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大豆花叶病毒的摩刷接种方法与流程

来源：花匠小妙招时间：2024-12-19 23:24

本发明涉及大豆花叶病毒的接种方法。

背景技术：

大豆是我国的主要粮油作物。大豆病毒病是四川乃至全国大豆生产中危害最大的病害。其中，又以花叶病毒病(soybeanmosaicvirus，smv)发生最普遍，在各个大豆产区都有发生，严重影响大豆产量和品质；常年造成的产量损失在10％左右，重者可达50％。由于花叶病毒病能通过蚜虫等昆虫传播，其防治药剂极少，培育和推广抗病品种是控制花叶病毒病危害的最有效手段。抗病育种中必须对花叶病毒病的抗病性进行鉴定，抗病性鉴定时又必须对花叶病毒进行接种。大豆花叶病毒的接种技术直接影响到大豆花叶病毒病抗病品种的育种效率和成本。

现有的大豆花叶病毒病的接种方法有常规汁液摩擦接种法、传毒介体接种法。

常规汁液摩擦接种法的做法是：将感病的病叶打碎形成含毒汁液，再加入金刚砂冷冻保存；接种时，将含金刚砂的汁液均匀喷洒在叶面上，用手摩擦带液叶面，在金刚砂的摩擦作用下，使叶面表皮损伤，病毒汁液进入叶片组织，再用水清洗掉叶面汁液，完成接种。接种时手的摩擦按压力度全凭经验，随意性强，误差大，容易接种不上，进而影响抗病性鉴定的准确性和可靠性。

传毒介体接种法则需要先专门饲养无毒的蚜虫等昆虫作为传毒介体，再让传毒介体获取病毒、随后由传毒介体进行传毒；其操作环节多，鉴定条件苛刻，鉴定成本高；传毒过程中很难保证不漏传，会发生漏接，抗病性鉴定的准确性和可靠性同样有待提高。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种大豆花叶病毒的摩刷接种方法，该方法具有操作简便、易于掌握、漏接率低；进而有效提高大豆花叶病毒病抗病育种中的抗病性鉴定的准确性和可靠性，提高育种效率、降低育种成本。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是，一种大豆花叶病毒的摩刷接种方法，其步骤依次为：

a、病毒液的制备：

种植对大豆花叶病毒的抗性为感病的大豆品种—南农1138-2，然后在南农1138-2植株上采集感染大豆花叶病毒的病叶；再将病叶，浓度为0.1m、ph＝7.0的磷酸缓冲液和600目的金刚砂，按质量比1：5～10：0.4～0.6的比例置于研钵中，研成匀浆；最后用纱布过滤，得到病毒液，-80℃冷冻、备用；

b、大豆育苗：将待接种的大豆种子进行育苗，育苗过程中不使用杀菌剂；大豆苗长到1对真叶平展时，即为接种用苗；

c、病毒接种：将刷毛为尼龙丝材质的软毛牙刷消毒，然后用软毛牙刷沾取病毒液，再用软毛牙刷摩刷接种用苗的叶片2～3次；10分钟后，喷洒清水清除叶面上残留的病毒液。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

一、侵染效果好、发病充分、漏接率低：较之人手直接按压摩擦叶面，软毛牙刷的柔软、弹性缓冲作用，能确保叶面承受的按压摩擦力偏差小、使接种的叶片均能造成病菌入侵的伤口，病毒液中的病毒能进入大豆植株体内，实现病毒的有效接种，漏接率低；同时也能使植株受到的伤害小，植株能正常生长并迅速发病。接种时，采用的是逐株相同部位摩刷、逐株摩刷进行接种，也避免了传毒介体接种法在传毒过程中的漏传、漏接。总之，其侵染效果好、发病充分、漏接率低，进而有效提高大豆花叶病毒病抗病育种中的抗病性鉴定的准确性和可靠性，提高育种效率、降低育种成本。

二、接种用苗是培育到1对真叶的豆苗，豆苗大小和长势一致，也保证了所有接种豆苗的伤口程度和接种量一致，接种后发病均匀，进一步保证了提高大豆花叶病毒病抗病育种中的抗病性鉴定的准确性和可靠性和一致性。

三、接种用苗的培育除不使用杀菌剂外，没有特殊要求；接种的软毛牙刷为市售的普遍使用的软毛牙刷，整个过程不需特殊设施设备，也不需特别工艺，操作简便、易于掌握。

四、可进行大量材料的鉴定筛选：由于豆苗接种时较小，只有一对真叶；因此，占地面积小，适宜进行大量材料的抗病鉴定筛选。

接种鉴定试验也证明，用本发明方法接种后、进行的抗病性鉴定结果准确、误差小，重复性及一致性好：对已知抗性的天隆一号(中抗)、南农1138-2(感病)等2个品种，采用本发明方法接种，再进行抗病性鉴定，测出的病情指数分别为29.87～34.65和67.88～73.45，得出2个品种的花叶病毒病抗性分别为中抗和感，鉴定结果与两个品种的已知抗性完全一致。

下面结合实施例对本发明进一步说明。

具体实施方式

实施例一

一种大豆花叶病毒的摩刷接种方法，其步骤依次为：

a、病毒液的制备：

种植对大豆花叶病毒的抗性为感病的大豆品种—南农1138-2，然后在南农1138-2植株上采集感染大豆花叶病毒的病叶；再将病叶，浓度为0.1m、ph＝7.0的磷酸缓冲液和600目的金刚砂，按质量比1:5:0.5的比例置于研钵中，研成匀浆；最后用纱布过滤，得到病毒液，-80℃冷冻、备用；

b、大豆育苗：将待接种的大豆种子进行育苗，育苗过程中不使用杀菌剂；大豆苗长到1对真叶平展时，即为接种用苗；

c、病毒接种：将刷毛为尼龙丝材质的软毛牙刷消毒，然后用软毛牙刷沾取病毒液，再用软毛牙刷摩刷接种用苗的叶片3次；10分钟后，喷洒清水清除叶面上残留的病毒液。

实施例二

一种大豆花叶病毒的摩刷接种方法，其步骤依次为：

a、病毒液的制备：

种植对大豆花叶病毒的抗性为感病的大豆品种—南农1138-2，然后在南农1138-2植株上采集感染大豆花叶病毒的病叶；再将病叶，浓度为0.1m、ph＝7.0的磷酸缓冲液和600目的金刚砂，按质量比1：8：0.6的比例置于研钵中，研成匀浆；最后用纱布过滤，得到病毒液，-80℃冷冻、备用；

b、大豆育苗：将待接种的大豆种子进行育苗，育苗过程中不使用杀菌剂；大豆苗长到1对真叶平展时，即为接种用苗；

c、病毒接种：将刷毛为尼龙丝材质的软毛牙刷消毒，然后用软毛牙刷沾取病毒液，再用软毛牙刷摩刷接种用苗的叶片2次；10分钟后，喷洒清水清除叶面上残留的病毒液。

实施例三

一种大豆花叶病毒的摩刷接种方法，其步骤依次为：

a、病毒液的制备：

种植对大豆花叶病毒的抗性为感病的大豆品种—南农1138-2，然后在南农1138-2植株上采集感染大豆花叶病毒的病叶；再将病叶，浓度为0.1m、ph＝7.0的磷酸缓冲液和600目的金刚砂，按质量比1：10：0.4的比例置于研钵中，研成匀浆；最后用纱布过滤，得到病毒液，-80℃冷冻、备用；

b、大豆育苗：将待接种的大豆种子进行育苗，育苗过程中不使用杀菌剂；大豆苗长到1对真叶平展时，即为接种用苗；

技术特征：

技术总结
一种大豆花叶病毒的摩刷接种方法，其步骤依次为：A、病毒液的制备：种植对大豆花叶病毒的抗性为感病的大豆品种—南农1138‑2，然后在其植株上采集感染大豆花叶病毒的病叶；再将病叶，磷酸缓冲液和金刚砂，按质量比1：5～10：0.4～0.6的比例置于研钵中，研成匀浆；得到病毒液，‑80℃冷冻、备用；B、大豆育苗：大豆种子进行育苗，育苗时不使用杀菌剂；苗长到1对真叶平展时，即为接种用苗；C、病毒接种：将软毛牙刷消毒，然后用软毛牙刷沾取病毒液，再用软毛牙刷摩刷接种用苗的叶片2～3次；随后，喷洒清水清除叶面上残留液。该法操作简便、漏接率低；能有效提高大豆花叶病毒病抗病育种中的抗病性鉴定的准确性和可靠性。

技术研发人员：曾华兰;叶鹏盛;何炼;华丽霞;蒋秋平;张敏;韦树谷;王明娟;黄玲;代顺冬;赖佳
受保护的技术使用者：四川省农业科学院经济作物育种栽培研究所
技术研发日：2018.10.11
技术公布日：2019.01.04