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一种桂花提取物的提取方法及其产品

来源：花匠小妙招时间：2024-12-20 11:47

一种桂花提取物的提取方法及其产品

1.本发明涉及植物成分提取技术领域，特别是涉及一种桂花提取物的提取方法及其产品。

背景技术：

2.桂花(osmanthus fragrans(thunb.)lour)，属木犀科(oleaceae)木犀属(osmanthus)，又名“月桂”、“木犀”，俗称“桂花树”，为中国传统十大名花之一，具有上千年栽培历史。桂花为常绿灌木或小乔木，温带树种，叶对生，多呈椭圆或长椭圆形；花簇生，花冠分裂至基乳，有乳白、黄、橙红等色。
3.桂花长久以来就是优良的园林绿化树种，除可以作为景观植物外，桂花还具有较高的食用和药用价值，被广泛应用于食品、化妆品及药品中。过去关于桂花中化学成分的研究多集中在精油香气成分的分析方面，近些年随着对桂花的研究深入，桂花中的总酚、总酮及精油物质的提取受到越来越多的关注，此外，还有一些桂花色素清除亚硝酸盐作用及其种皮色素抑菌性的报道。
4.现阶段针对桂花进行提取时，通常采用的是传统浸提、破碎提取等，提取得到的桂花提取物中总酚、总酮的含量偏低，并且提取物的抗氧化性及抑菌效果不理想，仅针对特定菌种(主要是芽孢杆菌、黑曲霉)具有抑制作用，广谱抗菌性差。
5.针对上述现状，提供一种新的桂花提取方法，使提取得到的桂花提取物具有较高的总酚、总酮含量，并具有较强的抗氧化性及广谱抗菌性是亟待解决的技术问题。

技术实现要素：

6.本发明的目的是提供一种桂花提取物的提取方法及其产品，以解决上述现有技术存在的问题，显著提高桂花提取物的总酚、总酮含量，并使其具有较强的抗氧化性及广谱抗菌性。
7.为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
8.本发明提供一种桂花提取物的提取方法，包括以下步骤：
9.(1)将桂花经乙醇超声提取，冷冻干燥得到桂花粗提物；
10.(2)将所述桂花粗提物在甘油水溶液中浸提，浸提结束后，经离心、抽滤后，浓缩得到浓缩液；
11.(3)将所述浓缩液经叔丁醇萃取，然后将萃取后的水相进行乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯相浓缩除去溶剂后，即得所述桂花提取物。
12.进一步地，步骤(1)中超声提取时间为10
‑
30min。
13.进一步地，所述乙醇加入量为所述桂花质量的5
‑
30倍。
14.进一步地，所述甘油水溶液的质量浓度为20
‑
60％。
15.进一步地，所述桂花粗提物与甘油水溶液的料液比为1g:10
‑
50g。
16.进一步地，步骤(2)中浸提时间为6
‑
8h。
17.本发明还提供一种采用上述提取方法提取得到的桂花提取物。
18.本发明公开了以下技术效果：
19.本发明首先利用乙醇溶液对桂花进行粗提，之后利用特定浓度的甘油水溶液对粗提物进行浸提，浸提液依次利用叔丁醇及乙酸乙酯两步萃取后，即可在乙酸乙酯相中得到桂花提取物，该提取物中的总酚、总酮含量高，并且具有较强的抗氧化性及广谱抗菌性。
20.本发明克服了现有提取方法难以提取得到高含量总酚、总酮桂花提取物的难题，且得到的提取物具有极强的抗氧化性和广谱抗菌性，同时提取方法简单、具有极大的推广应用前景。
附图说明
21.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
22.图1为没食子酸标准曲线；
23.图2为芦丁标准曲线；
24.图3为抗坏血酸标准曲线。
具体实施方式
25.现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
26.应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
27.除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
28.在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
29.关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
30.本发明实施例所用桂花为金桂，购于假日吉尔康大药房。
31.实施例1
32.一种桂花提取物的提取方法，步骤如下：
33.(1)将桂花研磨成粉末，称取10g加入反应瓶中，加入5倍质量的95％乙醇超声提取10min，将得到的提取液减压浓缩，除去溶剂，冷冻干燥，得到桂花粗提物；
34.(2)按照料液比10g:100g，将桂花粗提物置于质量浓度为20％的甘油水溶液中，常温浸提6h；浸提完成后，将浸提液移至离心杯中，4000r/min离心5min，收集上层液体，将上层液体转入真空抽滤机进行抽滤，收集滤液置于梨形瓶中，减压浓缩，除去溶剂，得到浓缩液；
35.(3)将得到的浓缩液用2倍质量的水溶解，先用水溶液5倍体积的叔丁醇萃取3次，再用水溶液3倍体积的乙酸乙酯萃取水相3次，将乙酸乙酯相减压浓缩，除去溶剂，得到14ml桂花提取物。
36.实施例2
37.一种桂花提取物的提取方法，步骤同实施例1，区别在于，甘油水溶液质量浓度为40％，得到23ml桂花提取物。
38.实施例3
39.一种桂花提取物的提取方法，步骤同实施例1，区别在于，甘油水溶液质量浓度为60％，得到24ml桂花提取物。
40.实施例4
41.一种桂花提取物的提取方法，步骤如下：
42.(1)将桂花研磨成粉末，称取10g加入反应瓶中，加入30倍质量的95％乙醇超声提取30min，将得到的提取液减压浓缩，除去溶剂，冷冻干燥，得到桂花粗提物；
43.(2)按照料液比10g:200g，将桂花粗提物置于质量浓度为20％的甘油水溶液中，常温浸提7h；浸提完成后，将浸提液移至离心杯中，4000r/min离心5min，收集上层液体，将上层液体转入真空抽滤机进行抽滤，收集滤液置于梨形瓶中，减压浓缩，除去溶剂，得到浓缩液；
44.(3)将得到的浓缩液用8倍质量的水溶解，先用水溶液等体积的叔丁醇萃取3次，再用水溶液5倍体积的乙酸乙酯萃取水相3次，将乙酸乙酯相减压浓缩，除去溶剂，得到38ml桂花提取物。
45.实施例5
46.一种桂花提取物的提取方法，步骤同实施例4，区别在于，甘油水溶液质量浓度为40％，得到59ml桂花提取物。
47.实施例6
48.一种桂花提取物的提取方法，步骤同实施例4，区别在于，甘油水溶液质量浓度为60％，得到74ml桂花提取物。
49.实施例7
50.一种桂花提取物的提取方法，步骤如下：
51.(1)将桂花研磨成粉末，称取10g加入反应瓶中，加入20倍质量的95％乙醇超声提取20min，将得到的提取液减压浓缩，除去溶剂，冷冻干燥，得到桂花粗提物；
52.(2)按照料液比10g:500g，将桂花粗提物置于质量浓度为20％的甘油水溶液中，常温浸提8h；浸提完成后，将浸提液移至离心杯中，4000r/min离心5min，收集上层液体，将上层液体转入真空抽滤机进行抽滤，收集滤液置于梨形瓶中，减压浓缩，除去溶剂，得到浓缩
液；
53.(3)将得到的浓缩液用6倍质量的水溶解，先用水溶液3倍体积的叔丁醇萃取3次，再用水溶液等体积的乙酸乙酯萃取水相3次，将乙酸乙酯相减压浓缩，除去溶剂，得到81ml桂花提取物。
54.实施例8
55.一种桂花提取物的提取方法，步骤同实施例7，区别在于，甘油水溶液质量浓度为40％，得到155ml桂花提取物。
56.实施例9
57.一种桂花提取物的提取方法，步骤同实施例7，区别在于，甘油水溶液质量浓度为60％，得到227ml桂花提取物。
58.对比例1
59.与实施例1不同之处在于，调整甘油浓度为80％。
60.对比例2
61.与实施例1不同之处在于，调整甘油浓度为15％。
62.对比例3
63.与实施例1不同之处在于，不进行步骤(3)的处理过程。
64.对比例4
65.与实施例1不同之处在于，不进行步骤(1)的处理过程，直接以粉碎后的桂花为原料进行甘油水溶液浸提。
66.对比例5
67.与实施例1不同之处在于，将金桂替换为银桂。
68.效果验证例1提取物总酚含量
69.1.制备没食子酸标准曲线
70.对照品没食子酸配成0.1mg/ml的标准溶液，准确量取上述标准液0.00ml、0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.80ml、1.00ml和1.20ml至10.0ml具塞试管中，加入1.00ml的福林酚显色剂，混匀，再加入5.0ml浓度为1mol/l碳酸钠溶液，用蒸馏水定容至刻度，混合均匀，在室温、避光条件下放置1h，测定760nm处的吸光度值，以没食子酸浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。没食子酸标准曲线见图1。
71.2.测定提取物总酚含量
72.准确移取1.00ml待测甘油提取物至10.0ml试管中，按上述方法测定吸光度值，根据吸光度值在没食子酸标准曲线中得出相应的值，样品总酚含量以没食子酸的相对量表示(mg gae/100g)，测定结果见表1。
73.表1
[0074] 总酚含量(mg gae/100g)实施例14.603实施例24.3275实施例34.3385实施例44.349实施例54.2745
实施例64.349实施例74.0155实施例83.777实施例93.5495对比例12.878对比例22.727对比例33.6005对比例43.1015对比例53.627
[0075]
效果验证例2提取物总酮含量
[0076]
1.制备芦丁标准曲线
[0077]
对照品芦丁用甲醇配成0.1mg/ml的标准溶液，精准吸取标准溶液0.0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml，均置于10ml刻度试管中，加入0.3ml 5％亚硝酸钠，摇匀后静置6min，再加入0.3ml10％硝酸铝，摇匀后静置6min，加入4ml 4％氢氧化钠溶液，蒸馏水定容，摇匀后静置15min，在510nm处分别测量吸光值，以芦丁浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。芦丁标准曲线见图2。
[0078]
2.测定提取物总黄酮含量
[0079]
取1.0ml提取物溶液，置于10ml刻度试管中，按上述方法测定吸光度值。根据吸光度值在芦丁标准曲线中得出相应的值，样品总黄酮含量以芦丁的相对含量表示(mg cae/100g)，测定结果见表2。
[0080]
表2
[0081] 总黄酮含量(mg cae/100g)实施例136.525实施例220.6实施例317.15实施例421.025实施例511.325实施例610.575实施例78.35实施例84.825实施例93.725对比例13.3425对比例23.2412对比例33.1890对比例42.7214对比例52.6365
[0082]
效果验证例3提取物总抗氧化性能
[0083]
1.制备标准曲线
[0084]
取0.1ml不同浓度的抗坏血酸标准溶液0％、1％、2％、3％、4％、5％于具塞试管中，
分别加入5ml混合溶液(内含0.6mol/l硫酸、28mmol/l磷酸钠、4mmol/l钼酸铵)中，加塞，95℃水浴加热90min，取出流水冷却至室温，测定695nm波长处吸光度值，绘制标准曲线。抗坏血酸标准曲线见图3。
[0085]
2.提取物总抗氧化性能测定
[0086]
取0.1ml提取物样品溶液于10ml试管中，按上述方法测定吸光度值，在抗坏血酸标准曲线上查得1mg样品相当于vc的量，即：xmgvc/mg样品。结果见表3。
[0087]
表3
[0088][0089][0090]
效果验证例4 dpph自由基清除
[0091]
吸取0.1ml提取物溶液加入3.9ml 1
×
10
‑4mol/l的dpph溶液。从加入dpph溶液开始计时，室温下避光放置90min后，测定517nm波长处吸光度，记为a1。另取0.1ml蒸馏水代替提取物溶液同上操作，吸光度记为a0。按下式计算清除率：
[0092][0093]
结果如表4所示：
[0094]
表4
[0095][0096][0097]
效果验证例5提取物抑菌效果
[0098]
实验用菌株如表5所示：
[0099]
表5
[0100]
菌种名称菌株编号大肠杆菌bncc185254金黄色葡萄球菌bncc186335蜡样芽孢杆菌bncc103930枯草芽孢杆菌bncc109047酵母菌bncc157508黑曲霉bncc186380
[0101]
1.菌株的活化
[0102]
于超净工作台中从菌种平板中分别用接种环将大肠杆菌、金黄葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母菌和黑曲霉挑取一环划线在固体培养基平板上，做好标记，于37℃生化培养箱中倒置培养14h(黑曲霉培养3天)。
[0103]
2.种子液制备
[0104]
从上述活化的大肠杆菌、金黄葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和酵母菌平板上挑取两环菌落接种到50ml液体培养基中，标记，置于37℃恒温培养箱中，转速180r/min震荡培养14h
‑
16h，直至其在分光光度计620nm波长下吸光度达到0.8，停止培养。
[0105]
将活化好的黑曲霉平板用无菌水清洗，收集菌液，用注射器吸取菌液并用针头过滤器过滤菌液，取适量滤液滴于血球计数板上并置于光学显微镜下数菌液孢子数。
[0106]
每毫升细胞数＝每小格细胞平均数
×4×
106×
稀释倍数
[0107]
以孢子数105‑
107的菌液作为种子液。
[0108]
3.样品抑菌效果检测
[0109]
滤纸用打孔器打成0.6cm直径的圆片，装在培养皿中密封灭菌。无菌条件下，用无
菌镊子把滤纸圆片放入样品溶液中浸泡30分钟，备用。
[0110]
在无菌操作下，在每300ml已灭菌的并冷却至55℃的培养基中加入1ml种子菌液，充分摇匀后，倒入无菌的培养皿中，待培养基冷却凝固后，将浸泡样品的滤纸片放在凝固好的测试菌平板中，每个样品做两个平行。静置20分钟后平放37℃恒温培养箱中培养16h后，测量抑菌圈大小。同理处理黑曲霉的抑菌效果。结果见表6(单位：cm)。
[0111]
表6
[0112][0113][0114]
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。