核桃和野核桃MADS

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1 前言

1.1 研究问题的由来

1.2 植物花芽分化研究进展

1.2.1 植物花芽性别分化

1.2.2 植物花芽分化影响因素

1.3 MADS-box基因在植物花发育中的研究

1.3.1 A类基因研究进展

1.3.2 B类基因研究进展

1.3.3 C/D类基因研究进展

1.3.4 E类基因研究进展

1.3.5 其他 MADS-box基因的研究进展

1.4 木本植物 MADS-box家族的研究进展

1.5 核桃属植物 MADS-box家族的研究进展

1.6 研究的目的与意义

1.7 技术路线

2.1 试验材料

2.1.1 植物材料

2.1.2 菌株与载体

2.1.3 抗生素

2.1.4 主要试剂与仪器

2.2 核桃属 MADS-box家族成员鉴定与生物信息学分析

2.2.1 家族成员鉴定与分类

2.2.2 染色体定位分析

2.2.3 蛋白特性研究

2.3 核桃与野核桃中 MADS-box家族成员的筛选与功能验证

2.3.1 核桃 MADS-box家族成员的定量分析

2.3.2 核桃与野核桃目的基因的筛选

2.3.3 目的基因的克隆与超表达载体构建

2.3.4 拟南芥遗传转化

2.3.5 转基因植株的筛选

2.3.6 转基因植株阳性鉴定

2.3.7 转基因植株的表型鉴定

2.3.8 互作蛋白的筛选与酵母双杂交验证

3 结果与分析

3.1 核桃属 MADS-box家族成员鉴定与生物信息学分析

3.1.1 家族成员鉴定与分类

3.1.2 家族成员染色体定位分析

3.1.3 家族成员蛋白特性分析

3.2 核桃与野核桃中 MADS-box家族成员的筛选

3.2.1 核桃雌雄花芽RNA质量检测

3.2.2 核桃 qRT-PCR 与 RNAseq相关性分析

3.2.3 核桃差异基因的确定与表达分析

3.2.4 野核桃目的基因的确定

3.3 目的基因的克隆与超表达载体构建

3.3.1 目的基因PCR 扩增

3.3.2 JrAP1和JcAP1的序列分析

3.3.3 JrAP3和JcAP3的序列分析

3.3.4 JrSEP和JcSEP的序列分析

3.3.5 JrAGL6和JcAGL6的序列分析

3.3.6 目的基因超表达载体的构建

3.3.7 重组质粒转化农杆菌

3.4 拟南芥遗传转化

3.4.1 转基因植株阳性鉴定

3.4.2 转基因植株的表型鉴定

3.5 目的基因的酵母双杂交试验

3.5.1 互作蛋白的筛选

3.5.2 载体构建

3.5.3 诱饵载体的毒性与自激活检测

3.5.4 酵母双杂交验证

4.1 讨论

4.1.1 核桃与野核桃MADS-box家族分析

4.1.2 AP1基因的功能探讨

4.1.3 AP3基因的功能探讨

4.1.4 SEP基因的功能探讨

4.1.5 AGL6基因的功能探讨

4.2 总结与展望

参考文献

附录

致谢

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