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一种提高蝴蝶兰繁殖系数的方法.pdf

来源：花匠小妙招时间：2024-12-20 19:11

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1、(10)授权公告号 CN 101874470 B (45)授权公告日 2012.07.04 CN 101874470 B *CN101874470B* (21)申请号 200910219895.7 (22)申请日 2009.11.12 A01H 4/00(2006.01) (73)专利权人大连大学地址 116622 辽宁省大连市经济技术开发区学府大街 10 号 (72)发明人马谦于亚军 (74)专利代理机构大连东方专利代理有限责任公司 21212 代理人李猛 CN 1586165 A,2005.03.02, 全文 . 张伟等 . 蝴蝶兰的组织培养与快速繁殖 .信阳师范学院学报。

2、 .2004, 第 17 卷 ( 第 3 期 ),335-337. 肖丽红等 . 蝴蝶兰组织培养与快速繁殖技术研究进展 .广东农业科学 .2007,( 第 3 期 ),39-42. (54) 发明名称一种提高蝴蝶兰繁殖系数的方法 (57) 摘要本发明属于生物技术领域，具体涉及一种提高蝴蝶兰 Phalaenopsis hybrid 繁殖系数的方法。该方法使用天然物泥炭藓Sphagnum palustre 灭菌后作为培养基质，培养基中不加活性炭和琼脂，定期向泥炭藓基质中注射经抽滤灭菌的低浓度 6BA(6- 苄基腺嘌呤 ) 和 NAA( 萘乙酸 ) 促进原球茎增殖和健康生长分。

3、化；利用了蝴蝶兰具有群居性的生物学特性，适当加大接种密度为2025 个原球茎 /75cm2培养基质面积。获得了较高的增殖率。需要配合无菌操作技术的使用。具有操作简便、节约成本、可重复性好等特点。适用于工厂化生产。 (51)Int.Cl. (56)对比文件审查员吴涛权利要求书 1 页说明书 5 页附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利权利要求书 1 页说明书 5 页附图 1 页 1/1 页 2 1. 一种提高蝴蝶兰繁殖系数的方法，包括以下步骤： 1) 取由花梗诱导出的原球茎为外植体； 2) 将生出的原球茎分离成以一个芽为单位的。

4、小块，接种于培养基质中，接种密度为 20 25 个小块 /75cm2培养基质；所述的培养基质是经 121， 1.0 1.2 个大气压， 15min 灭菌的泥炭藓 (Sphagnum palustre) ； 3) 接种后按下述条件培养：培养温度为 25 2，培养液 pH 值为 5.6 5.8，光照时间为 12 16 小时，光照强度为 2000 2500lux ；每周向其中注射经 121， 1.0 1.2 个大气压， 20min 灭菌的 MS 培养液，用量为 20mL/ 次 /75cm2；注射周期为 1 次 / 周；所述的 MS 培养液为组织培养常用的基本培养基，但。

5、其中，蔗糖含量降为 20g/L，配方中其它成分未作修改，在此基础上再添加 6BA 至 1.0 2.0mg/L ；以及添加 NAA 至 0.1 0.2mg/L ；所述的 6BA 和 NAA 均使用孔径规格为 0.22mm 的无菌滤膜进行抽滤灭菌； 4). 培养 60 天后将组培苗放在自然光下开瓶炼苗 3 4 天后，向温室移栽；步骤 1) 3) 均在无菌环境下进行。 2. 根据权利要求 1 所述的一种提高蝴蝶兰繁殖系数的方法，包括以下步骤： 1) 取由花梗诱导出的原球茎为外植体； 2) 将生出的原球茎分离成以一个芽为单位的小块，接种于培养基质中，接种密度为 25 个以。

6、一个芽为单位的小块 /75cm2培养基质；所述的培养基质是经 121， 1.0 1.2 个大气压， 15min 灭菌泥炭藓 (Sphagnum palustre) ； 3)、接种后按下述条件培养：培养温度为 25 2，培养基 pH 值为 5.6 5.8，光照时间为 12 16 小时，光照强度为 2000 2500lux ；每周向其中注射经 121， 1.0 1.2 个大气压， 20min 灭菌的 MS 培养液，用量为 20mL/ 次 /75cm2；注射周期为 1 次 / 周；所述的 MS 培养液为组织培养常用的基本培养基，但其中，蔗糖含量降为 20g/L，配方。

7、中其它成分未作修改，在此基础上再添加 6BA 至 1.0 2.0mg/L ；以及添加 NAA 至 0.1 0.2mg/L ；所述的 6BA 和 NAA 均使用孔径规格为 0.22mm 的无菌滤膜进行抽滤灭菌； 4). 培养 60 天后将组培苗放在自然光下开瓶炼苗 3 4 天后，向温室移栽；步骤 1) 3) 均在无菌环境下进行。 3. 根据权利要求 1 或 2 所述的一种提高蝴蝶兰繁殖系数的方法，其特征在于： MS 培养液中所使用的蔗糖用市售白砂糖替换。权利要求书 CN 101874470 B 2 1/5 页 3 一种提高蝴蝶兰繁殖系数的方法技术领域 0001 。

8、本发明属于生物技术领域，具体涉及名优花卉蝴蝶兰优良品种繁殖系数的提高。技术背景 0002 蝴蝶兰 Phalaenopsis hybrid 属热带气生兰，生长在热带及亚热带地区的兰科 Orchidaceae 植物，其花姿高雅，株型美观，色彩艳丽，花期持久，在热带中有 “兰花皇后” 之美称，是兰科植物中栽培最广泛、最普及的种类之一，是国际上最具有商业价值的四大观赏热带兰之一，在国内外有广泛的市场。但是，蝴蝶兰的再生能力弱，多采用分株繁殖，繁殖率低且多带病。种子繁殖发芽率又极低，难以满足市场的需求。所以，在国外很早采用组织培养来快速繁殖种苗。但由于蝴蝶兰。

9、为单茎性气生兰，利用茎尖为外植体对母株的伤害较大，浪费较多，所以近几年来随着植物组织培养技术对蝴蝶兰的应用，也较多的利用胚、幼叶、茎尖、根段、花梗及花梗腋芽等多器官作为外植体进行组织培养研究。在近几年的报道也有对原球茎发生和增殖的影响因素的研究。然而，现有关于蝴蝶兰组织培养的专利和文献仅提到培养基配方，通常使用较高浓度的植物激素，这样很容易产生畸形苗；且培养基中均使用活性炭，由于活性炭对于植物激素具有一定的吸附作用，因此繁殖系数往往并不理想，难以满足生产的需要。发明内容 0003 本发明旨在提供一种提高蝴蝶兰繁殖系数的方法。 0004 本发明的具体步。

10、骤如下： 0005 1. 取由花梗诱导出的原球茎为外植体； 0006 2. 将生出的原球茎分离成以一个芽为单位的小块，接种于培养基质中，接种密度为 20 25 个以一个芽为单位的小块 /75cm2培养基质，优选接种密度 25 个以一个芽为单位的小块 /75cm2培养基质； 0007 所述的培养基质是以经高温高压(121， 1.01.2个大气压， 15min)灭菌泥炭藓 (Sphagnum palustre) ； 0008 3、接种后按下述条件培养：培养温度为 25 2，培养基 pH 值为 5.6 5.8，光照时间为 12 16 小时，光照强度为 2000 2500。

11、lux ； 0009 每周向其中注射经抽滤灭菌的 MS 培养液，用量为 20mL/ 次 /75cm2；注射周期为 1 次 / 周；需做高温高压灭菌 (121， 1.0 1.2 个大气压， 20min) 后用无菌注射器在超净工作台上加入。注射方法相当于自然状态下盆栽蝴蝶兰的施肥。 0010 所述的 MS 培养液中与常规 MS(Murashige 和 Skoog， 1962) 培养液的不同之处在于： MS 培养液蔗糖含量降为 20g/L ；在此基础上再添加 6BA(6- 苄基腺嘌呤 ) 至 1.0 2.0mg/L，优选 2.0mg/L ；以及添加 NAA( 萘乙酸 ) 至 0.。

12、1 0.2mg/L ；优选 0.1mg/L ； 0011 MS 培养液中所使用的蔗糖可用市售白砂糖替换； 0012 本发明中所用植物激素 6BA 和 NAA 均使用无菌滤膜 ( 孔径规格为 0.22mm) 进行抽说明书 CN 101874470 B 3 2/5 页 4 滤灭菌。 0013 4. 培养 60 天后将组培苗放在自然光下开瓶炼苗 3 4 天后，向温室移栽。 0014 步骤 1 3 均在无菌环境下进行。 0015 有益效果 0016 本发明具有如下特点： 0017 1. 培养成本降低 ( 不使用活性炭，所需培养瓶数量少，不使用琼脂 )，减少了频繁更换培养基所耗费的。

13、人力和财力。 0018 2. 培养物畸形苗数量减少，繁殖系数增加，苗木移栽成活率提高，能够满足生产上对苗木的要求。 0019 3. 采用自然界中易寻的天然物泥炭藓为培养基，培养基中不加活性炭和琼脂，为气生根呼吸创造了良好的条件，并减少了褐变的发生。 0020 4. 利用了蝴蝶兰具有群居型的生物学特性，适当加大接种密度，获得了较高的增殖率。 0021 5. 该技术重复性强，操作简单。 0022 6. 该技术不受季节限制，在实验室中可以周年使用。 0023 说明书附图 0024 本发明共有附图 1 幅，图 1 为实施例 1 中的原球茎在灭菌泥炭藓基质中培养 60 天的。

14、生长状态。具体实施方式 0025 试验例：一种提高蝴蝶兰繁殖系数的方法，品种为 “红龙” (Dtps.Ben Yu Star Red Dragon )。 0026 1. 取由花梗诱导出的原球茎为外植体； 0027 2. 将生出的原球茎分离成以一个芽为单位的小块，接种于新的培养瓶中，每瓶 (150mL 规格的三角瓶 ) 接种。 0028 3. 培养瓶中的支撑物以灭菌 (121， 1.0 1.2 个大气压， 15min) 泥炭藓为基质，每周向其中添加经高温高压灭菌 (121， 1.0 1.2 个大气压， 20min) 的 MS 液体，所述的 MS 培养液为组织培养常用的基本培养基。

15、，但其中，蔗糖含量降为 20g/L，配方中其它成分未作修改，在此基础上再添加 6BA 以及 NAA ； 0029 所述的 6BA 和 NAA 均使用孔径规格为 0.22mm 的无菌滤膜进行抽滤灭菌； 0030 4. 培养温度为 25 2，培养基 pH 值为 5.6 5.8，光照时间为 12 16 小时，光照强度为 2000 2500lux。 0031 5.60 天后对每组的六瓶原球茎进行编号，统计出芽个数计算增殖系数和统计学分析。见表 2-1。 0032 对每组的六瓶原球茎进行编号，统计出芽个数计算增殖系数和统计学分析， 0033 表 2-1 四种因素水平的正交设计及分。

16、析 0034 说明书 CN 101874470 B 4 3/5 页 5 0035 增殖系数增殖后的原球茎总个数 / 接种的原球茎总个数 0036 极差分析的结果为：四种因素对增殖系数的影响大小顺序为：接种密度 BA NAA 蔗糖。适宜的接种密度为： 20 25 个以一个芽为单位的小块 /75cm2培养基质，优选接种密度25个以一个芽为单位的小块 /75cm2培养基质；适宜的激素浓度为： 1.02.0mg/ L BA、 0.1 0.2mg/L 的 NAA ；适宜的蔗糖浓度为 20g/L。 0037 增殖系数可以达到 4.0 以上，且试管苗健康茁壮，叶片油绿、气生根。

17、粗壮；将组培苗放在自然光下开瓶炼苗 3 4 天后，向温室移栽后成活率高于 80。实施例 1 实施材料品种为 “红龙” (Dtps.Ben Yu Star Red Dragon ) 0038 1. 取由花梗诱导出的原球茎为外植体； 0039 2. 将生出的原球茎分离成以一个芽为单位的小块，接种于培养基质中，接种密度为20个以一个芽为单位的小块/75cm2培养基质；所述的培养基质是以经高温高压(121， 1.0 1.2 个大气压， 15min) 灭菌泥炭藓 (Sphagnum palustre) ； 0040 3、接种后按下述条件培养：培养温度为 25 2，培养基 p。

18、H 值为 5.6 5.8，光照时间为 12 16 小时，光照强度为 2000 2500lux ；每周向其中注射经抽滤灭菌的 MS 培养液，用量为 20mL/ 次 /75cm2；注射周期为 1 次 / 周；需做高温高压灭菌 (121， 1.0 1.2 个大气压， 20min) 后用无菌注射器在超净工作台上加入。注射方法相当于自然状态下盆栽蝴蝶兰的施肥。所述的 MS 培养液中与常规 MS(Murashige 和 Skoog， 1962) 培养液的不同之处在于： MS 培养液蔗糖含量降为 20g/L ；在此基础上再添加 6BA(6- 苄基腺嘌呤 ) 至 2.0mg/ L ；。

19、以及添加 NAA( 萘乙酸 ) 至 0.2mg/L ；所用植物激素 6BA 和 NAA 均使用无菌滤膜 ( 孔径规格为 0.22mm) 进行抽滤灭菌。培养 60 天后将组培苗放在自然光下开瓶炼苗 3 4 天后，向温室移栽。 0041 步骤 1 3 均在无菌环境下进行。说明书 CN 101874470 B 5 4/5 页 6 0042 增殖系数可以达到 4.0 以上，且试管苗健康茁壮，叶片油绿、气生根粗壮；将组培苗放在自然光下开瓶炼苗 3 4 天后，向温室移栽后成活率高于 80。 0043 实施例 2 实施材料品种为 “超群火鸟” (Dtps.Sogo Beach)。

20、 0044 1. 取由花梗诱导出的原球茎为外植体； 0045 2. 将生出的原球茎分离成以一个芽为单位的小块，接种于培养基质中，接种密度为25个以一个芽为单位的小块/75cm2培养基质；所述的培养基质是以经高温高压(121， 1.0 1.2 个大气压， 15min) 灭菌泥炭藓 (Sphagnum palustre) ； 0046 3、接种后按下述条件培养：培养温度为 25 2，培养基 pH 值为 5.6 5.8，光照时间为 12 16 小时，光照强度为 2000 2500lux ；每周向其中注射经抽滤灭菌的 MS 培养液，用量为 20mL/ 次 /75cm2；。

21、注射周期为 1 次 / 周；需做高温高压灭菌 (121， 1.0 1.2 个大气压， 20min) 后用无菌注射器在超净工作台上加入。注射方法相当于自然状态下盆栽蝴蝶兰的施肥。所述的 MS 培养液中与常规 MS(Murashige 和 Skoog， 1962) 培养液的不同之处在于： MS 培养液蔗糖含量降为 20g/L ；在此基础上再添加 6BA(6- 苄基腺嘌呤 ) 至 1.0mg/ L ；以及添加 NAA( 萘乙酸 ) 至 0.1mg/L ；所用植物激素 6BA 和 NAA 均使用无菌滤膜 ( 孔径规格为 0.22mm) 进行抽滤灭菌。培养 60 天后将组培苗放在自然。

22、光下开瓶炼苗 3 4 天后，向温室移栽。 0047 步骤 1 3 均在无菌环境下进行。 0048 增殖系数可以达到 4.0 以上，且试管苗健康茁壮，叶片油绿、气生根粗壮；将组培苗放在自然光下开瓶炼苗 3 4 天后，向温室移栽后成活率高于 80。实施例 3 实施材料品种为 “红龙” (Dtps.Ben Yu Star Red Dragon ) 0049 1. 取由花梗诱导出的原球茎为外植体； 0050 2. 将生出的原球茎分离成以一个芽为单位的小块，接种于培养基质中，接种密度为24个以一个芽为单位的小块/75cm2培养基质；所述的培养基质是以经高温高压(121，。

23、1.0 1.2 个大气压， 15min) 灭菌泥炭藓 (Sphagnum palustre) ； 0051 3、接种后按下述条件培养：培养温度为 25 2，培养基 pH 值为 5.6 5.8，光照时间为 12 16 小时，光照强度为 2000 2500lux ；每周向其中注射经抽滤灭菌的 MS 培养液，用量为 20mL/ 次 /75cm2；注射周期为 1 次 / 周；需做高温高压灭菌 (121， 1.0 1.2 个大气压， 20min) 后用无菌注射器在超净工作台上加入。注射方法相当于自然状态下盆栽蝴蝶兰的施肥。所述的 MS 培养液中与常规 MS(Murashige。

24、和 Skoog， 1962) 培养液的不同之处在于： MS 培养液蔗糖含量降为 20g/L ；在此基础上再添加 6BA(6- 苄基腺嘌呤 ) 至 1.9mg/ L ；以及添加 NAA( 萘乙酸 ) 至 0.1mg/L ；所用植物激素 6BA 和 NAA 均使用无菌滤膜 ( 孔径规格为 0.22mm) 进行抽滤灭菌。培养 60 天后将组培苗放在自然光下开瓶炼苗 3 4 天后，向温室移栽。 0052 步骤 1 3 均在无菌环境下进行。 0053 增殖系数可以达到 4.0 以上，且试管苗健康茁壮，叶片油绿、气生根粗壮；将组培苗放在自然光下开瓶炼苗 3 4 天后，向温室。

25、移栽后成活率高于 80。 0054 实施例 4 实施材料品种为 “超群火鸟” (Dtps.Sogo Beach) 0055 1. 取由花梗诱导出的原球茎为外植体； 0056 2. 将生出的原球茎分离成以一个芽为单位的小块，接种于培养基质中，接种密度说明书 CN 101874470 B 6 5/5 页 7 为23个以一个芽为单位的小块/75cm2培养基质；所述的培养基质是以经高温高压(121， 1.0 1.2 个大气压， 15min) 灭菌泥炭藓 (Sphagnum palustre) ； 0057 3、接种后按下述条件培养：培养温度为 25 2，培养基 pH 值为 5.。

26、6 5.8，光照时间为 12 16 小时，光照强度为 2000 2500lux ；每周向其中注射经抽滤灭菌的 MS 培养液，用量为 20mL/ 次 /75cm2；注射周期为 1 次 / 周；需做高温高压灭菌 (121， 1.0 1.2 个大气压， 20min) 后用无菌注射器在超净工作台上加入。注射方法相当于自然状态下盆栽蝴蝶兰的施肥。所述的 MS 培养液中与常规 MS(Murashige 和 Skoog， 1962) 培养液的不同之处在于： MS 培养液蔗糖含量降为 20g/L ；在此基础上再添加 6BA(6- 苄基腺嘌呤 ) 至 1.1mg/ L ；以及添加 N。

27、AA( 萘乙酸 ) 至 0.2mg/L ；所用植物激素 6BA 和 NAA 均使用无菌滤膜 ( 孔径规格为 0.22mm) 进行抽滤灭菌。培养 60 天后将组培苗放在自然光下开瓶炼苗 3 4 天后，向温室移栽。 0058 步骤 1 3 均在无菌环境下进行。 0059 增殖系数可以达到 4.0 以上，且试管苗健康茁壮，叶片油绿、气生根粗壮；将组培苗放在自然光下开瓶炼苗 3 4 天后，向温室移栽后成活率高于 80。 0060 本发明主要用于蝴蝶兰优良品种 “超群火鸟” (Dtps.Sogo Beach)和 “红龙” (Dtps. Ben Yu Star Red Dragon ) 的组织培养快速繁殖。说明书 CN 101874470 B 7 1/1 页 8 说明书附图 CN 101874470 B 8 。