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植物组织培养基配制

来源：花匠小妙招时间：2024-12-12 17:27

1、肌醇20 000培养基的配制植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。MS培养基的配制包括以下步骤。培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。这样每次使用时，取其总量的1/20 （50mL）或1/200（5 mL）,加水稀释，制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。大量元素（母液I）mg/ LNH4NO333 000KNO338 000CaCl22H2O8 800MgSO47H2O7 400KH2P

2、O43 400微量元素（母液n ）KI166H3BO31 240MnSO44H2O4 460ZnSO47H2O1 720Na2MoO42H2O50CUSO45H2O5CoCl26H2。5铁盐（母液m）FeSQ 7H2O5 560Na2-EDTA2H2O7 460有机成分（母液IV）IV AIV B烟酸100盐酸毗哆醇（维生素B6）100盐酸硫胺素（维生素Bi）100甘氨酸400以上各种营养成分的用量，除了母液I为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。上述几种母液都要单独配成1L的贮备液。其中，母液I、母液n及母液W的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馆水彻底溶解

3、，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。母液山的配制方法是：将称好的FeSO47H2O和Na2-EDTA2H2O分别放到450 mL蒸馆水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5,最后定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中。各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。MS培养基中还需要加入2, 4-二氯苯氧乙酸（2, 4-D）、荼乙酸（NAA）、6节基喋吟（6BA）等植物生长调节物质，并且分别配成母液（0.1 mg/mL）。其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg,将2, 4-D和NAA用少量（1mL）无水

4、乙醇预溶，将6BA用少量（1 mL）的物质的量浓度为0.1mol/L的NaOH溶液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100 mL,即得质量浓度为0.1 mg/mL的母液。配制培养液用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量：母液I为50mL,母液H、m IVA和IV B各5 mL。再取2,4-D 5mL、NAA1 mL ,与各种母液一起放入烧杯中。配制培养液时应注意：在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制；用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或

5、移液管润洗2次；量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以免出错。溶化琼脂用粗天平分别称取琼脂9 g、蒸糖30 g,放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入蒸馆水750 mL,用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸馆水定容至1 000 mL,搅拌均匀。需要注意的是，在加热琼脂、制备培养基的过程中，操作者千万不能离开，否则沸腾的琼脂外溢，就需要重新称量、制备。此外，如果没有搪瓷量杯，可用大烧杯代替。但要注意大烧杯底的外表面不能沾水，否则加热时烧杯容易炸裂，使溶液外溢，造成烫伤。调p

6、H用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，并随时用精密的pH试纸（5 47 0）测培养基的pH,一直到培养基的pH为5 8为止（培养基的pH必须严格控制在5 8）。培养基的分装溶化的培养基应该趁热分装。分装时，先将培养基倒入烧杯中，然后将烧杯中的培养基倒入锥形瓶（50 mL或100 mL）中。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。锥形瓶中培养基的量约为锥形瓶容量的1/51/4。每1 000 mL培养基，可分装2530瓶。培养基分装完毕后，应及时封盖瓶口。用2块硫酸纸（每块大小约为9 cm9 cm）中间夹1层薄牛皮纸封盖瓶口，并用线绳捆扎。

7、最后在锥形瓶外壁贴上标签。局压火菌培养基的局压火菌包括以下几个步骤。第一，码放锥形瓶。将装有培养基的锥形瓶直立于金属小筐中，再放入高压蒸气灭菌锅内。如果没有金属小筐，可以在两层锥形瓶之间放一块玻璃板隔开。第二，放置其他需要灭菌的物品。将其他需要灭菌的物品也放入高压蒸气灭菌锅内，如装有蒸馆水的锥形瓶、带螺口盖的玻璃瓶、烧杯、广口瓶（以上物品都要用牛皮纸封口），用牛皮纸包裹的培养皿、剪刀、解剖刀、镶子、滤纸、铅笔等。第三，灭菌。待需要灭菌的物品码放完毕，盖上锅盖。在98 kPa121.3 C下，灭菌20 min。灭菌后取出锥形瓶，让其中的培养基白然冷却凝固。最好放置再使用。甘氨酸2M

8、骊养基配方:硝酸钾 KNO3 101.111900硝酸铉 NH4NO3 80.041650磷酸二氢钾KH2PO4 136.09170硫酸镁 MgSO4.7H2O 246.47370氯化钙 CaCl2.2H2O 147.02440硼酸 H3BO3 61.836.2硫酸铤 MnSO4.4H2O223.0122.3微量元素硫酸锌 ZnSO4.7 H2O287.548.6钳酸钠 Na2MoO4.2 H2O 241.950.25硫酸铜 CuSO4.5 H2O 249.680.025氯化钻 CoCl2.62 237.930.025铁盐乙二胺四乙酸二钠Na2.EDTA 372.2537.3硫酸业铁 FeSO

9、24.7H2O 278.0327.8肌醇成分分子量使用浓度(mg/L)碘化钾KI166.010.83100FeSO4 7H2O27.80.10.50.5342.3130g/L数量(mg/l25001502501340.753.0102.00.250.0250.02537.3有机成分盐酸硫胺素 VB1盐酸毗哆醇 VB6烟酸 VB5 或 VPP蔗糖 sucroseB5 培养基的组成和配方组成成分KNO3CaCl2 2H2OMgSO4 7H2O(NH4)2SO4KIH3BO4MnSO4 4H2O微量元素ZnSO4 7H2ONa2MoO 4 2H2OCoCl2 6H2OCuSO4 5H2O铁盐Na2-

10、EDTA烟酸0.5盐酸硫胺素(维 B1)1.0肌醇100烟酸1.0有机成分盐酸毗哆醇1.0盐酸硫铉10N6培养基配方组成成分数量(mg/l )硝酸钾(KN03)2830硫酸铉(NH4SO4)463大量元素氯化钙(CaCl2 - 2HzO)166硫酸镁(MgSO4 7 H20)185磷酸二氢钾(KH2PO4)400硫酸业铁(FeSO4 - 7H20)27.8硫酸铤(MnS04 4H20)4.4微量元素硫酸锌(ZnSO4 7H20)1.6硼酸(H2BO3)0.8碘化钾(KI)1.6甘氨酸2有机成分盐酸毗哆素（维 B6）本发明涉及一种适宜蓝莓试管苗增殖的培养基组合物及其方法，步骤如下：1）培养基包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：（1）基本培养基：WPM,其中白糖 3 Og/L,琼脂 78 g/L, pH5 . 3 ;（2）诱导培养基：WPM + TDZ1.。2. Omg/L+IBAO. 3 0. 5 m g/L ;（3）叶片诱导培养基：WPM + TDZ2.。3. Omg/L;（4）增殖培养基：WPM + TDZ0. 2 0. 5mg/L+IBA0. 1 0. 2 m g/L + GAO.