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一种诱导荷叶铁线蕨孢子体的方法与流程

来源：花匠小妙招时间：2025-09-10 00:39

本发明提供一种荷叶铁线蕨孢子体的诱导培养方法，具体为荷叶铁线蕨孢子体的基质诱导培养方法。

背景技术：

荷叶铁线蕨又名荷叶金线草，属于单叶铁线蕨系，1975年由熊万忠采自四川省万县，1980年由林尤兴定名为新种荷叶铁线蕨，是唯一的单叶型植物。他作为第四纪孑遗植物立刻吸引了各植物学家的眼球，对大陆漂移学说的研究具有重大意义。此外，荷叶铁线蕨还对肾肝及泌尿系统有明显药理作用，在民间采集该植物入药有相当长的历史。目前，民间采集和科研使用甚至商业操作使该种植物面临更大危机。因此高效诱导荷叶铁线蕨孢子体，进行该物种繁育和保护意义重大。

根据1992年12月31日中国科学院植物研究所郭东红；石雷；陈维伦在期刊《植物学通报》“荷叶铁线蕨的无菌培养”一文指出只有在成熟原叶体上滴加lppmba时可诱导抱子体形成，所需时间约半年左右。2010年7月1日重庆文理学院；重庆高校园林花卉工程研究中心张祖荣和张绍彬等在期刊《安徽农业科学》的“桫椤与荷叶铁线蕨的孢子繁殖技术研究”的试验结果表明2种植物从配子体到孢子体的转化率都很低下，最高仅63.1％。2015年2月25日广西壮族自治区玉林市玉州区杨慧才申请的《一种荷叶铁线蕨离体再生体系》的发明专利显示，ggb在ms+0.8mg/lzt+3.0％蔗糖+0.43％琼脂，ph值为5.8的分化培养基上分化率为57.9％，未达到60％，在诱导分化上还有进一步提高的空间。而且，ggb诱导和孢子体萌发均在纯粹无机化学试剂培养基中进行，对试验材料在自然生长基质条件上的探索有限。

技术实现要素：

本发明克服了现有技术中的不足，尤其是孢子体诱导时间过长或诱导率不高的缺点，提供了高效诱导荷叶铁线蕨孢子体的方法，为修复荷叶铁线蕨原有生态环境，进行长江流域环境大保护提供了良好基础。

为顺利高效的将ggb诱导出孢子体，先在ms+1.0mg/l6-ba+0.1mg/lnaa+3.0％蔗糖+0.7％琼脂，ph值为5.5～6.0的培养基对ggb进行分级，在ggb萌发后数量和质量达到试验要求后选择颜色鲜艳，生长旺盛的切成同等大小的团块将其移至孢子体诱导培养基上进行孢子体诱导，具体技术方案如下：

一种诱导荷叶铁线蕨孢子体的方法，包括如下步骤：

(1)荷叶铁线蕨原叶体诱导，将成熟孢子长出原叶体后经诱导培养基培养50-70天后切块；

(2)将步骤(1)切块后的原叶体于孢子体诱导混合基质上进行诱导培养，即可完成荷叶铁线蕨孢子体的诱导步骤。

步骤(1)所述的诱导培养基为ms，1.0mg/l6-ba，0.1mg/lnaa，质量浓度3.0％蔗糖，质量浓度0.7％琼脂组成的混合物，该混合物的ph值为5.5～6.0。

步骤(2)所述的孢子体诱导混合基质包括河沙、泥炭、珍珠岩和蛭石中的至少三种以任意比的混合物。

孢子体诱导混合基质各原料的具体质量配比为河沙：泥炭：珍珠岩＝1：2：1；或河沙：泥炭：蛭石＝1：4：2；或河沙：泥炭：珍珠岩：蛭石＝1：2：1/6：1/4；或河沙：珍珠岩：蛭石＝1：5：3。

本发明所述的诱导荷叶铁线蕨孢子体实用技术优点：

由于自然基质和无土栽培基质在容重、空气空隙度和持水空隙度等方面较无机化学环境具有明显优势，故自然基质和无土栽培基质混合更有利于ggb摆脱对纯无机化学环境的依赖，提早适应自然基质环境，在混合基质中较无机换可缩短孢子体萌发时间5-10天，提高萌发率25-35％，且孢子体能迅速茁壮成长，加速繁殖试验进程。

混合基质中不含任何化学激素成分，尤其在有机质种类含量、腐殖酸含量和离子交换等方面是无机环境无法比拟的，所以能最大程度的保持物种的优良性状，减少培养过程中产生变异，在大规模生产上有着重要意义。

荷叶铁线蕨孢子体萌发成苗后，对野外原始地自然回归，进行生态修复建设和长江大保护都具有现实意义。

附图说明

图1为实施例1荷叶铁线蕨ggb诱导增殖。

图2为实施例1荷叶铁线蕨孢子体诱导。

图3为实施例1荷叶铁线蕨幼苗移栽生长图，左为荷叶铁线蕨幼苗移栽上盆的长势图；右为荷叶铁线蕨幼苗生长旺盛的长势图。

具体实施方式

实施例1

外植体处理、原叶体和ggb诱导

采集当年生成熟孢子消毒后接种在ms+0.5mg/l6-ba+0.1mg/lnaa+3.0％蔗糖+0.7％琼脂，ph值为5.5～6.0初代培养基上，30天左右长出原叶体后进行ggb诱导，诱导培养基为ms+1.0mg/l6-ba+0.1mg/lnaa+3.0％蔗糖+0.7％琼脂，ph值为5.5～6.0；

基质的类型选择和配比

基质的类型和配比是孢子体能否成功诱导关键所在。孢子体诱导混合基质按照一定比例配制好后，加入纯净水进行调和，加水量以基质攥在手里自然成团为宜，基质分装厚度以1-2cm为宜，调和工作完成后在高压灭菌锅灭菌，常用的压力0.15mpa、温度为121℃，灭菌时间20～40min。

所述的混合基质主要有河沙、泥炭、珍珠岩和蛭石四种，具体配比为①河沙：泥炭：珍珠岩＝1：2：1②河沙：泥炭：蛭石＝1：4：2③河沙：泥炭：珍珠岩：蛭石＝1：2：1/6：1/4④河沙：珍珠岩：蛭石＝1：5：3。

试验结果表明，在经过50天左右的诱导培养后孢子体在③河沙：泥炭：珍珠岩：蛭石＝1：2：1/6：1/4的混合基质中诱导率最高，达到81.7％，在④河沙：珍珠岩：蛭石＝1：5：3的混合基质中诱导率最低，仅为56.7％。详细实验结果见下表。

接种后60d在不同混合基质中孢子体诱导情况

技术特征：

技术总结
本发明提供一种诱导荷叶铁线蕨孢子体的方法，包括荷叶铁线蕨原叶体诱导，将成熟孢子长出原叶体后经诱导培养基培养58天后切块；将切块后的原叶体于孢子体诱导混合基质上进行诱导培养，即可完成荷叶铁线蕨孢子体的诱导步骤。所述的诱导培养基为MS，1.0mg/L 6‑BA，0.1mg/L NAA，质量浓度3.0%蔗糖，质量浓度0.7%琼脂组成的混合物，该混合物的pH值为5.5～6.0。所述的孢子体诱导混合基质包括河沙、泥炭、珍珠岩和蛭石中的至少三种。

技术研发人员：张海波;黄桂云;吴笛;张国禹;邱利文;吴锦华;胡梅香;望雄英;马晓波;张俊;张定军;杨兰芳;汪磊;李翩翩;陈会员
受保护的技术使用者：中国长江三峡集团有限公司
技术研发日：2018.06.28
技术公布日：2018.11.30