骤(4)中不定芽诱导的条件：温度为26℃，光照时间为16h/d，光照强度为2000lx。

18、进一步地，步骤(5)中将获得的丛生芽团切割成1cm×1cm大小的芽团。

19、进一步地，步骤(5)中丛芽伸长中的培养条件：温度为26℃，光照时间为16h/d，光照强度为2000lx。

20、本发明的有益效果为：

21、针对种子繁殖、扦插等存在自然繁殖率低、植株生长缓慢、对自然环境条件要求高的问题，以及嫩茎作为外植体进行毛棉杜鹃快速繁殖方法褐化严重的问题，本发明从外植体取材、培养基成分多个途径进行优化从而提供一种毛棉杜鹃的繁殖方法，实现毛棉杜鹃叶片组织的快速增殖和分化，避免了褐化的问题，大大缩短了培养周期，提高了毛棉杜鹃繁殖效率。具体地：以嫩叶作为外植体，叶片相对更容易获取，且叶片细胞相对于嫩茎细胞更为成熟，具有繁殖速度快、繁殖系数高的优点，一次扩大培养后，平均每个外植体至少产生数十个丛生芽，保持毛棉杜鹃母本植株优良特性，遗传稳定性更好，有利于避免褐化的问题。同时，本发明优化的愈伤诱导培养基、愈伤增殖培养基、丛芽诱导培养基和丛芽伸长培养基可进一步避免褐化问题，提高毛棉杜鹃繁殖效率。

技术特征：

1.一种毛棉杜鹃的繁殖方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的繁殖方法，其特征在于，步骤(1)中外植体叶片的采集与消毒步骤包括：取生长健壮、无病害的毛棉杜鹃实生苗顶部展开的嫩叶为外植体，用自来水冲洗，使用体积分数为75％的乙醇溶液消毒15-25s，期间不停摇动，使嫩叶与乙醇溶液充分接触，然后用无菌水冲洗4-6次，再用质量浓度为3％的次氯酸钠溶液浸泡10-20min，期间放入摇床设置23℃、200rpm、10-20min使嫩叶与次氯酸钠溶液充分接触，然后用无菌水冲洗4-6次，最后用无菌滤纸吸干叶片表面水分。

3.根据权利要求1所述的繁殖方法，其特征在于，步骤(2)中将嫩叶剪成1cm×1cm大小，且四周露出叶片组织，叶片背面与愈伤诱导培养基接触。

4.根据权利要求1所述的繁殖方法，其特征在于，步骤(2)中愈伤诱导的条件：温度为26℃，光照时间为16h/d，光照强度为2000lx。

5.根据权利要求1所述的繁殖方法，其特征在于，步骤(3)中愈伤增殖的条件：温度为26℃，光照时间为16h/d，光照强度为2000lx。

6.根据权利要求1所述的繁殖方法，其特征在于，步骤(4)中不定芽诱导的条件：温度为26℃，光照时间为16h/d，光照强度为2000lx。

7.根据权利要求1所述的繁殖方法，其特征在于，步骤(5)中将获得的丛生芽团切割成1cm×1cm大小的芽团。

8.根据权利要求1所述的繁殖方法，其特征在于，步骤(5)中丛芽伸长中的培养条件：温度为26℃，光照时间为16h/d，光照强度为2000lx。

技术总结
本发明公开了一种毛棉杜鹃的繁殖方法，包括步骤：嫩叶外植体的采集与消毒；愈伤诱导；愈伤增殖；不定芽诱导；丛芽伸长：将获得的丛生芽团切割后，接种到丛芽伸长培养基中培养，待丛芽待长至1cm，剥离附近的丛生芽，并重新转接至丛芽伸长培养基中培养，获得壮苗。本发明以嫩叶作为外植体，叶片相对更容易获取，且叶片细胞相对于嫩茎细胞更为成熟，具有繁殖速度快、繁殖系数高的优点，一次扩大培养后，平均每个外植体至少产生数十个丛生芽，保持毛棉杜鹃母本植株优良特性，遗传稳定性更好，有利于避免褐化的问题。同时，本发明的愈伤诱导培养基、愈伤增殖培养基、丛芽诱导培养基和丛芽伸长培养基可进一步避免褐化问题，提高毛棉杜鹃繁殖效率。

技术研发人员：谢利娟,刘思佳,庄鹏,蔡洪月,彭金根,白宇清
受保护的技术使用者：深圳职业技术大学
技术研发日：
技术公布日：2024/10/10